本发明专利技术涉及检测一对用于检测巴贝斯虫的引物对，其中的上下游引物序列如如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。一种用于检测巴贝斯虫的实时荧光PCR试剂盒，包括Taq DNA聚合酶混合液，ROX染料，引物1：核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，引物2：核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，TaqMan探针：核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，阴性对照，阳性对照。提供的实时荧光定量PCR检测试剂盒使用方便，试剂盒所用的试剂少，大大简化了操作过程，减少了在操作过程的污染，检测效果特异性强，灵敏度高。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及检测一对用于检测巴贝斯虫的引物对，其中的上下游引物序列如如SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2所示。一种用于检测巴贝斯虫的实时荧光PCR试剂盒，包括Taq?DNA聚合酶混合液，ROX染料，引物1：核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示，引物2：核苷酸序列如SEQ?ID?No.2所示，TaqMan探针：核苷酸序列如SEQ?ID?No.3所示，阴性对照，阳性对照。提供的实时荧光定量PCR检测试剂盒使用方便，试剂盒所用的试剂少，大大简化了操作过程，减少了在操作过程的污染，检测效果特异性强，灵敏度高。【专利说明】用于检测巴贝斯虫的引物和实时荧光定量PCR试剂盒
本专利技术属于生物
，具体地涉及一种用于检测巴贝斯虫的引物和实时荧光定量PCR试剂盒。
技术介绍
巴贝斯虫病(Babesiosis)，是由顶复门孢子虫纲梨形虫亚纲梨形虫目巴贝斯属的多种原虫寄生于动物和人体而导致的一类血液原虫病的总称。研究显示，人巴贝斯虫病的主要病原是双芽巴贝斯虫(Babesia divergens)和鼠源巴贝斯虫(Babeisia microti)。人体感染后，可引起血红蛋白尿、黄疸、高热等，严重者可导致死亡。巴贝斯虫病的传染源是动物宿主，蜱是传播媒介。离开蜱和宿主，巴贝斯虫不能存活。啮齿类动物的数量大，分布广，活动场所与蜱的生境一致，其常有蜱寄生。流行病学资料显示，人群患者多是在野外旅游或作业时，因受到蜱叮咬而发病。因此，啮齿类动物作为人巴贝斯虫病的传染源意义十分重大。特别是随着经济水平的提高和户外旅游业的发展，增加了人类患此类疾病的机会，特别是增高了从非流行区进入流行区时被感染的风险。近年来，人感染巴贝斯虫病例的报道不断增多，因此，开展人巴贝斯虫病的相关研究显得尤为迫切。由于人巴贝斯虫病没有典型的临床表现，实验室检测成为人巴贝斯虫病诊断的主要依据，尤其是对于非典型症状或无症状感染者，灵敏的检测技术成为检测人巴贝斯虫的关键。传统的巴贝斯虫的检测方法是采用血涂片染色镜检的方式进行，但图片染色镜检结果收到很多因素的影响，准确性较差。目前实验室检测用的方法是普通PCR，但普通PCR结果并不理想，并且对巴贝斯虫检测繁琐，检测周期长。
技术实现思路
针对现有技术的上述问题，本专利技术提供一组用于检测巴贝斯虫的核酸序列。本专利技术还提供一种用于检测巴贝斯虫的实时荧光定量PCR试剂盒。本专利技术采用以下技术方案:一种用于PCR检测巴贝斯虫的引物对，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID N0.1和 SEQ ID N0.2 所示。一组用于检测巴贝斯虫的实时荧光定量PCR核酸，该组核酸包括引物对、探针和作为阳性对照的扩增产物，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.2所示，所述探针的核苷酸 序列如SEQ ID N0.3所示，所述作为阳性对照的扩增产物的核苷酸序列如 SEQ ID N0.4 所示。一种用于检测巴贝斯虫的实时荧光定量PCR的试剂盒，该试剂盒包括:Taq DNA聚合酶混合液(2 X );ROX 染料；引物1:核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示；引物2:核苷酸序列如SEQ ID N0.2所示；TaqMan探针:核苷酸序列如SEQ ID N0.3所示，并且其5'标记有FAM基团、3 '端标记NONE基团；阴性对照:灭菌超纯水；阳性对照:携带有扩增产物的质粒DNA，所述扩增产物的核苷酸序列如SEQIDN0.4所示。如上所述的试剂盒，优选地，所述Taq DNA聚合酶混合液(2 X )为PCR反应用的DNA聚合酶、Buffer、dNTP混合液的2倍浓度的混合物；所述ROX染料为ROX ReferenceDye II (50X)。如上所述的试剂盒，优选地，在应用该试剂盒时，按照以下终浓度配置实时荧光定量PCR反应液:【权利要求】1.一种用于PCR检测巴贝斯虫的引物对，其特征在于，所述引物对的核苷酸序列如SEQID N0.1 和 SEQ ID N0.2 所示。2.一组用于检测巴贝斯虫的实时荧光定量PCR核酸，其特征在于，该组核酸包括引物对、探针和作为阳性对照的扩增产物，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID N0.1和SEQ IDN0.2所示，所述探针的核苷酸序列如SEQ ID N0.3所示，所述作为阳性对照的扩增产物的核苷酸序列如SEQ ID N0.4所示。3.一种用于检测巴贝斯虫的实时荧光定量PCR的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括: Taq DNA聚合酶混合液(2 X ); ROX染料； 引物1:核苷酸序列如SEQ ID N0.1所示； 引物2:核苷酸序列如SEQ ID N0.2所示； TaqMan探针:核苷酸序列如SEQ ID N0.3所示，并且其Y标记有FAM基团、3丨端标记NONE基团； 阴性对照:灭菌超纯水； 阳性对照:携带有扩增产物的质粒DNA，所述扩增产物的核苷酸序列如SEQID N0.4所/Jn ο4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述TaqDNA聚合酶混合液(2X )为PCR反应用的DNA聚合酶、B uffer、dNTP混合液的2倍浓度的混合物；所述ROX染料为ROXReference Dye II (50X)。5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，在应用该试剂盒时，按照以下终浓度配置实时荧光定量PCR反应液: Taq DNA聚合酶混合液(2x)Ix'j!物 I0.5μΜ/μ?引物 20.5μΜ/μΙ^TaqMan 探针0.25μΜ/μ? ROX Reference Dye Il (5()χ)Ix。【文档编号】C12R1/90GK103710433SQ201310566411【公开日】2014年4月9日 申请日期:2013年11月14日 优先权日:2013年11月14日 【专利技术者】刘丽娟, 陈倩, 富英群 申请人:中国检验检疫科学研究院本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于PCR检测巴贝斯虫的引物对，其特征在于，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘丽娟，陈倩，富英群，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11
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