一种高良姜总RNA的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种高良姜总RNA的提取方法。本发明专利技术针对高良姜次生代谢物质特别是多羟基黄酮醇含量丰富的特点，在常规的异硫氰酸胍-酚-氯仿抽提法基础上进行了多方面的改进：在RNA抽提液中加入了丙酮、可溶性聚乙烯吡咯烷酮和β-巯基乙醇。丙酮能溶解黄酮醇类等有色物质，水溶性PVP能与酚类物质充分结合并形成螯合物，强还原剂β-巯基乙醇，能提供还原条件，使得多酚类物质不易被氧化，3种物质协同作用，有效抑制了多酚类物质的干扰和阻碍；本发明专利技术在获得RNA粗提沉淀之后用Tris饱和酚和高浓度醋酸钾处理，可同时去除部分蛋白和多糖。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种高良姜总RNA的提取方法，其特征在于包括以下步骤：1）取高良姜幼嫩叶片放入预冷研钵，在研钵中加入预冷裂解抽提液和预冷丙酮，反复加入液氮研磨成粉，室温放置30‑40min，将所得匀浆转移至离心管中，4℃、12000g离心15min，转移无色上清液层到另一离心管，得溶液A；所述的裂解抽提液由如下组分组成：5mol/L异硫氰酸胍，25mmol/L柠檬酸钠，0.5%（w/v）十二烷基肌氨酸钠，4%（w/v）可溶性聚乙烯吡咯烷酮，4%（v/v）β‑巯基乙醇；2）向溶液A中加入1/3溶液A体积的Tris饱和酚、1/3溶液A体积的5mol/LKAc溶液，充分混匀，室温放置15‑30min，4℃、12000g离心15min，取水相转移到新离心管，得溶液B；3）向溶液B中加入与溶液B等体积的氯仿，上下颠倒将两相混匀，冰上放置10min后于4℃、12000g离心10min，取上清转移到新的离心管中；重复步骤3）的氯仿抽提步骤1次，得溶液C；4）向溶液C中加入与溶液C等体积的异丙醇，混匀后置于‑20℃中放置30min，4℃、12000g离心15min得到RNA沉淀物；5）用75%（v/v）乙醇清洗RNA沉淀物2次，吹干洗涤后的沉淀，用DEPC‑ddH2O溶解吹干后的沉淀，获得高良姜总RNA；步骤2）所述的Tris饱和酚，其pH值为8.8。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李淑彬，徐诗如，周仁超，
申请(专利权)人：华南师范大学，
类型：发明
国别省市：广东;44