一种利用猪小肠制备肝素钠的方法技术

本发明专利技术公开了一种从猪小肠粘膜中分离出生化药物的制备方法，特别公开了一种利用猪小肠制备肝素钠的方法。该利用猪小肠生产肝素钠的制备方法，其特征是：包括如下步骤：肠粘膜的制备、酶解、吸附、洗脱、沉淀脱盐和脱水干燥即得肝素钠。因此，本发明专利技术的有益效果是：收率高，肝素钠活性损失小，质量稳定，废液排放无污染且能循环使用，采用车间废气净化处理装置，解决了肝素钠车间气味恶臭的问题：利用旧工艺生产1亿个单位的肝素钠，需要2000-2400根猪小肠，而利用本发明专利技术的制备方法生产1亿个单位的肝素钠，只需要1400-1600根猪小肠，且肝素钠效价和洁性都有大幅度提高，从而使生产成本大大降低，利润可提高40％以上。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种从猪小肠粘膜中分离出生化药物的制备方法，特别公开了。该利用猪小肠生产肝素钠的制备方法，其特征是：包括如下步骤：肠粘膜的制备、酶解、吸附、洗脱、沉淀脱盐和脱水干燥即得肝素钠。因此，本专利技术的有益效果是：收率高，肝素钠活性损失小，质量稳定，废液排放无污染且能循环使用，采用车间废气净化处理装置，解决了肝素钠车间气味恶臭的问题：利用旧工艺生产1亿个单位的肝素钠，需要2000-2400根猪小肠，而利用本专利技术的制备方法生产1亿个单位的肝素钠，只需要1400-1600根猪小肠，且肝素钠效价和洁性都有大幅度提高，从而使生产成本大大降低，利润可提高40％以上。【专利说明】
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及到一种用猪小肠制备肝素钠的方法。
技术介绍
肝素是一种广泛存在于哺乳动物组织中的黏多糖，主要存在与肥大细胞中，具有抗凝血作用，被广泛用于手术和脑血栓、心肌梗死等的治疗。肝素的分子量大约3000-37500，对商品肝素的研究提示至少有21种分子个体。肝素钠是肝素的钠盐。肝素钠作为天然抗凝血物质受到世界各国的重视。也是我国主要的出口药物之一。随着研究的深入，人们发现肝素钠不但有抗凝、抗血栓形成和调节血脂的作用，还具有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌等功能。目前，肝素钠主要是从猪、羊小肠黏膜和牛肺、盹肠衣盐水等中提取。研究显示肝素钠是在猪小肠粘膜中含量最高。肝素钠粗品是我国的传统出口产品，在国际上占有重要的地位。但是传统生产工艺落后，肝素钠产率低，肝素钠产品质量不稳定，生产过程中资源浪费严重，污染环境严重。
技术实现思路
本专利技术为了弥补现有技术的不足，提供了一种收率高、肝素钠活性损失小的利用猪小肠生产肝素钠的制备方法。专利技术是通过如下技术方案实现的:一种利用猪小肠生产肝素钠的制备方法，其特征是:包括如下步骤:(I)肠粘膜的制备`:在猪小肠内灌入清水，用肠衣机挤压出小肠粘膜至粘膜池；(2)酶解:用粘膜泵将粘膜从粘膜池打入酶解罐中，往酶解罐中加水，粘膜与水的重量比为1: 7-9，搅拌均匀后加入2709碱性蛋白酶调节PH值为8-9，加热使温度达到550C _60°C，再加入重量百分比为3% -5%的肠衣专用盐，测其盐度达到2% -2.5%，保温2-3小时，继续加热使温度达到80°C -85°C，保温30-40分钟后，用80目尼龙布过滤，收集过滤液；(3)吸附:将上述过滤液打入吸附罐中，搅拌，待温度降到58°C _60°C时加入树脂，搅拌8-10小时，继续冷却到40°C -45°C，放出废液，收集过滤树脂；(4)洗脱:(4-1):将收集的树脂反复冲洗后倒入洗脱器中，加入质量分数为5% -7%的盐水，温度保持在50°C -55°C，搅拌30-40分钟；(4-2):随后将废液倒掉，加入质量分数为20% -24%的盐水，温度保持在500C -55°C，搅拌3-4小时后，收集洗脱液；(4-3):重复(4-2)的步骤，将两次收集的洗脱液合并待用；(5)沉淀脱盐:将上述洗脱液过滤移入沉淀罐中，边搅拌边加入质量分数为80% -85%的乙醇，调PH值至7-8，搅匀密封沉淀23-25小时，虹吸上层清液用于回收乙醇，收集沉淀物待用；(6)脱水干燥:将上述沉淀物滤干脱水，放入烘箱干燥后即得肝素钠。步骤(2)酶解中粘膜与2709碱性蛋白酶的重量比为500: I。说明书步骤(3)吸附中树脂的添加量按每根猪小肠加入20-30克树脂的比例添加。步骤(4-1)中树脂与加入的质量分数为5% -7%盐水的重量比为1: 1.1-1.3，步骤(4-2)中树脂与加入的质量分数为20% -24%盐水的重量比为I: 1.1-1.3。步骤(4-3)收集完洗脱液后，再接着加入质量分数为20% -24%的盐水，温度保持在50°C -55°C，搅拌30-40分钟后，收集洗脱液做高浓度盐水循环使用。步骤(5)沉淀脱盐中搅拌加入预冷过的乙醇。步骤(5)沉淀脱盐中洗脱液与乙醇的体积比为1: 1.8-2.2。步骤(6)脱水干燥中烘箱的温度为80°C -90°C，干燥时间为6_8小时。上述步骤(3)吸附中，所加树脂为德国拜耳树脂；步骤⑷洗脱中，盐水是指用肠衣专用盐所配制的水溶液。为了使粘膜刮制容易，常习惯将小肠浸泡24-48小时，这样能保护肠衣免受破损，但长时间浸泡会发酵产生肝素酶，分解肝素钠，此外发酵还会产生一些有害物质，使树脂中毒，因此在浸泡时间上一定要准确把握，夏季适当缩短时间，冬季可适当延长时间，在弱碱性或质量分数为4%的盐水条件`下，能减缓微生物的发酵和抑制肝素酶活性，可以放于低温处作短期贮存。乙醇沉淀时，必须在搅拌的同时逐渐加入乙醇，以避免局部乙醇浓度突然增高，而且乙醇要用预冷过的，否则就会使肝素钠的部分空间构象受到破坏，从而降低其活性。酶解、吸附肝素钠过程中的废液(煮锅废水)，气味恶臭，致使生产车间空气环境及其混乱，使人难以忍受，甚至影响工作人员的身心健康。为此本专利技术采用车间废气净化处理装置，大大减少了空气中的恶臭气味，极大改善了工作环境。因此，本专利技术的有益效果是:收率高，肝素钠洁性损失小，质量稳定，废液排放无污染且能循环使用，采用车间废气净化处理装置，解决了肝素钠车间气味恶臭的问题；利用旧工艺生产I亿个单位的肝素钠，需要2000-2400根猪小肠，而利用本专利技术的制备方法生产I亿个单位的肝素钠，只需要1400-1600根猪小肠，且肝素钠效价和活性都有大幅度提高，从而使生产成本大大降低， 利润可提闻40%以上。【具体实施方式】下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1:利用猪小肠生产肝素钠的制备方法，采用如下步骤:(I)肠粘膜的制备:取400根猪小肠灌水洗涤，除去残留粪便，清洗干净；将肠内灌入清水，用肠衣机挤压出小肠粘膜，操作用力均匀，粘膜沿着粘膜管道进入粘膜池；刮制过程中的肠头、碎肠皮绞碎后再投入粘膜池，共收集粘膜420千克；(2)酶解:打开粘膜泵，将420千克粘膜从粘膜池打入酶解罐中，将3360千克水加入酶解罐中，打开搅拌机进行搅拌，转速为50r/min，搅拌均匀，再加入840克2709碱性蛋白酶添加到酶解罐中，调节PH值为8.0 ;打开蒸汽阀门使温度达到55°C，加入150千克肠衣专用盐，用盐度计测其盐度达到2.5%，保温2小时；恒温结束后，再打开蒸汽阀门继续加温，使温度达到80°C，停止加温，保温30分钟；保温后，即刻用80目尼龙布过滤，收集过滤液用于吸附；(3)吸附:将酶解过滤液打入吸附罐中，打开搅拌机，转速为50r/min，使罐中的温度自然降到58°C，保持溶液的PH值为8.0，盐度2.5% ;将10千克树脂加入吸附罐中，搅拌8小时；自然冷却温度到45°C，放出废液，用80目尼龙丝袋收集过滤树脂；(4)洗脱:(4-1):将放入尼龙丝袋中的树脂反复冲洗；将冲洗干净的树脂倒入洗脱器中，加入质量分数为5%的盐水，加入盐水的量刚好没过树脂，温度保持在50°C，开启搅拌机转速为30r/min，搅拌30分钟；(4-2):随后将废液倒掉，加入质量分数为22%的盐水，加入盐水的量刚好没过树月旨，温度保持在50°C，开启搅拌机转速30r/min，搅拌3小时后，收集洗脱液；(4-3):重复(4-2)的步骤一次，将两次收集的洗脱液合并待；(步骤(4本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘乃山，尚明彩，迟培升，夏衬来，
申请(专利权)人：青岛九龙生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：