本发明专利技术可用于筛选与任何其他疾病或状况相关的生物标记。此类疾病和状况范围为上文鉴定的神经学疾病、自身免疫疾病和癌症以及任何其他疾病或状况，其具有与疾病或疾病进展相关的生物标记例如抗体或其他表征蛋白质或生物分子。这些疾病和状况具体包括炎性疾病、传染病、心血管病和代谢病。本发明专利技术的大型配体文库可在合适的实验条件下且根据本文所述过程直接用于生物液体中，以筛选此类标记且无需使用更少的载体成员（例如约100,000或更少）或无需在筛选生物液体前将此类类肽或配体转移至微阵列。此外，配体文库还可用于筛选与特定细胞表面标记特别相关的基于细胞的受体。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术可用于筛选与任何其他疾病或状况相关的生物标记。此类疾病和状况范围为上文鉴定的神经学疾病、自身免疫疾病和癌症以及任何其他疾病或状况，其具有与疾病或疾病进展相关的生物标记例如抗体或其他表征蛋白质或生物分子。这些疾病和状况具体包括炎性疾病、传染病、心血管病和代谢病。本专利技术的大型配体文库可在合适的实验条件下且根据本文所述过程直接用于生物液体中，以筛选此类标记且无需使用更少的载体成员（例如约100,000或更少）或无需在筛选生物液体前将此类类肽或配体转移至微阵列。此外，配体文库还可用于筛选与特定细胞表面标记特别相关的基于细胞的受体。【专利说明】使用基于珠或颗粒的文库以及诊断试剂盒和治疗学在复杂生物液体中的生物标记发现与相关串请的交叉参考本申请要求分别于2011年3月24日、2011年5月31日和2012年I月6日提交的美国临时专利申请61/467，256,61/491, 717和61/583，881的优先权，所有所述专利申请均全文以引用方式并入本文。
本专利技术涉及新筛选方法及由其衍生的诊断和治疗产品。特别地，包含丰富多样的小分子、肽、类肽和/或其他寡聚物的新的基于珠的大型文库用于在生物样品中筛选疾病相关生物标记。本专利技术允许快速和直接筛选血浆、血清或其他生物液体，以发现一系列疾病中的疾病相关抗体并且还发现抗体特异性分子，其可充当诊断工具或作为用于所述疾病的治疗学。包含此类抗体特异性分子的诊断试剂盒可制备用于具有抗体或免疫原性组分的基本上任何疾病状态，例如自身免疫疾病、中枢神经系统障碍和癌症。此类试剂盒可由基本上任何已知的载体系统制成，条件是所述系统可支持或结合抗体特异性分子例如类肽或其他配体结合部分。类似地，任何已知的检测方法包括ELISA或其他已知的检测方法可用于在初始筛选后检测抗体，以发现假定命中，和/或在诊断筛选后，在诊断测定中使用此类假定命中。此类方法还可用于筛选其他生物标记，包括在细胞表面上的蛋白质和/或其他生物标记，以区别表达疾病相关标记的细胞相对于不表达此类标记的健康细胞。
技术介绍
美国专利公开2007/0003954公开了使用小分子微阵列的蛋白质和抗体概况分析。本申请公开了与配体结合部分结合的配体，其中所述配体排列在用于筛选生物标记和分子指纹的合成分子阵列中。其中描述的具体阵列包括例如具有与阵列结合的7680种不同化合物的类肽微阵列。在那个公开中，基于珠的文库用作制备类肽的起始方法，所述类肽随后转移至微阵列以筛选生物液体，在该微阵列上具有可寻址的定位。筛选导致阵列上对于复杂生物混合物中的任何特定蛋白质的独特模式或分子指纹。在此以引用方式并入的美国专利申请2010/0303805公开了可用于在生物液体中筛选与中枢神经系统障碍相关的生物标记的特定类肽和诊断阵列。其中公开的用于在其中形成阵列的具体单体也可用于本专利技术的新筛选方法中，条件是该文库扩大至数目大得多的珠/类肽或珠/配体，例如大于100K至 150MM。本专利技术人已发现显著更大的基于珠的文库(相对于用于抗体生物标记的基于微阵列的筛选或用于细胞的基于珠的筛选)可在适当条件下用于直接筛选复杂生物样品，以发现疾病相关生物标记以及与此 类配体结合部分结合的显著更大的配体库。这个显著更大的库包括显著改善数目的高亲和力配体，其充当诊断工具以及潜在治疗学。这种方法还允许对于任何特定复杂生物液体显著改善的筛选率，因为首先避免制备微阵列或相似可寻址载体系统的需要。一旦执行筛选，就可制造包含在筛选中发现的命中的微阵列或其他载体系统包括诊断阵列，并且包括在本专利技术的范围内。
技术实现思路
本专利技术涉及包含基于珠的大型随机配体文库的组合物或多种“组合物”。选择形成任何特定“组合物”的文库或多个文库，以筛选靶标疾病或状况，并且每个文库均可用于针对不同疾病或状况筛选，或相同文库可用于筛选多种疾病状态或状况。术语“随机”包括在单取代的胺上具有丰富多样的侧链的那些文库，所述单取代的胺形成寡聚链中的任何特定单体。即使在任何特定单体上的化学和/或物理特征中的某些例如功能性/溶解性是靶标寡聚物的所需 特点或特征的部分，在胺原材料上的这个多样的R基也是“随机的”。对于基于血浆的筛选或血清筛选，例如，期望与珠结合的任何特定配体均具有溶解性特征，其促进在溶液中与配体结合部分例如抗体的相互作用。此外，寡聚物的大小也是在形成配体文库时考虑的特点，当靶标部分是例如抗体或蛋白质时，所述配体可与配体结合部分结合。基于珠的文库包含具有配体与之(或与此类树脂上的接头)键合的珠或相似载体结构(即聚合树脂)，所述配体选自小分子、肽、类肽、多糖或任何基于寡聚物的化合物，包括核酸和修饰的核酸部分。在优选实施例中，基于珠的文库包含类肽。类肽是具有共价连接形成寡聚物的5 - 15个单体的单体单位的寡聚物。寡聚物可具有连接至寡聚物末端的另外部分，以键合至载体或接头，所述接头使寡聚物连接至载体。寡聚类肽使用例如与亚单体合成方法合并的一般固态肽合成的杂交组合生成，并且包含具有单取代酰胺的甘氨酸或碳取代的甘氨酸样部分，其中在酰胺氮或α-碳上的取代基选自广泛范围的部分，取决于在合成中利用的单取代的胺或甘氨酸α碳取代基。类肽文库一般可如例如Kodadek和Reddy, Proceedingsof the National Academy of Sciences, 2005 年 9 月 6 日，第 102 卷,N0.36 中所述或如本文所述进行制备。如上文提及的，单取代的胺库一般选自广泛范围的单体。文库的大小范围可为具有所述数目的不同配体/珠的约200,000到150MM珠。作为另外一种选择，且取决于珠或载体的大小，每个载体或珠可具有超过一种配体/珠/载体，并且配体可以是相同配体或不同配体。随后还在本专利技术的过程中获得具有包含文库的配体的珠/载体。本专利技术包含用于在生物液体中筛选疾病相关生物标记的过程，其包括用至少一种基于珠的配体文库筛选生物对照样品和生物患病样品，且使用此类筛选发现疾病相关生物标记的步骤。本专利技术包含用于在复杂生物样品中筛选疾病相关生物标记的存在的过程，其包括使所述样品暴露于多个含配体载体，其中至少一种配体与疾病相关生物标记可检测地结合。本专利技术还包含在复杂生物样品中筛选疾病相关生物标记的方法，其包括步骤(1)使随机配体文库暴露于对照样品，以鉴定且取出任何非特异性配体命中，和(2)使剩余配体文库暴露于患病样品，以鉴定与患病样品中的疾病相关生物标记相关的任何配体。特别地，本专利技术包含用于在生物样品中筛选疾病相关生物标记的过程，其包括(I)用合适溶剂预处理含配体珠(LBB)文库，以形成处理的LLB; (2)使处理的LLB暴露于具有对照样品配体结合部分的正常对照(NC)生物样品；(3)使来自对照样品的处理的LBB暴露于Dynabead筛选(加铁标记的抗IgG抗体)，且取出命中；(4)洗涤剩余的LBB文库，且使用量子点标记的次级抗IgG抗体，使所述文库暴露于具有任何剩余对照样品配体结合部分的NC生物样品，且取出命中；(5)洗涤剩余的LBB文库，且使所述文库暴露于来自具有疾病的患者的生物样品；(6)使来自患病样品的处理的LBB暴露于Dynabead筛选，且取出命中；(7)洗涤剩余的LBB，且使所述本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种在复杂生物液体中筛选生物标记的方法，其包括(a)提供包含具有与载体结合的至少一种配体的多种载体的随机配体文库；(b)使所述随机配体文库暴露于具有配体结合部分的对照复杂生物液体；(c)取出具有配体结合部分与之结合的任何载体，以形成纯化的配体文库；(d)针对具有生物标记的非对照复杂生物液体筛选所述纯化的配体文库；(e)使步骤(d)中形成的溶液暴露于检测试剂或系统，以允许检测具有生物标记与之结合的配体，和任选地，(f)鉴定与所述生物标记结合的所述配体。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·R·穆拉，J·席尔克，
申请(专利权)人：欧科制药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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