一种检测饲料中玉米赤霉烯酮的胶体金试剂板制造技术

本实用新型专利技术涉及一种检测饲料中玉米赤霉烯酮的胶体金试剂板，由底板、背衬和盖板依次由下而上叠加组成，背衬上依次紧密粘贴着样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。硝酸纤维素膜从样品垫到吸水垫方向上依次喷有检测线和控制线，可将反应结果以肉眼可见的颜色表征出来。盖板上设置加样孔和观察窗，观察窗分为检测区和控制区。试剂板利用免疫胶体金法可进行饲料中玉米赤霉烯酮含量的半定量直观检测，适合饲料生产加工企业，检验检疫机构等对饲料样品的大规模筛检。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本技术涉及一种检测饲料中玉米赤霉烯酮的胶体金试剂板，由底板、背衬和盖板依次由下而上叠加组成，背衬上依次紧密粘贴着样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。硝酸纤维素膜从样品垫到吸水垫方向上依次喷有检测线和控制线，可将反应结果以肉眼可见的颜色表征出来。盖板上设置加样孔和观察窗，观察窗分为检测区和控制区。试剂板利用免疫胶体金法可进行饲料中玉米赤霉烯酮含量的半定量直观检测，适合饲料生产加工企业，检验检疫机构等对饲料样品的大规模筛检。【专利说明】一种检测饲料中玉米赤霉烯酮的胶体金试剂板
本技术涉及一种胶体金检测试剂板，更具体地，本技术涉及一种检测饲料中玉米赤霉烯酮的胶体金试剂板。
技术介绍
玉米赤霉烯酮(zeara lenone, ZEN)又称F-2毒素,首先从有赤霉病的玉米中分离得到，其产毒菌是镰刀菌属的菌侏，主要由禾谷镰刀菌产生，粉红镰刀菌、三线镰刀菌等多种镰刀菌也能产生这种毒素。玉米赤霉烯酮有多种衍生物，如7-脱氢玉米赤霉烯酮、玉米赤霉烯酸等。玉米赤霉烯酮的耐热性较强，在食品或饲料加工过程中均不易破坏，主要污染玉米、小麦、大麦等粮谷类作物。研究表明，玉米赤霉烯酮及其代谢物具有类雌激素作用，引起动物发生雌激素亢进症，导致不孕或流产；能造成动物急慢性中毒，引起中枢神经系统的中毒症状，如恶心、发冷、头痛、神智抑郁和共济失调等，甚至死亡。给畜牧场造成巨大经济损失。此外，很多资料显示ZEA具有生殖发育、免疫毒性，肝毒性，潜在致癌性等，最新研究显示其对女性乳腺肿瘤发生也有一定影响。玉米赤霉烯酮污染饲料和食品后，不仅使农业经济受到严重影响，而且还会带来严重的食品安全问题，威胁到人类的健康。目前，对动物玉米赤霉烯酮中毒尚无特效药治疗，为了控制ZEN对人和动物产生的危害，必须对饲料、谷物等中玉米赤霉烯酮含量进行检测，确定是否含有玉米赤霉烯酮。欧盟规定仔猪日粮中ZEN的最高限量为100μ g/kg ;意大利规定在谷物和谷类产品中ZEN的含量不能超过100 μ g/kg ;中国GB13078.2-2006饲料卫生标准中规定饲料中玉米赤霉烯酮的限量为500μ g/kg，GB2761-2011食品安全国家标准规定食品中玉米赤霉烯酮限量为60 μ g/kg。目前，比较常用的ZEN检测方法有薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法-质谱法(GC-MS)、生物检测法和免疫学检测法等。薄层色谱分析法是较早用于毒素检测的一种方法，操作人员无需经过专门培训，且成本低，无需价格昂贵的仪器。但此方法所需试剂繁多，检测周期长，灵敏度不高等，已远不能满足现代检测要求。高效液相色谱法、气相色谱法-质谱法等仪器分析方法具有准确度高、灵敏性强、可微量测定等优点，且气相色谱法-质谱法可同时检测不同的镰刀菌毒素，适合于饲料中ZEN的定量分析。但设备昂贵、对样品中毒素纯度的要求较高，导致检测成本高、周期长，无法满足大批量样品快速筛选的需要，所以使用受到限制。微生物检测法虽然待检样品不需很纯，但方法专一性差，灵敏度低，主要用于定性，一般只作为化学分析法的佐证。ELISA法是免疫学检测方法之一，具有特异、快速、灵敏度高和成本低的特点，适用于基层机构大量样品的筛选和普查。但此方法需接触ZEN标准品，不利于保护操作者的健康，且酶的活性易受温度影响，因此试剂需要低温保藏、寿命短，并易造成测定结果重复性较差。
技术实现思路
为克服现有技术存在的上述缺陷，本技术针对检测需求，研制开发了一种检测玉米赤霉烯酮的胶体金试剂板和检测试剂盒，通过胶体金免疫法检测饲料中的玉米赤霉烯酮。试剂板检测限符合要求，重现性好，检测时间短，适合现场快速检测，且检测过程中无需昂贵的仪器设备，也无需使用玉米赤霉烯酮标准品，有利于保护操作者。为了实现上述目的，本技术采用的技术方案是:一种检测饲料中玉米赤霉烯酮的胶体金试剂板，包括底板、背衬和盖板，所述背衬上依次紧密粘贴的样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，相邻各部分间有1_2_的重叠，其中，所述胶体金结合垫包被胶体金标记的抗体；所述硝酸纤维素膜包被特异性结合抗原和多克隆抗体。优选的，所述底板、背衬和盖板由上而下依次压制为一体。优选的，所述硝酸纤维素膜从样品垫到吸水垫方向上依次喷有检测线和控制线，所述检测线包被玉米赤霉烯酮-BSA特异性结合抗原，所述控制线包被羊抗鼠多克隆抗体。优选的，所述胶体金颗粒的粒径大小约为30nm，所述胶体金标记的抗体为玉米赤霉烯酮单克隆抗体。优选的，所述样品垫由玻璃纤维制成，所述胶体金结合垫由聚酯膜制成，所述吸水垫为滤纸。优选的，所述底板和盖板为两块塑料模板，所述盖板上设置加样孔和观察窗，所述加样孔和观察窗不均匀的分布在盖板上，所述加样孔和观察窗之间有间隔，所述观察窗分为检测区和控制区。本技术试剂板应用层析式抗体免疫竞争原理，通过抗原和金标抗体反应显色，特异性检测饲料样品中的玉米赤霉烯酮含量，如果样品溶液中含有玉米赤霉烯酮，玉米赤霉烯酮就先和胶体金颗粒上的玉米赤霉烯酮单克隆抗体结合，而无法与检测线上的玉米赤霉烯酮特异性抗原结合。当样品中的玉米赤霉烯酮含量等于或超过试剂板检出限时，试剂板上的检测线显色较控制线浅甚至无显色，判定为阳性。反之，当样品中玉米赤霉烯酮含量在试剂板检出限以下或无残留时，试剂板上的检测线显色与控制线相近或偏深，判定为阴性。本技术试剂板由底板、背衬和盖板组成，背衬上依次紧密粘贴着样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。底板、背衬和盖板由上而下依次压制为一体。胶体金结合垫上包被有胶体金标记的玉米赤霉烯酮单克隆抗体；硝酸纤维素膜上从样品垫到吸水垫方向依次包被有玉米赤霉烯酮-BSA特异性结合抗原和羊抗鼠多克隆抗体IgG，分别作为检测线和控制线。偶联玉米赤霉烯酮的载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白等。盖板上设置加样孔和观察窗，加样孔和观察窗不均匀的分布在盖板上，加样孔和观察窗之间有间隔，观察窗分为检测区和控制区。本技术试剂板的各部分组成成分和功能如下:底板、盖板，为两块塑料模板，起固定背衬和标示各功能区(加样孔、检测区、控制区)的作用。背衬，由一面涂有不干胶的不吸水韧性材料制成，起固定支撑试剂板其他组成部分的作用。样品垫，由玻璃纤维制成，起吸收样品溶液和缓冲样品溶液pH值的作用。胶体金结合垫，由聚酯膜制成，其上有抗玉米赤霉烯酮单克隆抗体与胶体金颗粒的结合物，为样品溶液中有效成分和金标抗体反应提供场所。硝酸纤维素膜，从样品垫到吸水垫方向上依次喷有检测线和控制线，将反应结果以肉眼可见的颜色表征出来。吸水垫，由滤纸制成，将反应过程中多余的溶液吸收。本技术试剂板具有如下有益效果:(I)特异性好。本技术试剂板对玉米赤霉烯酮的交叉反应率为100%，对呕吐毒素、伏马菌素、赭曲霉毒素A等真菌毒素的交叉反应率均低于I %。可见，本技术试剂板对玉米赤霉烯酮反应具有高度专一性。(2)灵敏度高。本技术试剂板对饲料中玉米赤霉烯酮的最低检出限为100 μ g/kg，符合国家限量要求，在对饲料中玉米赤霉烯酮的快速检测领域中达到了较优水平。根据实际检测需求，通过对样品前处理过程中上层溶液、专用稀释液用量的不同可调整试剂板的检测限本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测饲料中玉米赤霉烯酮的胶体金试剂板，其特征在于，包括底板、背衬和盖板，所述背衬上依次紧密粘贴的样品垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，相邻各部分间有1?2?mm的重叠，其中，所述胶体金结合垫包被胶体金标记的抗体；所述硝酸纤维素膜包被特异性结合抗原和多克隆抗体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：洪平，邬本成，孙满义，
申请(专利权)人：安佑生物科技集团有限公司，
类型：实用新型
国别省市：