本发明专利技术公开了一种血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2和校准品，其中，试剂R1包括：缓冲液、界面活性剂、反应促进剂、电解质、稳定剂、抑菌剂；试剂R2包括：缓冲液2、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体、电解质、稳定剂、抑菌剂；校准品包括缓冲液、人α1-抗胰蛋白酶、电解质、稳定剂、抑菌剂。本发明专利技术的优点是：检测快速、检测灵敏率高、线性范围可达4.00g/L、准确度高、试剂稳定。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种血清α1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2和校准品，其中，试剂R1包括：缓冲液、界面活性剂、反应促进剂、电解质、稳定剂、抑菌剂；试剂R2包括：缓冲液2、抗人α1-抗胰蛋白酶抗体、电解质、稳定剂、抑菌剂；校准品包括缓冲液、人α1-抗胰蛋白酶、电解质、稳定剂、抑菌剂。本专利技术的优点是：检测快速、检测灵敏率高、线性范围可达4.00g/L、准确度高、试剂稳定。【专利说明】血清α 1 -抗胰蛋白酶定量检测试剂
本专利技术涉及检测试剂
，尤其是涉及一种血清α 1-抗胰蛋白酶定量检测试剂。
技术介绍
α 1-抗胰蛋白酶(AAT)又称α I胰蛋白酶抑制剂，属于丝氨酸蛋白酶抑制剂家族的成员，为单链糖蛋白，由一条连接3个寡糖链的多肽链组成，分子量约为52kDa，PI值为4.8。作为人体内最重要的蛋白酶抑制物，α 1-抗胰蛋白酶主要由肝细胞合成，在正常的血浆中能抑制90%以上的蛋白酶的活性，其主要能够抑制中性粒弹性蛋白酶，在所有的丝氨酸蛋白酶抑制剂中α 1-抗胰蛋白酶的血管通透性较强，因此α 1-抗胰蛋白酶在肺组织中的浓度比其它丝氨酸蛋白酶抑制因子要高，而且对弹性蛋白酶的专一性更强，主要抑制胰蛋白酶和嗜中性粒细胞弹性蛋白酶的活性，保护正常细胞不受蛋白酶的破坏和损害，可抑制感染和炎症，起到维持机体环境稳定的作用。 α 1-抗胰蛋白酶作为一种重要的急性期反应蛋白，其在正常人体内血清中浓度的参考范围是0.9-2.0g/L，在炎症反应(如:感染性疾病，类风湿疾病)、组织坏死、肿瘤及外伤这些疾病见升高，肝实质细胞炎症的发生通常伴随α 1-抗胰蛋白酶的水平升高；降低见于先天性缺乏症或减少症、严重肝功能障碍、肾病综合征等疾病，研究发现α 1-抗胰蛋白酶的缺乏是一种遗传性疾病，最常见的α 1-抗胰蛋白酶严重缺乏的纯合基因型为PiZZ型，血清中α 1-抗胰蛋白酶水平约为正常人的10%~20%，在慢性阻塞性肺病(COPD)的发病中起着重要作用。因此，快速准确定量检测血清中α 1-抗胰蛋白酶非常重要。目前，α?-抗胰蛋白酶检测的主要方法有:血清胰蛋白酶抑制容量试验、单向免疫扩散法、火箭免疫电泳法和ELISA法，但均存在操作繁琐，耗时长的缺点，不适用于急诊病人和临床病人及时诊断。免疫比浊法具有操作简单、快捷、灵敏，可采用自动生化分析仪快速高通量测定的优点，因此，开发出适合大中小医院以及基层单位临床应用的血清α 1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，将有助于疾病诊断、治疗和预后。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种血清α 1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，它具有灵敏度高、稳定性好，能够适用于自动生化分析仪，且操作简单、检测快速的特点。本专利技术所采用的技术方案是:血清α 1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2和校准品，所述-试剂Rl包括:ρΗ5.0-9.0的缓冲液20_500mM、界面活性剂0.01-2.0g/L、反应促进剂 0.1-12.0g/L、电解质 50-500mM、稳定剂 0.1-20.0g/L、抑菌剂 0.1-10.0g/L ；-试剂R2包括:pH6.0-9.0的缓冲液20_300mM、抗人α 1-抗胰蛋白酶抗体2.0-100.0g/L、电解质 50-500mM、稳定剂 0.1-20.0g/L、抑菌剂 0.1-10.0g/L ；-校准品包括:pH6.0-9.0的缓冲液20_300mM、人α 1-抗胰蛋白酶3.00-6.00g/L、电解质 50-500mM、稳定剂 0.1-20.0g/L、抑菌剂 0.1-10.0g/L。所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、PIPES缓冲液中的一种。所述抗人α 1-抗胰蛋白酶抗体为羊抗人多克隆抗体或兔抗人多克隆抗体。所述界面活性剂为Tween20、Tween40、Span20、Span40、Span80、TritonX-1OO 中的一种。所述反应促进剂为聚乙二醇1500、聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000中的一种。所述电解质为钠离子、钾离子、镁离子、钙离子中一种或多种。所述稳定剂为牛血清白蛋白、明胶、丙三醇、蔗糖、葡萄糖中的一种。所述抑菌剂为叠氮钠、山梨酸钾、Proclin200、Proclin300、庆大霉素中的一种。本专利技术中:试剂Rl提供了 α 1-抗胰蛋白酶抗原和抗体形成网状抗原抗体结构的液体环境，具有能使抗原抗体反应稳定平稳的特点；试剂R2具有使特定浓度抗体在2-8°C保存条件下抗原反应性稳定保存的特点。尤其是抗人α 1-抗胰蛋白酶抗体能够与α 1-抗胰蛋白酶抗原特异性反应， 对于其他抗原无交叉反应性，而抗体为羊抗人多克隆抗体或兔抗人多克隆抗体。该校准品中人α 1-抗胰蛋白酶提纯自人血浆。校准品可以为高浓度单点校准品，也可以为含系列浓度梯度的多点校准品。在具体使用时，该血清α 1-抗胰蛋白酶定量检测试剂采用免疫透射比浊法，反应原理为样本中的α 1-抗胰蛋白酶与试剂中相应抗体(抗人α 1-抗胰蛋白酶抗体)在液相中相遇，结合成抗原-抗体复合物，形成一定的浊度。该浊度的高低在足量抗体存在时与样本中AAT的浓度成比例，将吸光度变化与已知浓度的校准品比较，可以定量得出样品中血清α 1-抗胰蛋白酶的含量。其中，血清α 1-抗胰蛋白酶定量检测试剂实验参数为:检测波长:340nm；V 样本:VRl:VR2=10y 1:250 μ 1:83 μ I ；操作步骤:样本和试剂Rl混匀后37°C孵育3_5min，读取第I读数点吸光度A 1，随即加入试剂R2，混匀后37°C孵育5min，读取第2读数点吸光度A2，计算A2-A I差值，根据校准曲线计算样本中α 1-抗胰蛋白酶含量；结果计算:将单点高浓度校准品倍比稀释成6个梯度(包括零点校准品)或采用多点梯度校准品定标，以梯度校准液各点的吸光度变化值(Α校准-A空白)对其相应浓度做图，绘制定标曲线。根据样品的(Α样品-A空白)值在定标曲线上求得样品中血清α?-抗胰蛋白酶的含量。综上，本专利技术所具有的优点是:1、检测快速:采用自动生化分析仪操作，可与其他检测项目同时进行，每个样本检测时间缩短到IOmin内，检测快速简便。2、检测灵敏率高:试剂缓冲液、界面活性剂等成分的配比提高了反应的灵敏度，对于α 1-抗胰蛋白酶缺乏的样本尤为重要。3、线性范围可达4.00g/L,正常人群参考范围为0.9-2.0g/L，满足临床需要。4、准确度高:采用优化的试剂配比，并且采用多点定标制定校准曲线，测定样本值准确度高。5、试剂稳定:试剂各成分配比优化，试剂在2-8°C密闭条件下可稳定18个月。【具体实施方式】实施例1血清α 1-抗胰蛋白酶定量检测试剂，包括试剂R1、试剂R2和校准品。具体的:试剂Rl包括:ρΗ5.0的缓冲液20mM、界面活性剂0.01g/L、反应促进剂0.lg/L、电解质50mM、稳定剂0.lg/L、抑菌剂0.lg/L。试剂R2包括:pH6.0的缓冲液20mM、抗人α 1-抗胰蛋白酶抗体2.0g/L、电解质50mM、稳定剂0.lg/L、抑菌剂缓冲液0.lg/L。校准品包括:pH6.0的缓冲液20mM、人α 1-抗胰蛋白酶3.00g/L、电解质50mM、稳定剂0.lg/L、抑菌剂0.l本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：卓伟奇，许国和，范翠翠，胡露群，
申请(专利权)人：宁波普瑞柏生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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