一种同时分析检测动物组织中残留兽药组分的方法技术

本发明专利技术公开了一种同时分析检测动物组织中残留兽药组分的方法：动物组织样品经过50%乙腈+乙醇匀浆、超声提取，正己烷净化，乙腈+乙醇进一步沉淀，浓缩后用UPLC-MS/MS在负离子模式下，进行多反应监测(MRM)测定，根据标准曲线和外标法定量，检测计算得到动物组织中46种残留兽药组分的含量。本发明专利技术方法可用于18种喹诺酮类药物、22种磺胺类药物以及氨苯砜、苯乙醇胺A、阿莫西林、金刚烷胺、金刚乙胺、乙氧基喹啉等目前常用到的兽药，可一次性同时快速准确检测，扩大了本方法的应用范围。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了：动物组织样品经过50%乙腈+乙醇匀浆、超声提取，正己烷净化，乙腈+乙醇进一步沉淀，浓缩后用UPLC-MS/MS在负离子模式下，进行多反应监测(MRM)测定，根据标准曲线和外标法定量，检测计算得到动物组织中46种残留兽药组分的含量。本专利技术方法可用于18种喹诺酮类药物、22种磺胺类药物以及氨苯砜、苯乙醇胺A、阿莫西林、金刚烷胺、金刚乙胺、乙氧基喹啉等目前常用到的兽药，可一次性同时快速准确检测，扩大了本方法的应用范围。【专利说明】—种同时分析检测动物组织中残留兽药组分的方法一、
本专利技术涉及一种动物组织中常用兽药残留分析检测的方法，尤其是涉及动物组织中残留的18种喹诺酮类药物、22种磺胺类药物、2种抗病毒药、I种β内酰胺类，I种砜类抗菌药，I种喹恶啉类，I种β -激动剂类药物新型快速通用多组分同时分析检测方法。二、
技术介绍
18种喹诺酮类药物(包括吡哌酸、麻保沙星、培氟沙星、氧氟沙星、依诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、单诺沙星、洛美沙星、奥比沙星、双氟沙星、沙拉沙星、斯帕沙星、西诺沙星、恶喹酸、萘啶酸、氟甲喹)；22种磺胺类药物(磺胺、乙酰磺胺、磺胺嘧啶、磺胺二甲异嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲嘧啶、三甲氧苄胺嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧唆、磺胺间甲氧嘧唆、磺胺甲噻唑、磺胺二甲嘧唆、磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧嘧唆、磺胺二甲异恶唑、磺胺苯甲酰、磺胺苯吡唑、磺胺氯哒嗪、乙胺嘧啶、磺胺多辛、磺胺喹恶啉)；氨苯砜、苯乙醇胺Α、金刚烷胺、金刚乙胺、阿莫西林、乙氧基喹啉是目前常用到的兽药，普遍应用于各种禽类、水产，在动物的感染性疾病预防中具有重要的地位。但是不合理的使用容易造成耐药菌的增加，同时残留药物可能对人体健康造成潜在的危害，所以必须按时停药以保证动物性产品质量安全，同时按照兽药国家标准和专业标准的规定，对动物组织中这些兽药进行检测分析。但是由于各种兽药的物理化学性质不同，差异较大，加上检测样品中其他成分的干扰，对动物组织中多种兽药残留同时快速分析检测构成很大的困难。这些药物日常使用率极高，并且在日常检测中检出阳性比例非常高。但是很多药物目前没有国标方法，例如氨苯砜、苯乙醇胺、金刚烷胺、金刚乙胺等。目前现有的国家标准方法中，也需要采用多个不同的方法对这些化合物进行检测，操作步骤复杂，需要使用固相萃取柱等，检测成本高，因此需要开发一种通用的检测方法用于日常样品的检测。三、
技术实现思路
本专利技术针对现有技术、方法存在的不足，提供一种动物组织中兽药残留多组分同时快速分析检测的新方法，此种方法采用UPLC-MS/MS进行多反应监测(MRM)测定，既能保证分析效果，又能简化前处理操作流程，便于日常检测。本专利技术采用的技术方案是:，所述方法为:动物组织样品经过50%乙腈+乙醇匀浆、超声提取，正己烷净化，乙腈+乙醇进一步沉淀，浓缩后用UPLC-MS/MS在负离子模式下，进行多反应监测(MRM)测定，根据标准曲线和外标法定量，检测计算得到动物组织中46种残留兽药组分的含量。具体包括以下步骤:(I)制备样品溶液:每5g捣碎后的动物组织样品按照以下方法处理得到样品溶液:称取5g捣碎后的动物组织样品于离心管中，加入6mL2.0mmol/L乙酸铵水溶液，9mL体积比4:1的乙腈+乙醇混合液，高速充分匀浆，混匀后超声提取5min，离心，取上清液A，剩余残渣加入15mL体积比4:1的乙腈+乙醇混合液，超声提取5min，离心、取上清液B与上清液A合并，得提取液，加入15mL正己烷，混匀后离心，得下层清液体，取其中7.5mL，经0.22 μ m滤膜过滤到带刻度的离心管中，40°C水浴下氮气吹至I?1.2mL,加入200 μ L DMSO后，用2.0mmol/L乙酸铵水溶液定容至1.5mL刻度线，得样品溶液；(2)将步骤(I)所得的样品溶液经超高效液相色谱-串联质谱联用仪检测，得样品溶液的超高效液相色谱图，色谱条件为:以碳十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，粒径< 5 μ m ;梯度洗脱:流动相A为含体积分数0.1%的甲酸的甲醇溶液，流动相B为含体积分数0.1%的甲酸的水溶液；色谱柱温度为40°C;进样量10 μ L，流速为0.3 μ L/min ;质谱条件为:ESI正负离子同时扫描模式，毛细管电压分别为3.5kV和3.0kV,源温145°C，去溶剂气温度:450°C;去溶剂气氮气流速:900L/h ;锥孔气氮气流速:50L/h ;碰撞气体:氩气3.3X l(T3mba ；多反应监测(MRM)模式检测；(3)绘制标准曲线:取吡哌酸、麻保沙星、培氟沙星、氧氟沙星、依诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、单诺沙星、洛美沙星、奥比沙星、双氟沙星、沙拉沙星、斯帕沙星、西诺沙星、恶喹酸、萘啶酸、氟甲喹、磺胺、乙酰磺胺、磺胺嘧唆、磺胺二甲异嘧唆、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲嘧啶、三甲氧苄胺嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲噻唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺二甲异恶唑、磺胺苯甲酰、磺胺苯吡唑、磺胺氯哒嗪、乙胺嘧啶、磺胺多辛、磺胺喹恶啉、氨苯砜、苯乙醇胺A、金刚烷胺、金刚乙胺、阿莫西林、乙氧基喹啉的标准品，配制成不同浓度的混合的标准工作液，按照步骤(2)相同条件进行测试，得标准工作液的超高效液相色谱图，分别对各个标准品，按照其浓度和峰面积，绘制标准曲线，分别得到上述46种标准品的标准曲线；(4)根据步骤(2)中样品溶液的超高效液相色谱图中各待测成分的峰面积及其对应的标准品的标准曲线，计算出样品溶液中各待测成分的浓度，以公式(I)计算得到动物组织样品中各待测成分的含量:X= (1.5XC/7.5X30)/M=6XCXMX 100%,......(I)X——动物组织样品中待测成分的含量，单位μ g/kgC——根据标准曲线得到样品溶液中待测成分的浓度，单位ng/mLM——动物组织样品的质量，单位g。所述步骤(2)中，所述梯度洗脱的程序优选如下表I所示:表I【权利要求】1.，其特征在于所述方法为:动物组织样品经过50%乙腈+乙醇匀浆、超声提取，正己烷净化，乙腈+乙醇进一步沉淀，浓缩后用UPLC-MS/MS在负离子模式下，进行多反应监测测定，根据标准曲线和外标法定量，检测计算得到动物组织中46种残留兽药组分的含量；所述残留兽药组分为吡哌酸、麻保沙星、培氟沙星、氧氟沙星、依诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、单诺沙星、洛美沙星、奥比沙星、双氟沙星、沙拉沙星、斯帕沙星、西诺沙星、恶喹酸、萘卩定酸、氟甲喹、磺胺、乙酰磺胺、磺胺嘧啶、磺胺二甲异嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲嘧啶、三甲氧苄胺嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲噻唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧嘧唆、磺胺二甲异恶唑、磺胺苯甲酰、磺胺苯吡唑、磺胺氯哒嗪、乙胺嘧唆、磺胺多辛、磺胺喹恶啉、氨苯砜、苯乙醇胺A、金刚烷胺、金刚乙胺、阿莫西林或乙氧基喹啉。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤: (O制备样品溶液:每5g捣碎后的动物组织样品按照以下方法处理得到样品溶液: 称取5g捣碎后的动物组织样品于离心管中，加入6mL2.0mmoI/L乙酸铵水溶液，9mL体积比4:1的乙腈+乙本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时分析检测动物组织中残留兽药组分的方法，其特征在于所述方法为：动物组织样品经过50%乙腈+乙醇匀浆、超声提取，正己烷净化，乙腈+乙醇进一步沉淀，浓缩后用UPLC‑MS/MS在负离子模式下，进行多反应监测测定，根据标准曲线和外标法定量，检测计算得到动物组织中46种残留兽药组分的含量；所述残留兽药组分为吡哌酸、麻保沙星、培氟沙星、氧氟沙星、依诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、单诺沙星、洛美沙星、奥比沙星、双氟沙星、沙拉沙星、斯帕沙星、西诺沙星、恶喹酸、萘啶酸、氟甲喹、磺胺、乙酰磺胺、磺胺嘧啶、磺胺二甲异嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲嘧啶、三甲氧苄胺嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲噻唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺二甲异恶唑、磺胺苯甲酰、磺胺苯吡唑、磺胺氯哒嗪、乙胺嘧啶、磺胺多辛、磺胺喹恶啉、氨苯砜、苯乙醇胺A、金刚烷胺、金刚乙胺、阿莫西林或乙氧基喹啉。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：倪梅林，钟莺莺，葛晓鸣，湛嘉，俞雪钧，
申请(专利权)人：宁波出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：浙江;33