一种从福尔马林固定石蜡包埋组织中共分离DNA和RNA的试剂盒及方法技术

一种从福尔马林固定石蜡包埋组织中共分离DNA和RNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：①RNA分离所需的：裂解液Buffer?RTL：所述Buffer?RTL包含150～300mM的Tris·Cl，0.8～1.2M的NaCl，8～14%（V/V）Tween20，0.2～0.8%（V/V）的十二烷基硫酸钠；结合液Buffer?RTB：所述Buffer?RTB包含50～150mM的Tris·Cl，150～250mM的EDTA，0.8～1.2M的KCl，0.4～1.2M的NaCl，0.1～0.5%（V/V）的十二烷基硫酸，8～16%（V/V）的Tween20，4～6M的异硫氰酸胍；DNase?I工作混合液：所述DNase?I工作混合液包含DNase?I?Magic?Buffer：80～120mM的Tris·Cl，30～70mM的NaCl；60～100mM的MgCl2及DNase?I1?5U/μL；漂洗液Buffer?RTW：所述漂洗液Buffer?RTW包含250～350mM的Tris·Cl，30～70mM的EDTA，0.5～1.5M的NaCl，70～90%的乙醇；洗脱液Buffer?RTE：所述洗脱液Buffer?RTE包含10～20mM的Tris·Cl，5～20mM的EDTA；②DNA分离所需的：裂解液Buffer?DTL：所述Buffer?DTL包含80～150mM的Tris·Cl，40～70mM的EDTA，80～150mM的二硫苏糖醇，3～10%（V/V）十二烷基硫酸钠，10～25%（V/V）的Tween20；调节液Buffer?DES：所述调节液Buffer?DES包含80～150mM的Tris·Cl，30～70mM的EDTA，0.4～1.5M的(NH4)2SO4，0.8～1.5M的KCl；结合液Buffer?DTB：所述结合液Buffer?DTB包含80～150mM的Tris·Cl，40～70mM的EDTA，06～1.2M的KCl，4～6M的异硫氰酸胍；漂洗液Buffer?DW1和DW2：所述Buffer?DW1包含150～400mM的Tris·Cl，40～100mM的EDTA，2～5M的异硫氰酸胍，40～70%乙醇；所述漂洗液Buffer?DW2包含300～700mM的Tris·Cl，0.8～1.2M的NaCl，70～90%乙醇；洗脱液Buffer?DTE：所述洗脱液Buffer?DTE包含10～20mM的Tris·Cl，5～10mM的EDTA。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供了一种从福尔马林固定石蜡包埋组织中共分离DNA和RNA的试剂盒及方法。本专利技术所述试剂盒可用于FFPE样本中DNA和RNA的同时提取，其优点不仅在于可以同时进行核酸提取，节省时间，经济，快速，而且本专利技术可节约样本量，能有效解决试验中缺少样本的难题，还可以保证研究中使用的DNA和RNA的来源完全相同。本专利技术操作简捷，重复性高，得率高，2～5片肿瘤组织切片即可同时获得足够的DNA和RNA；获得的核酸纯度高，对后续的检测无干扰；与常用试剂盒相比，具有明显的优势。【专利说明】—种从福尔马林固定石蜡包埋组织中共分离DNA和RNA的试剂盒及方法
本专利技术涉及生物
，具体地涉及一种共分离福尔马林固定石蜡包埋组织样本DNA和RNA的试剂盒及方法。
技术介绍
自20世纪50年代Watson和Crick提出DNA双螺旋模型以来，核酸就成为了生物学的研究重点，并产生了以DNA和RNA为主要研究对象的分子生物学学科，分子生物学在广度和深度上都获得空前的发展。近10年来，现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸领域，为了解病理状态下基因组的变化积累了新资料。福尔马林固定石蜡包埋组织(formalin fixed and paraffin embedded tissues,FFPE,以下简称 FFPE)是医疗机构最常用的保存病理组织的方法。医院病理科档案中积存的大量石蜡包埋组织，是一个可靠的分子生物学研究的材料来源。由于新鲜标本难以得到，为进行实体肿瘤分子生物学研究，对已有病例进行回顾性研究时，只能从石蜡包埋组织中进行基因提取，因此石蜡包埋组织就成为来源最丰富的珍贵资源。从FFPE样品中分离出高纯度高质量的核酸是下游试验顺利进行的最基本前提。传统方法中DNA和RNA的分离纯化绝大部分都是单独进行的，同时提取DNA和RNA的方法较少，纯度也低，耗时长，难以满足下游试验的要求。文献中报道的提取方法主要有酚氯仿抽提法，离子交换法，盐析法，硅胶柱法等，但这些方法往往只能提取出其中一种核酸而浪费另一种核酸，且需使用到一些有毒试剂，如苯酚、氯仿等，不利于实验人员的身体健康。临床上的分子生物学研究往往需要同时提取DNA和RNA，当样本有限时，则可能影响下游试验的进行。因此，临床上迫切需要一种能够从FFPE样本中共分离DNA和RNA的试剂盒及方法，所提DNA和RNA纯度高、得率高，以保证即使在样本量有限的情况下下游试验的正常进行；并可以保证研究中使用的DNA 和RNA的来源完全相同。因为现在很多研究者想比较DNA和RNA用于检测或者研究中的差别，但是由于肿瘤的异质性等问题，结论并不能完全信服，也有所出入。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术的目的在于提供了一种从FFPE样本中共分离DNA和RNA的试剂盒，采用本试剂盒提取DNA和RNA含量高，纯度高，操作简捷，重复性高，节省样本量。本专利技术的另一个目的在于提供了一种从FFPE样本中共分离DNA和RNA的方法，该方法所需样本量少，所提取DNA和RNA的含量和纯度高，不需要接触酚、氯仿、异戊醇等有毒有害物质，操作过程简便快捷。本专利技术所述从FFPE样本中共分离DNA和RNA的试剂盒包括:①RNA分离所需的裂解液Buffer RTL、结合液Buffer RTB,DNase I工作混合液、漂洗液Buffer RTW和洗脱液Buffer RTE。所述 Buffer RTL包含 150 ~300mM 的 Tris.Cl,0.8 ~1.2M 的 NaCl,8 ~14% (V/V) Tween20,0.2 ~0.8% (V/V)的十二烷基硫酸钠；所述Buffer RTB 包含 50 ~150mM 的 Tris ?Cl, 150 ~250mM 的 EDTA，0.8 ~1.2M 的 KCl，0.4 ~1.2M 的 NaCl,0.1 ~0.5%(V/V)的十二烷基硫酸钠，8 ~16%(V/V)的 Tween20，4 ~6M 的异硫氰酸狐；所述DNase I工作混合液包含DNase I Magic Buffer(50~150mM的Tris.Cl,30 ~70mM 的 NaCl ；60 ~IOOmM 的 MgC12)及 DNase I (1-5U/ μ L);所述漂洗液 Buffer RTff包含 250 ~350mM 的 Tris ?Cl, 30 ~70mM 的 EDTA，0.5 ~1.5M 的 NaCl，70 ~90% 乙醇；所述洗脱液 Buffer RTE 包含 10 ~20mM 的 Tris.Cl，5 ~20mM 的 EDTA。优选地，所述Buffer RTL 包含 200mM 的 Tris ?Cl, IM 的 NaCl，10% (V/V)Tween20,0.5% (V/V)的十二烷基硫酸钠；优选地，所述Buffer RTB 包含 IOOmM 的 Tris *Cl,200mM 的 EDTA，IM 的 KCl，IM 的NaCl,0.2% (V/V)的十二烷基硫酸钠，10% (V/V)的Tween20，6M的异硫氰酸胍；优选地，所述漂洗液Buffer RTff中，包含300mM的Tris.Cl,50mM的EDTA，IM的NaCl，80%的乙醇；优选地，本专利技术所述DNase I工作混合液是按每人份20 μ L DNase I MagicBuffer (IOOmM 的 Tris.Cl,50mM 的 NaCl ；80mM 的 MgCl2)与 10 μ L DNase I (3U/y L)的比例配制成的；本专利技术所述结合液·Buffer RTB，其中十二烷基硫酸钠、TWeen20能够有效提高RNA得率。②DNA分离所需的裂解液Buffer DTL、调节液Buffer DES、结合液Buffer DTB、漂洗液Buffer Dffl和DW2、洗脱液Buffer DTE。所述Buffer DTL包含80~150mM的Tris ?Cl, 40~70mM的EDTA，80~150mM的二硫苏糖醇，3~10% (V/V)十二烷基硫酸钠，10 ~25% (V/V)的 Tween20 ;所述调节液 Buffer DES 包含所述 80 ~150mM 的 Tris.Cl,30 ~70mM 的 EDTA，0.4 ~1.5M 的(NH4)2SO4,0.8 ~1.5M 的 KCl ;所述结合液 Buffer DTB包含80~150mM的Tris.Cl，40~70mM的EDTA，0.6~1.2M的KC1，4~6M的异硫氰酸胍；所述Buffer Dffl包含150~400mM的Tris ?Cl, 40~IOOmM的EDTA，2~5M的异硫氰酸胍,40~70%乙醇；所述漂洗液Buffer DW2包含300~700mM的Tris.Cl，0.8~1.2M的NaCl，70~90%乙醇；所述洗脱液Buffer DTE包含10~20mM的Tris.Cl，5~IOmM的EDTA。优选地，所述Buffer DTL 包含 IOOmM 的 Tris.Cl，50mM 的 EDTA，IOOmM 的二硫苏糖醇，5% (V/V)十二烷基硫酸钠，20% (V/V)的Tween20 ；优选地，所述调节液Buffer DES中包含本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从福尔马林固定石蜡包埋组织中共分离DNA和RNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：①RNA分离所需的：裂解液Buffer?RTL：所述Buffer?RTL包含150～300mM的Tris·Cl，0.8～1.2M的NaCl，8～14%（V/V）Tween20，0.2～0.8%（V/V）的十二烷基硫酸钠；结合液Buffer?RTB：所述Buffer?RTB包含50～150mM的Tris·Cl，150～250mM的EDTA，0.8～1.2M的KCl，0.4～1.2M的NaCl，0.1～0.5%（V/V）的十二烷基硫酸，8～16%（V/V）的Tween20，4～6M的异硫氰酸胍；DNase?I工作混合液：所述DNase?I工作混合液包含DNase?I?Magic?Buffer：80～120mM的Tris·Cl，30～70mM的NaCl；60～100mM的MgCl2及DNase?I1?5U/μL；漂洗液Buffer?RTW：所述漂洗液Buffer?RTW包含250～350mM的Tris·Cl，30～70mM的EDTA，0.5～1.5M的NaCl，70～90%的乙醇；洗脱液Buffer?RTE：所述洗脱液Buffer?RTE包含10～20mM的Tris·Cl，5～20mM的EDTA；②DNA分离所需的：裂解液Buffer?DTL：所述Buffer?DTL包含80～150mM的Tris·Cl，40～70mM的EDTA，80～150mM的二硫苏糖醇，3～10%（V/V）十二烷基硫酸钠，10～25%（V/V）的Tween20；调节液Buffer?DES：所述调节液Buffer?DES包含80～150mM的Tris·Cl，30～70mM的EDTA，0.4～1.5M的(NH4)2SO4，0.8～1.5M的KCl；结合液Buffer?DTB：所述结合液Buffer?DTB包含80～150mM的Tris·Cl，40～70mM的EDTA，06～1.2M的KCl，4～6M的异硫氰酸胍；漂洗液Buffer?DW1和DW2：所述Buffer?DW1包含150～400mM的Tris·Cl，40～100mM的EDTA，2～5M的异硫氰酸胍，40～70%乙醇；所述漂洗液Buffer?DW2包含300～700mM的Tris·Cl，0.8～1.2M的NaCl，70～90%乙醇；洗脱液Buffer?DTE：所述洗脱液Buffer?DTE包含10～20mM的Tris·Cl，5～10mM的EDTA。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘云芬，宋庆涛，林清华，李海燕，阮力，郑立谋，
申请(专利权)人：厦门艾德生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：