RBX1作为血清标志物的应用及其试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了RBX1作为血清标志物的应用，RBX1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，RBX1作为血清标志物可用于诊断和预示肠癌、肝癌、乳腺癌、胃癌或胰腺癌等；本发明专利技术还公开了RBX1血清检测试剂盒，该试剂盒能够用于肠癌、肝癌、乳腺癌、胃癌或胰腺癌的早期诊断、治疗过程中的疗效评估以及治疗后的移转复发监控等，具有特异性好、灵敏度高等优点，可早于体征发现，具有重要的临床意义。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了RBX1作为血清标志物的应用，RBX1的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，RBX1作为血清标志物可用于诊断和预示肠癌、肝癌、乳腺癌、胃癌或胰腺癌等；本专利技术还公开了RBX1血清检测试剂盒，该试剂盒能够用于肠癌、肝癌、乳腺癌、胃癌或胰腺癌的早期诊断、治疗过程中的疗效评估以及治疗后的移转复发监控等，具有特异性好、灵敏度高等优点，可早于体征发现，具有重要的临床意义。【专利说明】RBX1作为血清标志物的应用及其试剂盒
本专利技术属于用于癌症的标志物，具体涉及RBXl作为血清标志物的应用，还涉及RBXl的血清检测试剂盒。
技术介绍
RBXl (Ring-boxl)蛋白，又称为ROCl蛋白，是泛素连接酶E3复合物一SCF复合物的组成成分，蛋白保守程度高。RBXl蛋白由Rbxl基因(NM_014248)编码，该基因定位于22号染色体22ql3.2区，cDNA全长为521bp，开放阅读框为327bp，编码108个氨基酸，预测蛋白的分子量大约为12kDa。RBXl也能与其他亚基相互作用形成复合物发挥泛素连接酶作用，如RBXl与eullin-Ι形成异源二聚体从而催化泛素化进程，在蛋白的泛素化过程中发挥了重要的作用。蛋白质是执行生命活动的基本分子，细胞中的蛋白质不断地处于合成、修饰与降解的代谢更新过程中。泛素介导的蛋白质降解参与到细胞周期、炎症反应、细胞凋亡、抗原提呈等许多生命过程中。因此，泛素介导的蛋白质降解途径的异常与许多疾病，如恶性肿瘤、肌肉萎缩等的发生密切相关。Jia等通过免疫组织化学方法检测RBXl在肺癌、肝癌、乳腺癌、肠癌、卵巢癌中过表达，且通过基因沉默可刺激细胞死亡、细胞周期阻滞、抑制肿瘤细胞生长，表明ROCl可作为抗肿瘤靶点(RBX1/R0C1-SCF E3ubiquitin Iigaseis required for mouseembryogenesis and cancer cell survival.Cell Division2009,4:16 ；R0Cl/RBXlE3Ubiquitin Ligase Silencing Suppresses Tumor CellGrowth viaSequential Induction of G2—M Arrest, Apoptosis, and Senescence Lijun Jia, MariaS.Soengas，and Yi Sun.Cancer Res2009 ;69: (12).Junel5，2009)。Wei 等公开了 RBXl 在肿瘤细胞中过表达，抑制RBXl可使肿瘤细胞衰老、凋亡，同时抑制RBXl也影响正常组织细胞(Small RING Finger Proteins RBXland RBX2of SCF E3Ubiquitin Ligases:The Rolein Cancer and as Cancer Targets.Genes&Cancerl.(7)700 - 707.2010)。后续研究证实通过降低RBXl表达能够抑制肝癌细胞的生长和分化，并且ROCl表达水平与预后相关，可作为肝癌干预的靶点。在其他癌症中，诸如膀胱癌和非小细胞肺癌也与RBXl表达相关，可以作为治疗靶点和疾病诊断。虽然目前已在不同的组织细胞中检测到RBX1，且与其肿瘤(如肝癌、乳腺癌、肠癌)相关，以及与癌细胞的生长和分化相关，但目前为止RBXl的可溶形式从未被提及，即RBXl在血清中的存在与癌细胞的相关未见报道。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供RBXl作为血清标志物的应用；本专利技术的目的之二在于提供RBXl血清检测试剂盒。为实现上述专利技术目的，提供如下技术方案:RBXl作为血清标志物的应用，所述RBXl的氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示。优选的，所述血清标志物为诊断和预示肠癌、肝癌、乳腺癌、胃癌或胰腺癌的血清标志物。优选的，所述诊断和预示为诊断、疗效评估或转移复发监控。2.RBXl血清检测试剂盒，所述试剂盒含有捕获血清RBXl的捕获剂，所述RBXl的氨基酸序列如SEQ ID N0.1所示。优选的，所述捕获剂为特异识别RBXl的抗体。优选的，所述捕获剂为兔RBXl单克隆抗体。优选的，所述捕获剂固定于固相载体上。更优选的，所述固相载体为酶标板。更优选的，所述试剂盒还含有酶标多克隆抗体和显色底物。优选的，所述酶标多克隆抗体为HRP标记的鼠RBXl多克隆抗体，所述显色底物TMB。本专利技术的有益效果在于:本专利技术公开了 RBXl作为血清标志物的应用，因此可以通过检测血清中的RBXl来诊断和预示肠癌、肝癌、乳腺癌、胃癌或胰腺癌等疾病，检测血清具有取样方便，给患者带来的痛苦较少；本专利技术还公开了 RBXl血清检测试剂盒，该试剂盒能够用于肠癌、肝癌、乳腺癌、胃癌或胰腺癌的早期诊断、治疗过程中的疗效评估以及治疗后的移转复发监控等，具有特异性好、灵敏度高等优点，可早于体征发现，具有重要的临床意义。【专利附图】【附图说明】为了使本专利技术的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本专利技术提供如下附图:图1为RBXl血清检测试剂盒检测肠癌患者与健康人血清中RBXl浓度散点图。图2为RBXl血清检测试剂盒检测肠癌患者与健康人血清的ROC曲线。图3为RBXl血清检测试剂盒检测肝癌患者与健康人血清中RBXl浓度散点图。图4为RBXl血清检测试剂盒检测肝癌患者与健康人血清的ROC曲线。图5为RBXl血清检测试剂盒检测乳腺癌患者与健康人血清中RBXl浓度散点图。图6为RBXl血清检测试剂盒检测乳腺癌患者与健康人血清的ROC曲线。图7为RBXl血清检测试剂盒检测胃癌患者与健康人血清中RBXl浓度散点图。图8为RBXl血清检测试剂盒检测胃癌患者与健康人血清的ROC曲线。图9为RBXl血清检测试剂盒检测胰腺癌患者与健康人血清的RBXl浓度散点图。图10为RBXl血清检测试剂盒检测胰腺癌患者与健康人血清的ROC曲线。【具体实施方式】下面将结合附图，对本专利技术的优选实施例进行详细的描述。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如分子克隆实验指南(第三版，J-萨姆布鲁克等著)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例1建立RBXl血清检测反应体系将浓度为5 μ g/mL兔RBXl单克隆抗体包被ELISA板，于4°C条件下包被过夜，洗板；然后每孔加入200 μ L酶标板稳定剂I (IBS-001)(购自湖州英创生物科技有限公司)，在37°C封闭I小时，洗板3次，将；将浓度度分别为0pg/mL，31.25pg/mL，62.5pg/mL, 125pg/mL, 250pg/mL, 500pg/mL, lOOOpg/mL的标准品(RBX1重组蛋白)或样品加入到封闭板中，在37°C条件下反应I小时，洗板三次；然后使用浓度为0.5 μ g/mL的HRP标记的鼠RBXl多克隆抗体(购自Novus Biologicals，货号为H00009978-B01 )，37°C条件下反应I小时后洗板三次，用TMB显色2-3分钟，再用浓度为2M硫酸终止反应，最后检测在450nm处的OD值。检测体系优化:RBXl抗体:购买三株RBXl抗体，鼠RBXl多克隆抗体(购自Novus本文档来自技高网...

【技术保护点】
RBX1作为血清标志物的应用，所述RBX1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王弢，秦勇，周小进，渠香云，
申请(专利权)人：苏州工业园区为真生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32