野生百合快速繁殖的组织培养方法技术

本发明专利技术涉及野生百合快速繁殖的组织培养方法，属于花卉培养技术领域。本发明专利技术方法采用百合的蕾期花梗作为百合组培的外植体，同时在培养前，对花梗作了彻底的消毒，在培养基中除采用6-BA、NAA、IBA作为生长素或激素外，还添加MES作为缓冲剂，有效地控制了组织培养过程中的酸碱度，使pH值长期维持在百合外植体分化、增殖和生长的最适的范围内，提高了诱导效率和增殖系数，诱导率为98～100%，每个外植体诱导的不定芽数不低于15个，增殖系数为5～7，生根率为100%且根系健壮，适用于杂交后代优良单株的安全繁殖，为百合野生资源的保护提供了有效的手段。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及，属于花卉培养
。本专利技术方法采用百合的蕾期花梗作为百合组培的外植体，同时在培养前，对花梗作了彻底的消毒，在培养基中除采用6-BA、NAA、IBA作为生长素或激素外，还添加MES作为缓冲剂，有效地控制了组织培养过程中的酸碱度，使pH值长期维持在百合外植体分化、增殖和生长的最适的范围内，提高了诱导效率和增殖系数，诱导率为98～100%，每个外植体诱导的不定芽数不低于15个，增殖系数为5～7，生根率为100%且根系健壮，适用于杂交后代优良单株的安全繁殖，为百合野生资源的保护提供了有效的手段。【专利说明】
本专利技术涉及适用于野生百合资源保护性和优良杂交后代快速繁殖的组织培养方法，属于花卉培养
。
技术介绍
百合是百合科（Liliaceae)百合属（Lilium)植物的总称，其花朵硕大，色彩艳丽，具有很高的观赏、食用及药用价值。全世界百合野生资源约有100种和变种，其中中国原产约55种和变种，品种近万个。百合野生资源的收集与保护是百合育种工作的重要基础，由于人为和自然的影响，一方面自然资源原生境遭破坏严重，许多种类面临灭绝的危险，野生百合种质资源的繁殖保护迫在眉睫。另一方面，现代社会对百合新品种需求旺盛，需要不断快速推出新品种。而传统的百合资源收集、繁殖，均是依靠采挖野生百合种球异地种植或使用种球进行组织培养，由于气候环境条件差异，使得大量野生种球不能在移植圃中存活保存下来，而广泛应用的基于种球鳞片的组织培养也常常因为其携带的各类共生或非共生真菌、细菌而出现大量初代污染，导致材料废弃。如此一来，导致重复野外采集，极易对一些重要稀有资源造成毁灭性破坏。同样情况，也发生在杂交育种优良后代选择繁育环节中。已有许多通过组织培养的方法对百合野生资源进行收集和保护的研究，主要都是以种球鳞片为外植体。熊丹等(熊丹，陈发菊，梁宏伟，等.宜昌百合的组织培养研究福建林业科技，2007，34 (4) :91-94)以鳞片为外植体对宜昌百合进行了组织培养研究。邱宁宏等(邱宁宏，罗林会，王勤，等.淡黄花百合的组织培养与快速繁殖中国野生植物资源，2004，23(2) :64-65)选取鳞片为外植体，筛选出了适合淡黄花百合的组织培养条件。赵强等(赵强，李庆典，赵玉岭.青岛百合的组织培养技术研究北方园艺，2007,6:213-214)以青岛百合的鳞片为外植体，研究了青岛百合的组织培养体系。Bakhshaie等（Bakhshaie M, BabalarM, Mirmasoumi M, et al. Somatic embryogenesis and plant regeneration of Liliumledebourii (Baker) Boiss. , an endangered species. Plant Cell, Tissue and OrganCulture (PCTOC), 2010,102 (2) : 229-235.)利用鳞片为外植体，通过诱导出胚型愈伤途径，建立了莉黛柏蕊百合（Li`lium ledebourii (Baker)Boiss.)的再生体系。陈丽静等（陈丽静，葛菱，张丽朝.鲜百合鳞茎诱导及再生体系建立中国农学通报，2011,27 (19) : 121-124)以朝鲜百合的鳞茎为外植体，建立了朝鲜百合的再生体系建立。马素娴等(马素娴，田志强，亢秀萍.山西野生卷丹百合鳞茎组织培养山西农业科学，2012,40(4) :319-321)以卷丹百合鳞莖鳞片为外植体，探讨影响其分化的主要因素。Burun等（Burun B, Sahin0.Micropropagation of Lilium candidum L. :a rare and native bulbous flower ofTurkey. Bangladesh Journal of Botany, 2013,42 (I) : 185-187.)以圣母百合（Liliumcandidum L.)的鳞片为外植体，建立了圣母百合的组织扩繁体系。百合的鳞茎在离体的条件下，在合适浓度的合适激素的诱导下，会诱导产生不定芽或产生愈伤组织。诱导出的愈伤组织经过分化培养可以分化出不定芽，不定芽进过增殖培养之后，再进行生根诱导，可获得完整植株，从而达到组织快速繁殖的目的。百合资源调查、收集工作通常在花期进行，因为花期百合花容易在繁杂的植被丛中被发现。而果期很难找到百合植株，一般在野外采收种子的难度很大。所以，通常是在花期采挖种球(鳞茎）进行移植或组织培养。但是，花期百合移植成活率极低。通常对百合野生资源的组织培养过程中，均选择百合的鳞片做外植体。这样就要将百合球挖出带走，破坏了野生资源。此外，百合鳞茎生长在土壤中，土壤中的微生物种类丰富，鳞片上带有很多种类真菌或细菌，在进行初代培养时污染率极高。如果以地上部分组织如花器官作为外植体，那显然可以减少在花期资源调查时以采挖种球收集资源材料对资源的破坏，同时，还可能减少外植体带菌的量，从而减少初代培养的污染损失。同样也适宜于优良杂交后代植株繁殖。已报道的以花器官为外植体的试验均集中在现代栽培品种(如：‘索邦’、‘西伯利亚’)和磨香(铁炮）百合（lilium Iongiflorum),而且分化率均在90%以下,仅有钟海丰等(钟海丰，黄宇翔，钟淮钦，叶秀仙，黄敏玲.新铁炮百合花器官组织培养研究.福建农业学报，2010，25 (2) :207~21，·）的分化率达到90. 8%，但不定芽的增殖率最高只有4. 8%，且生长势较弱。如果用在野生百合资源培养还涉及到初代污染问题，但均未见报导。刘雅莉，张剑侠，潘学军(刘雅莉，张剑侠，潘学军.东方百合’索邦’的花器官培养与快速繁殖.西北植物学报，2004，24 (12) ：2350~2354.)以东方百合‘索邦’的花梗、花托、花瓣和花丝为外植体进行了离体培养与快速繁殖研究。结果表明：4种花器官均可直接诱导产生不定芽，其中花梗在N6基本培养基上诱导率为75. 8%，MS上为72. 2%。赖钟雄等(赖钟雄，郑香洪，张春镇，陈发兴，林庆良，吴金寿.麝香百合花梗离体培养再生植株.福建农林大学学报(自然科学版）.2004，33 (2):186~188.)以麝香百合的花梗为外植体进行了离体培养再生植株的研究.结果表明在附加2mg. L-1ΒΑ+Ο. lmg. T1NAA的MS培养基花梗培养产生小鳞茎的诱导率可高达86. 67%。在附加O. Smg^1BA的MS培养基上继代，增殖系数最高达5.1在附加O. 5mg. T1NAA的1/2MS培养基上培养生根，生根率90%以上。林斯专等(林斯专，郑香洪，陈发兴.麝香百合花梗组培快繁.福建果树，2004. 128 (1):8~10.)认为花梗是麝香百合地上都诱导愈伤组织的最适器官，其不定芽分化的最佳培养基配方为MS+BA 2mg.I/1+NAA O. lmg. L-1 ;以花梗为外植体的不定芽的分化率达到86. 67%，增殖培养基以MS+BA0.Smg.!/1为宜，繁殖系数达5. I。芽苗生长势强。王惠和贾桂霞(王惠，贾桂霞.‘西伯利亚’百合多种外植体的组织培养研究.中国观赏园艺研究进展2007. 185~1本文档来自技高网...

【技术保护点】
野生百合快速繁殖的组织培养方法，包括如下步骤：（1）取蕾期幼嫩花梗，消毒除杂菌，（2）将幼嫩花梗纵切成两半，再切成段，将纵切面放置于诱导培养基上进行诱导培养出不定芽，（3）将诱导出的不定芽接到增殖培养基上进行增殖培养，获得丛生芽，（4）将丛生芽接到生根培养基上进行生根培养，获得根系健壮的无菌组培苗。所述诱导培养基为：MS+6?BA?0.5mg.L?1+NAA?1.5mg.L?1+蔗糖30.0?g.L?1+MES?2g.L?1+琼脂6.0g.L?1，pH=5.8～6.0；增殖培养基为MS+IBA?0.1mg.L?1+蔗糖60.0?g.L?1+MES?2g.L?1+琼脂6.0g.L?1，pH=5.8～6.0；生根培养基为：1/2MS+IBA?0.1mg.L?1+NAA?0.1mg.L?1+MES?2g.L?1+蔗糖60.0g.L?1+琼脂6.0?g.L?1，pH=5.8～6.0。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：明军，袁素霞，刘春，徐雷锋，
申请(专利权)人：中国农业科学院蔬菜花卉研究所，
类型：发明
国别省市：