一种地枫皮的组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：（1）取地枫皮种子作为外植体进行消毒；（2）将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导发芽得到无菌试管苗；（3）将所述无菌试管苗置于MS繁殖培养基中进行试管苗快速繁殖培养获得丛生芽；（4）将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中进行壮苗培养得到健壮植株；（5）将所述健壮植株置于MS生根培养基中培养得到完整的带根苗；（6）取完整的带根苗进行炼苗后移植于沙床生长一个月，再移栽至大田。采用本发明专利技术所述的培养方法得到的地枫皮丛生芽增殖系数达到8-12倍，获得的组培苗生根率在85%以上，移栽苗床成活率在90%以上，有效解决了地枫皮的规模化育苗问题。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】，包括如下步骤：（1）取地枫皮种子作为外植体进行消毒；（2）将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导发芽得到无菌试管苗；（3）将所述无菌试管苗置于MS繁殖培养基中进行试管苗快速繁殖培养获得丛生芽；（4）将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中进行壮苗培养得到健壮植株；（5）将所述健壮植株置于MS生根培养基中培养得到完整的带根苗；（6）取完整的带根苗进行炼苗后移植于沙床生长一个月，再移栽至大田。采用本专利技术所述的培养方法得到的地枫皮丛生芽增殖系数达到8-12倍，获得的组培苗生根率在85%以上，移栽苗床成活率在90%以上，有效解决了地枫皮的规模化育苗问题。【专利说明】
本专利技术涉及一种植物繁殖方法，特别是。
技术介绍
地枫皮(Illicium difengpi B.N Chang et al.)为木兰科八角茴香属植物,其干燥树皮供药用，具有祛风除湿，行气止痛等功效，临床常用于风湿关节痛、腰肌劳损和跌打损伤等症状治疗，疗效好，药用价值高，是多种中成药产品的主要原材料。经调查发现，地枫皮多生于石灰岩地区的山顶或石山疏林下，其生境分布区域非常狭窄，野生资源蕴藏量稀少，而且由于长期以来不合理的农业生产方式和盲目的资源开发利用，导致岩溶地区土地生产力持续下降、石漠化面积不断扩增，地枫皮的生存环境受到的破坏越来越大，野生地枫皮的生产能力越来越弱，地枫皮于1992年已属于国家III级重点保护珍稀濒危植物，1999年又被批准为国家II级重点保护野生植物，而目前地枫皮已被列入《中国植物红皮书》渐危种。在自然条件下，地枫皮主要以种子进行繁殖，但是因其种皮较薄，干燥时种子的油脂会变质，过湿时又容易腐烂，极易丧失发芽力，而其生长环境岩石多，土壤稀薄，无法为地枫皮种子的正常繁殖提供理想的生长环境，致使在自然环境中地枫皮的繁殖能力非常低弱，资源更新速度非常缓慢，难以满足市场需要。虽然也有科研工作者对地枫皮的扦插繁殖技术进行一定程度的研究，但效果不是十分明显，无法满足人工栽培的需要。而采用生物技术组织培养技术，可以有效快速地提高地枫皮种苗的繁殖速度和质量，实现地枫皮优质种苗的工厂化育苗，以满足生产 上的需要。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，它能够快速繁殖出大量适合移栽的优良地枫皮种苗、满足生产需要。本专利技术通过以下技术方案达到上述目的:，包括以下步骤:(I)外植体的选择与消毒:取地枫皮种子作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；(2)种子萌发获得无菌试管苗:将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001uX，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中MS培养基中含0.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6_BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001UX，光照时间为8_10小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中含0.5-3.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-1.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的PH值为5.8 ；(4)丛生芽壮苗培养:将步骤(3)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001UX，光照时间为12-14小时/天的条件下培养20天得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中含1.0-3.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6_BA、0.2-1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;(5)健壮植株生根培养:将步骤(4)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001UX，光照时间为12-14小时/天的条件下培养35天得到带根的完整植株，其中MS生根培养基中含0.1-1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的萘乙酸NAA、0.1-0.5mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ; (6)炼苗与移栽:步骤(5)获得带根的完整植株后，在室温为25°C的室内打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2-4天，洗净根部培养基，立即移栽到沙床中，在沙床中生长一个月后移栽大田。本专利技术的突出优点在于:(I)采用生物技术对地枫皮进行组织培养快速繁殖，通过地枫皮丛生芽的繁殖，在短时间内可培育出大量适合栽培种植的地枫皮幼苗，显著提高了地枫皮种苗的增殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。(2)在MS繁殖培养基中添加的6-苄基腺嘌呤6-BA、吲哚乙酸IAA和激动素KT属于化学合成物质，价格较为便宜，可大大降低地枫皮组织培养的成本消耗，达到降低成本的目的；在MS繁殖培养基中添加0.5-3.0mg/L的6_苄基腺嘌呤6-BA和0.1-1.5mg/L的激动素KT可促进丛生芽的分化；添加浓度为0.1-0.5mg/L的生长激素吲哚乙酸IAA可促进丛生芽的生长；在MS壮苗培养基中添加浓度为1.0-3.0mg/L的6_苄基腺嘌呤6-BA和0.2-1.0的吲哚乙酸IAA可促进丛生芽的再次增殖及长高展叶；在MS生根培养基上组合使用浓度为0.1-1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的萘乙酸MA、0.1-0.5mg/L的生根粉ABT可获得带根的完整植株，这些植株经炼苗后可直接移栽沙床。(3)采用本专利技术所述的培养方法得到的地枫皮丛生芽增殖系数达到8-12倍，丛生芽经过复壮后，接种到含有生根粉IAA、ABT的生根培养基上，获得的组培苗生根率在85%以上，移栽苗床成活率在90%以上；快速、便捷、高效地进行地枫皮组织培养，实现地枫皮组培种苗的规模化生产。【具体实施方式】下面结合实施例对本专利技术的技术方案进一步说明。实施例1本专利技术所述的地枫皮的组织培养快速繁殖方法的一个实例，包括以下步骤:(I)外植体的选择与消毒:取地枫皮种子作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15-30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；(2)种子萌发获得无菌试管苗:将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001uX，光照时间为12-14小时/天的条件下培养30天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中MS培养基中含0.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6_BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;(3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种地枫皮的组织培养快速繁殖方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：（1）外植体的选择与消毒：取地枫皮种子作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15?30min、添加了2?3滴吐温?20的100毫升0.1%升汞消毒8?10min、无菌水冲洗3?5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；（2）种子萌发获得无菌试管苗：将步骤（1）得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23?27℃，光照强度1500lux，光照时间为12?14小时/天的条件下培养30天，种子发芽后获得无菌试管苗，其中MS培养基中含0.5mg/L的6?苄基腺嘌呤6?BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；（3）试管苗丛生芽快速繁殖培养：将步骤（2）中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23?27℃，光照强度1500lux，光照时间为8?10小时/天的条件下培养30天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中含0.5?3.0mg/L的6?苄基腺嘌呤6?BA、0.1?0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1?1.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；（4）丛生芽壮苗培养：将步骤（3）中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23?27℃，光照强度1500lux，光照时间为12?14小时/天的条件下培养20天得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中含1.0?3.0mg/L的6?苄基腺嘌呤6?BA、0.2?1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；（5）健壮植株生根培养：将步骤（4）中得到的健壮植株置于MS生根培养基中，在培养温度23?27℃，光照强度1500lux，光照时间为12?14小时/天的条件下培养35天得到带根的完整植株，其中MS生根培养基中含0.1?1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1?0.5mg/L的萘乙酸NAA、0.1?0.5mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；（6）炼苗与移栽：步骤（5）获得带根的完整植株后，在室温为25℃的室内打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水，炼苗2?4天，洗净根部培养基，立即移栽到沙床中，在沙床中生长一个月后移栽大田。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：韦坤华，李林轩，吕惠珍，缪剑华，黄宝优，韦范，秦双双，
申请(专利权)人：广西壮族自治区药用植物园，
类型：发明
国别省市：
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