CDC45L肽及包含它的疫苗制造技术

本发明专利技术涉及CDC45L肽及包含它的疫苗。具体地，提供了自SEQ ID NO:18衍生的分离的肽或片段，其结合HLA抗原且诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。该肽可包括上述氨基酸序列之一及1、2、或几处氨基酸序列替换、删除、或添加。本发明专利技术还提供了包括这些肽的药物组合物。本发明专利技术的肽可用于治疗癌症。

【技术实现步骤摘要】
CDC45L肽及包含它的疫苗 本申请是2010年5月25日提交的申请号为201080033325.X，专利技术名称为“CDC45L肽及包含它的疫苗”的中国专利申请的分案申请。
_2] 优先权本申请要求2009年5月26日提交的美国临时申请N0.61/217，133的权益，通过述及将其全部内容收入本文。本专利技术涉及生物科学领域，更具体的说是癌症治疗领域。具体而言，本专利技术涉及作为癌症疫苗极其有效的新肽，和用于治疗和预防肿瘤的药物。
技术介绍
肺癌是癌症的最常见形式，占每年1090万例癌症新病例中的135万例。它还是癌症相关疾病所致死亡的首要原因，占全世界670万癌症相关死亡中的118万(NPLl)。尽管最近系统疗法诸如化疗和分子靶向疗法取得改进，但是晚期肺癌患者的预后仍然很差(NPL2)。在50%的患者中肺癌在手术后复发，而且不到25%的患者响应系统化疗。因而，迫切需要更加有效的治疗模态，而且免疫疗法对于未来的肺癌疗法代表一种有希望的办法(NPL3-5)。治疗性癌症疫苗的成功最终可依赖于在肿瘤中相对于正常组织过表达的免疫原性抗原的鉴定。肿瘤相关抗原(TAA)对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的有效诱导已显示出有希望的结果(NPL6-7)。最近，与基因组信息关联的cDNA微阵列技术的开发提供了恶性细胞的基因表达的综合谱，然后可将其与正常细胞的比较(NPL8)。用cDNA微阵列技术进行的基因表达谱分析是鉴定可用于癌症诊断和免疫疗法的新TAA的一种有效办法(NPL9-12)。虽然已经发表了在肺癌中表达的几种候选TAA(NPL13-14)，但是重要的是要鉴定在给定癌症中过表达的多种TAA以开发更加有效的T细胞介导的癌症免疫疗法(NPL15)。⑶C45L(细胞分裂周期45样)是一种至关重要的细胞蛋白质，其在DNA复制的启动和延长二者中发挥功能，以确保染色体DNA每个细胞周期只复制一次(NPL16-19)。⑶C45L在所有真核生物间高度保守，而且在小鼠中对此基因的靶向破坏引起胚胎致死(NPL20)。在成人中，绝大多数细胞已经分化并停止细胞分裂，而且只有小群细胞在一些自我更新组织中增殖(NPL21)。因此，虽然CDC45L在长期休眠的、终末分化的且衰老的人细胞中不存在，但是它存在于增殖中的癌细胞的整个细胞周期(NPL18)。因而，CDC45L表达与增殖中的细胞群密切相关，并因此被认定为癌细胞生物学中新增殖标志物的一种有希望的候选(NPL18, 22)。然而，尚未完全调查⑶C45L作为癌症免疫疗法靶标的有用性。弓丨用表非专利文献[NPLlJParkin DM et al.CA Cancer J Clin2005;55:74-108[NPL2]Bunn PA, Jr.et al.Conclusion.0ncologist2008;13Suppll:37-46[NPL3]Ruttinger D et al.Surg Oncol Clin N Am2007;16:901-18[NPL4]Hirschowitz EA et al.Proc Am Thorac Soc2009;6:224-32[NPL5]Romero P et al.Clin Lung Cancer2008;9Suppl1:S28-36[NPL6]Stevanovic S et al.Nat Rev Cancer2002;2:514-20[NPL7]Brichard VG et al.Vaccine2007;25Suppl2:B61-71[NPL8]Hasegawa S et al.Cancer Res2002;62:7012-7[NPL9]Mathiassen S et al.Eur J Tmmunol2001;31:1239-46[NPL10]Schmidt SM et al.Cancer Res2004;64:1164-70[NPL11]Yamabuki T et al.1nt J 0ncol2006;28:1375-84[NPL12]Imai K et al.Clin Cancer Res2008;14:6487-95[NPL13]Harao M et al.1nt J Cancer2008;123:2616-25[NPL14]Yokomine K et al.1nt J Cancer2009;126:2153-63[NPL15]Fukushima S et al.J Immunother2009;32:219-31[NPL16]Aparicio T et al.Nucleic Acids Res2009;37:2087-95[NPL17]Saha P et al.J Biol Cheml998;273:18205-9[NPL18]Pollok S et al.FEBS J2007;274:3669-84[NPL19]Bauerschmidt C et al.Genes Cells2007;12:745-58[NPL20]Pollok S et al.Biochem Biophys Res Commun2007;362:910-5[NPL21]Hall PA et al.Developmentl989;106:619-33[NPL22]Li JN et al.BMC Cancer2008;8:395
技术实现思路
本专利技术至少部分基于可充当免疫疗法靶标的肽的发现。由于TAA有时被免疫系统察觉为“自身”并因此常常没有免疫原性，适宜靶标的发现是极其重要的。如上所述，⑶C45L(典型氨基酸序列和基因序列分别显示于SEQ ID NO: 18和SEQ ID NO: 17，而且序列还可得自GenBank登录号NM_003504)已经被鉴定为在癌症中上调，所述癌症的例子包括但不限于睾丸肿瘤、胰腺癌、膀胱癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、乳腺癌、食管癌、前列腺癌、慢性髓细胞样白血病(CML)、软组织肿瘤、胃癌、肝胆管癌、和结肠直肠癌。因此，⑶C45L是癌症/肿瘤免疫疗法的候选靶标。本专利技术进一步涉及⑶C45L基因产物的拥有诱导对⑶C45L特异性的CTL的能力的特定表位肽的鉴定。如下文详细讨论的，使用自⑶C45L衍生的HLA-A*2402或HLA_A*0201结合性候选肽来刺激从健康供体获得的外周血单个核细胞(PBMC)。然后建立了具有针对经每一种候选肽冲激的HLA-A24或HLA-A2阳性靶细胞的特异性细胞毒性的CTL系。这些结果证明，这些肽是能诱导针对表达⑶C45L的细胞的强力且特异性的免疫应答的HLA-A24或HLA-A2限制表位肽。另外，结果指示，CDC45L具有强免疫原性，而且它的表位是癌症/肿瘤免疫疗法的有效靶标。因而，本专利技术的一个目的是提供分离的结合HLA抗原的肽，特别是那些自CDC45L(SEQ ID NO: 18)或其免疫学活性片段衍生者。这些肽预期具有CTL诱导能力，并因此可用于离体诱导CTL或用于给受试者施用以诱导针对癌症的免疫应答，所述癌症诸如睾丸肿瘤、胰腺癌、膀胱癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、乳腺癌、食管癌、前列腺癌、慢性髓细胞样白血病(CML)、软组织肿瘤、胃癌、肝胆管癌、结肠直肠癌等等。优选的肽是九肽或十肽，更优选具有选自SEQ ID N本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种结合HLA抗原且具有细胞毒性T淋巴细胞(CTL)诱导能力的分离的肽，其中该肽衍生自由氨基酸序列SEQ ID NO:18组成的多肽或其免疫学活性片段。

【技术特征摘要】
2009.05.26 US 61/217,1331.一种结合HLA抗原且具有细胞毒性T淋巴细胞(CTL)诱导能力的分离的肽，其中该肽衍生自由氨基酸序列SEQ ID NO: 18组成的多肽或其免疫学活性片段。2.权利要求1的分离的肽，其中所述HLA抗原是HLA-A24或HLA-A2。3.权利要求1或2的分离的肽，其中所述肽包含选自下组的氨基酸序列:(a)SEQ ID NO: 4，2，3，7 和 12 ;和 (b)SEQID N0:4，2，3，7和12，其中替换、插入、删除和/或添加了 I个、2个、或几个氨基酸。4.权利要求1至3中任一项的分离的肽，其中所述的肽具有下列特征之一或二者: (a)N端起第二个氨基酸为或修饰为选自苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸和色氨酸的氨基酸；和 (b)C端氨基酸为或修饰为选自苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸和甲硫氨酸的氨基酸。5.权利要求1至3中任一项的分离的肽，其中所述的肽具有下列特征之一或二者: (a)N端起第二个氨基酸为或修饰为选自亮氨酸和甲硫氨酸的氨基酸；和 (b)C端氨基酸为或修饰为选自缬氨酸和亮氨酸的氨基酸。6.权利要求1至5中任一项的分离的肽，其中所述肽是九肽或十肽。7.—种分离的多核苷酸,其编码权利要求1至6中任一项的肽。8.一种用于诱导CTL的组合物，其中所述组合物包含一种或多种权利要求1至6中任一项所述的肽或者一种或多种权利要求7所述的多核苷酸。9.一种用于治疗和/或预防癌症和/或防止其手术后复发的药物组合物，其中该组合物包含一种或多种权利要求1至6中任一项所述的肽,或一种或多种权利要求7的多核苷酸。10.权利要求9的药物组合物，其配制为用于对HLA抗原为...

【专利技术属性】
技术研发人员：西村泰治，富田雄介，中村佑辅，角田卓也，
申请(专利权)人：肿瘤疗法科学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：日本;JP