一种高效提取厌氧颗粒污泥微生物总DNA的方法技术

本发明专利技术属于环境分子生物学技术领域，具体涉及一种高效提取厌氧颗粒污泥微生物总DNA的方法，步骤如下：菌体离心；固体物用DNA贮存液I洗后加入DNA贮存液Ⅰ、溶菌酶温育，加入贮存液Ⅱ、贮存液Ⅲ、贮存液Ⅳ温育；加入酚、氯仿和异戊醇混合液，轻柔8字混匀；离心取上清，加入氯仿和异戊醇混合液，轻柔8字混匀；离心取上清，加入异丙醇，轻柔混匀，－20℃，静置30min；室温离心；75%乙醇洗一遍，室温离心12000r/min，5min；加入贮存液Ⅴ重悬，4℃过夜溶解，即得厌氧颗粒污泥微生物总DNA。本发明专利技术简化了微生物总DNA提取步骤，实现了快速、高效的提取厌氧颗粒污泥的微生物总DNA。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种提取厌氧颗粒污泥微生物总DNA的方法，包括下列步骤：1）菌体离心，量取一定体积的菌体，放入离心机离心；弃去上层清夜，底层固体物用DNA贮存液I洗2遍；加入DNA贮存液Ⅰ，混匀；2）加入溶菌酶，混匀，30～40℃温育0.5～2h，加入贮存液Ⅱ，混匀，30～40℃温育0.5～2h；3）加入贮存液Ⅲ，混匀，4）加入贮存液Ⅳ，混匀，60～70℃温育5～15min；5）加入酚、氯仿和异戊醇混合液，轻柔8字混匀5～15min；室温静置5～15min；离心；6）取上清，加入氯仿和异戊醇混合液，轻柔8字混匀5～15min；室温静置5～15min；离心；7）取上清，加入异丙醇，轻柔混匀，－20℃，静置30min；室温离心；8）75%乙醇洗一遍，晾干；室温离心；9）加入贮存液Ⅴ重悬，4℃过夜溶解，即得厌氧颗粒污泥微生物总DNA。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：姬丹丹，臧立华，薛嵘，李肖玲，
申请(专利权)人：齐鲁工业大学，
类型：发明
国别省市：