一种从苜蓿中提取高纯度绿原酸的方法技术

一种从苜蓿中提取高纯度绿原酸的方法，包括以下步骤：将苜蓿清洗、干燥、粉碎研磨；加水高压匀浆，离心取上清液得到高浓度粗提取液，高浓度粗提取液超滤得到滤液；大孔树脂柱吸附，乙醇洗脱，收集洗脱液后，重复所述吸附和洗脱；洗脱液在低温下真空干燥；再加丙酮溶解过滤，取滤液回收丙酮，真空干燥。本发明专利技术原料廉价易得，为国内外种植面积最大的豆科植物，可大批量用于绿原酸的提取，生产成本低，操作简单，方法绿色环保，无有害溶剂，还可广泛应用于金银花、杜仲叶或者咖啡豆等原料提取绿原酸，条件温和，无强光不加热，有效避免了绿原酸的分解，提高了绿原酸的纯度，使用高压匀浆、多次离心以及超滤膜过滤，大大提高了绿原酸的提取率和纯度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于绿原酸提取
，涉及从植物中提取绿原酸的方法，特别是从苜蓿中高效分离提取高纯度绿原酸的方法。
技术介绍
苜蓿为豆科苜蓿属植物，其花为紫色，因产草量高、富含蛋白质、适应性强被称为“牧草之王”，是我国主要牧草之一，是国内外种植面积最大的豆科牧草。苜蓿还富含绿原酸有价值的生物活性成分，然而目前没有从苜蓿中分离提取绿原酸的相关研究。苜蓿中的绿原酸有广泛的生物活性，如抗氧化，抑制突变和抗肿瘤，能明显促进肠胃蠕动、胃液分泌及利胆、清除自由基和抗脂质过氧化等作用，其水解产物咖啡因也有利胆、升高白细胞的作用。绿原酸主要分布于忍冬科、蔷薇科、菊科、茜草科和杜仲科等植物中，是杜仲、金银花等传统中药清热解毒、消炎抗菌的主要成分，是植物在有氧呼吸过程中经莽草酸途径合成的一种苯丙素类化合物，分子式为C16H18O9，分子量为354.90，在碱性或高温条件下易水解。其有效的生物活性被高度重视，成为国际公认的“植物黄金”。高纯度的绿原酸具有极高的经济价值和市场前景。目前有很多绿原酸的制备工艺，绿原酸本身有不稳定性，提取时要避免高温、长时间加热和强光照射，现有水煎煮法，水提醇沉法，超临界流体萃取法等，超临界流体萃取法产率高但成本也高，目前还不能应用于工业化生产；碱沉淀法易使绿原酸水解；微波提取和超声提取虽然提取时间、能耗等大大降低，但存在噪音大、难以规模化生产等不足；超临界流体萃取法存在设备投资大，耗资高，对相对分子质量高、极性强的物质提取困难等问题。这些方法都存在较大的问题，有的纯度低，有的成本高，有的过于繁琐复杂，有的产品废液污染环境，有的不适合大规模工业生产等。如中国专利01144170.4中所记载的提取方法只能提取到纯度为84%的绿原酸。随着市场上对绿原酸需求不断增长，如何简便、快速地从原料中得到质量稳定、纯度高、收率高、安全可靠的绿原酸的提取方法研究很有必要。
技术实现思路
本专利技术针对现有绿原酸制备技术的不足之处，提出一种从苜蓿中简单、快速、便捷地提取高纯度绿原酸的方法。包括以下步骤:⑴将苜蓿清洗、干燥、粉碎研磨；⑵加水高压匀浆，离心取上清液得到高浓度粗提取液，高浓度粗提取液超滤得到滤液；⑶大孔树脂柱吸附，乙醇洗脱，收集洗脱液后，重复所述吸附和洗脱；⑷洗脱液在低温下真空干燥；再加丙酮溶解过滤，取滤液回收丙酮，真空干燥。进一步地，所述高压匀浆温度维持在15~20°C，避免绿原酸分解，加水量为原料的10~15倍。进一步地，所述离心分两次进行，转速分别为1500r/h和2000r/h。进一步地，所述超滤所使用的超滤膜的膜孔直径在0.4微米以下。进一步地，所述大孔树脂柱采用NKA-2大孔树脂，其极性好，能最大量吸附绿原酸，从而提闻绿原酸的提取率。进一步地，所述洗脱采用5倍树脂柱体积的20%的乙醇进行洗脱，流速为0.5/h,能最大程度将绿原酸洗脱下来。进一步地，所述经研磨的苜蓿直径在1_以下，增大了苜蓿的表面积，有利于提取高浓度的绿原酸。进一步地，所述方法经步骤⑴⑵⑶⑷得到的产物，采用薄层层析-紫外分光光度法测得绿原酸纯度在95%以上。本专利技术所述薄层层析-紫外分光光度法是，在硅胶板上点样，采用展层剂展开，在紫外灯下刮取斑点，经乙醇溶解，然后通过紫外分光光度法定量检测绿原酸的含量。本专利技术展层剂选用体积比为10:2:3的乙酸乙酯、乙酸和水的混合液；紫外分光光度检测采用TU-1800SPC型紫外分光光度计于330nm处检测吸光度。进一步地，所述方法选取叶片重量达全株的50%以上的苜蓿。其中优选，采取新鲜无污染处于花蕾期和初花期的鲜嫩苜蓿，其含有丰富的绿原酸，是目前国内外绿原酸提取领域中未涉及过的。本专利技术的有益效果是:`1.本专利技术方法的原料廉价易得，为国内外种植面积最大的豆科植物，可大批量用于绿原酸的提取，生产成本低，操作简单，方法绿色环保。该方法除可用苜蓿作为原料外，还可广泛应用于金银花、杜仲叶或者咖啡豆等位原料提取绿原酸。2.在整个操作过程中，条件温和，无强光不加热，有效避免了绿原酸的分解，提高了绿原酸的纯度。3.使用高压匀浆、多次离心以及超滤膜过滤，大大提高了绿原酸的提取率和纯度。4.本专利技术的方法具有工艺先进、操作简便、过滤容易、成本低、无有害溶剂、纯度闻、的率闻，适用于工业化大生广等优点。【具体实施方式】下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。实施例11.取苜蓿叶50kg，除杂洗净干燥，粉碎研磨成10-20目的粉末，加10倍于粉末的蒸馏水，将悬浊液放入高压匀浆机中打浆，进一步粉碎原料，增大表面积；2.将上述混合液在高速离心机中离心，第一次离心转速为1000r/h，弃沉淀取上清液再次离心，第二次离心转速为1500r/h ；3.将上述提取液再经0.4微米以下的超滤膜过滤叶蛋白、多糖等高分子物质；4.将上述提取液经大孔树脂NKA-2富集、5倍柱体积20%乙醇多次洗脱后，收集洗脱液在真空干燥，再用丙酮溶解，收取滤液回收丙酮喷雾干燥，采用薄层层析-紫外分光光度计检测330nm处的吸光度，发现绿原酸在1.2~12.6μ g/ml范围内具有良好的线性关系Cy=吸光度，X=绿原酸质量浓度，回归方程为y=0.023x+0.499，r2=0.9463)，测定结果显示绿原酸样品回收率为88.2%。实施例21.取苜蓿叶80kg，除杂洗净干燥，粉碎研磨成10-20目的粉末，加10倍于粉末的蒸馏水，将悬浊液放入高压匀浆机中打浆，进一步粉碎原料，增大表面积；2.将上述混合液在高速离心机中离心，离心转速为1000r/h，弃沉淀取上清液再次离心，转速为1500r/h ；3.将上述提取液再经0.4微米以下的超滤膜过滤叶蛋白、多糖等高分子物质； 4.将上述提取液经大孔树脂NKA_2、5倍柱体积20%乙醇多次洗脱后，收集洗脱液在真空下干燥的粉末，再用丙酮溶解，收取滤液回收丙酮喷雾干燥，采用薄层层析-紫外分光光度计检测330nm处的吸光度，发现绿原酸在1.2~12.6μ g/ml范围内具有良好的线性关系(y=吸光度，X=绿原酸质量浓度，回归方程为y=0.021x+0.529，r2=0.9690)，测定结果显示绿原酸样品回收率为90%。实施例31.取苜蓿叶100kg，除杂洗净干燥，粉碎研磨成10-20目的粉末，加十倍于粉末的蒸馏水，将悬浊液放入高压匀浆机中打浆，进一步粉碎原料，增大表面积；2.将上述混合液在高速离心机中离心，第一次离心转速为1000r/h，弃沉淀取上清液再次离心，第二次离心转速为1500r/h ；3.将上述提取液经大孔树脂NKA-2富集、5倍柱体积20%乙醇多次洗脱后，收集洗脱液在真空下干燥的粉末，再用丙酮溶解，收取滤液回收丙酮喷雾干燥，采用薄层层析-紫外分光光度计检测330nm处的吸光度，发现绿原酸在1.2~12.6μ g/ml范围内具有良好的线性关系(y=吸光度，X=绿原酸质量浓度，回归方程为y=0.021x+0.533，r2=0.9840)，测定结果显示绿原酸样品回收率为93.4%。实施例41.取苜蓿叶100kg，除杂洗净干燥，粉碎研磨成10-20目的粉末，加10倍于粉末的蒸馏水，将悬浊液放入高压匀浆机中打浆，进一步粉碎原料，增大表面积；2.将上述混合液在高速离心本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从苜蓿中提取高纯度绿原酸的方法，其特征是包括以下步骤：⑴将苜蓿清洗、干燥、粉碎研磨；⑵加水高压匀浆，离心取上清液得到高浓度粗提取液，高浓度粗提取液超滤得到滤液；⑶大孔树脂柱吸附，乙醇洗脱，收集洗脱液后，重复所述吸附和洗脱；⑷洗脱液在低温下真空干燥；再加丙酮溶解过滤，取滤液回收丙酮，真空干燥。

【技术特征摘要】
1.一种从苜蓿中提取高纯度绿原酸的方法，其特征是包括以下步骤: ⑴将苜蓿清洗、干燥、粉碎研磨； ⑵加水高压匀浆，离心取上清液得到高浓度粗提取液，高浓度粗提取液超滤得到滤液； ⑶大孔树脂柱吸附，乙醇洗脱，收集洗脱液后，重复所述吸附和洗脱； ⑷洗脱液在低温下真空干燥；再加丙酮溶解过滤，取滤液回收丙酮，真空干燥。2.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述高压匀浆时，温度维持在15~20°C，加水量为原料的10~15倍。3.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述离心分两次进行，转速分别为1500r/h和2000r/ho4.根据权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜健，张星，郭鹏，杨宝灵，张万筠，高明波，
申请(专利权)人：大连民族学院，
类型：发明
国别省市：