本发明专利技术公开了HPV18E6和E7融合基因突变体及其相关生物材料与编码蛋白。本发明专利技术所提供的HPV18E6和E7融合基因突变体是a）或b）的DNA分子：a）编码序列是SEQ ID No.1的第15-806位所示的DNA分子（名称为HPV18-E6E7-4基因）；b）编码序列是SEQ ID No.2的第15-806位所示的DNA分子（名称为HPV18-E6E7-3基因）。HPV18-E6E7-4基因或HPV18-E6E7-3基因不但高表达于哺乳动物细胞，而且不具有致瘤性，具有生物安全性，还可有效地预防和治疗宫颈癌。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了HPV18E6和E7融合基因突变体及其相关生物材料与编码蛋白。本专利技术所提供的HPV18E6和E7融合基因突变体是a）或b）的DNA分子：a）编码序列是SEQ?ID?No.1的第15-806位所示的DNA分子（名称为HPV18-E6E7-4基因）；b）编码序列是SEQ?ID?No.2的第15-806位所示的DNA分子（名称为HPV18-E6E7-3基因）。HPV18-E6E7-4基因或HPV18-E6E7-3基因不但高表达于哺乳动物细胞，而且不具有致瘤性，具有生物安全性，还可有效地预防和治疗宫颈癌。【专利说明】HPV 18E6和El融合基因突变体及其相关生物材料与编码蛋白
本专利技术涉及HPV18E6和E7融合基因突变体及其相关生物材料与编码蛋白。
技术介绍
人乳头瘤病毒(Human Papillomavires, HPV)是一类具有严格宿主范围和组织特异性的DNA病毒，主要感染人的皮肤或粘膜上皮细胞，引起感染部位发生良性和恶性病变。HPV除了可以导致各种皮肤、黏膜疣外，更为主要的在于它是宫颈癌的主要致病因子。全球肿瘤统计报告表明估计2008年全球有53万的宫颈癌新发病例，27.5万妇女死于该病，其中85%的宫颈癌发生在发展中国家。研究表明，约99.7%的宫颈癌发病都与HPV感染有关。宫颈癌的传统治疗方法如手术、放疗、化疗等只对早期患者有一定的疗效，且治疗创伤大，不能防止HPV再度感染。随着HPV与宫颈癌间的病因学联系日益明确，研制高效HPV疫苗以治疗HPV感染及其导致的良、恶性病变具有十分重要的意义。HPV18型是仅次于HPV16型的高危性HPV病毒，HPV18型感染除了与宫颈癌有关外，还发现HPV18型感染与其它多种肿瘤的发生有关，如食管癌，鼻内翻性乳头状瘤，喉癌，复发性呼吸道乳头状瘤病，阴茎癌，乳腺癌等。而HPV18E6E7癌基因在细胞转化中起着重要作用。HPV感染的过程中，E6和E7蛋白的持续表达是宫颈癌产生的重要原因。E6和E7是HPV的主要致癌蛋白，可使宿主细胞永生化并进一步发生恶性转化，HPV相关肿瘤中组成型持续表达E6和E7蛋白，E6和E7基因只存在于癌变组织中，在正常组织中不存在。因此可以选择E6和E7基因为特异性抗原基因构建抗HPV18型阳性肿瘤疫苗，可以特异性地识别并杀伤E6E7阳性的癌细胞，而不会杀伤正常细胞。但是由于HPV18E6和E7基因为癌基因，直接应用于疫苗设计有潜在的危险性。因此需要筛选HPV18E6和E7突变基因，使其保持免疫原性的同时具有去致瘤性。以此改造的基因构建抗HPV18型阳性肿瘤疫苗才能保证安全性。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供与野生型HPV18E6和E7融合基因相比，消除致癌性、在哺乳动物细胞中高表达并且抑制肿瘤细胞生长的HPV18E6和E7融合基因突变体及其相关生物材料与编码蛋白。本专利技术所提供的HPV18E6和E7融合基因突变体，为a)或b)的DNA分子:a)编码序列是SEQ ID N0.1的第15-806位所示的DNA分子(名称为HPV18-E6E7-4基因);b)编码序列是SEQ ID N0.2的第15-806位所示的DNA分子(名称为HPV18-E6E7-3基因)。其中，SEQ ID N0.1由816个核苷酸组成，SEQ ID N0.2由816个核苷酸组成。与HPV18-E6E7-4基因和HPV18-E6E7-3基因相关的生物材料也属于本专利技术的保护范围。本专利技术所提供的与HPV18-E6E7-4基因和HPV18-E6E7-3基因相关的生物材料，为下述BI)至B5)中的任一种:BI)由 HPV18-E6E7-4 基因或 HPV18-E6E7-3 基因转录出的 RNA 分子；B2)含有 HPV18-E6E7-4 基因或 HPV18-E6E7-3 基因的表达盒；B3)含有HPV18-E6E7-4基因或HPV18-E6E7-3基因的重组载体、或含有B2)所述表达盒的重组载体；B4)含有HPV18-E6E7-4基因或HPV18-E6E7-3基因的重组微生物、或含有B2)所述表达盒的重组微生物、或含有B3)所述重组载体的重组微生物；B5)含有HPV18-E6E7-4基因或HPV18-E6E7-3基因的转基因动物细胞系、或含有B2)所述表达盒的转基因动物细胞系、或含有B3)所述重组载体的转基因动物细胞系。HPV18-E6E7-4基因或其编码蛋白或HPV18-E6E7-3基因或其编码蛋白或其相关生物材料在制备抑制抑制宫颈癌细胞(生长)的产品(如疫苗或药物)中的应用，HPV18-E6E7-4基因或HPV18-E6E7-3基因或其相关生物材料在制备预防和/或治疗宫颈癌产品(如疫苗或药物)也属于本专利技术的保护范围。所述抑制抑制宫颈癌细胞的产品和所述预防和/或治疗宫颈癌产品的活性成分可为上述生物材料，具体可为所述重组腺病毒。以HPV18-E6E7-4基因或HPV18-E6E7-3基因或其相关生物材料为活性成分的下述NI)或N2)也属于本专利技术的保护范围:NI)抑制宫颈癌细胞(生长)的产品(如疫苗或药物)；N2)预防和/或治疗宫颈癌产品(如疫苗或药物)。NI)或N2)中，所述活性成分可为所述重组腺病毒。下述c)或d)所示的HPV18-E6E7-4基因或HPV18-E6E7-3基因编码的蛋白质也属于本专利技术的保护范围。c)氨基酸序列是SEQ ID N0.3所示的蛋白质(HPV18-E6E7-4基因编码的蛋白质)；d)氨基酸序列是SEQ ID如.4所示的蛋白质(即￥1846￡7-3基因编码的蛋白质)。上述生物材料中，B2)所述表达盒，是指能够在宿主细胞中表达HPV18-E6E7-4基因或HPV18-E6E7-3基因的DNA，该DNA不但可包括启动HPV18-E6E7-4基因或HPV18-E6E7-3基因转录的启动子，还可包括终止HPV18-E6E7-4基因或HPV18-E6E7-3基因转录的终止子。进一步，所述表达盒还可包括增强子序列。在本专利技术的一个实施方式中，含有HPV18-E6E7-4基因的表达盒包括的启动HPV18-E6E7-4基因转录的启动子为CMV启动子，含有该HPV18-E6E7-4基因的表达盒的重组载体是 pcDNA-HPV18-E6E7-4(用 SEQ ID N0.1 所示的 HPV18-E6E7-4 基因替换 pcDNA3.1(+)的BamH I和EcoR I识别位点间的片段得到的重组质粒命名为pcDNA-HPV18-E6E7_4)。在本专利技术的另一个实施方式中，含有HPV18-E6E7-4基因的表达盒包括的启动HPV18-E6E7-4基因转录的启动子为来自小鼠CMV病毒的立早启动子，终止HPV18-E6E7-4基因转录的终止子为来自SV40病毒T抗原的mRNA加尾信号(请指明pDC315-HPV18-E6E7_4中的启动子和终止子名称)，含有该HPV18-E6E7-4基因的表达盒的重组载体是pDC315-HPV18-E6E7_4 (用SEQ ID N0.1所示的HPV18-E6E7-4基因替换pDC315的BamH I和EcoR I识别位点间的片段得到的重组质粒)。在本专利技术的一个实施方式中，含有HPV18-E6本文档来自技高网...
【技术保护点】
DNA分子，其特征在于：所述DNA分子为a）或b）：a）编码序列是SEQ ID No.1的第15‑806位所示的DNA分子；b）编码序列是SEQ ID No.2的第15‑806位所示的DNA分子。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：周志祥，赵晨，曾毅，李千千，李泽琳，
申请(专利权)人：北京工业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11
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