跨物种特异性CD3-ε结合结构域制造技术

本发明专利技术涉及包含能够结合于人类和非黑猩猩灵长类CD3(ε)链的表位的人类结合结构域的多肽以及产生所述多肽的方法。本发明专利技术还涉及编码该多肽的核酸、包含该核酸的载体以及包含该载体的宿主细胞。在另一方面，本发明专利技术提供包含所述多肽的药物组合物和所述多肽的医学应用。在进一步方面，本发明专利技术提供鉴定包含能够结合于人类和非黑猩猩灵长类CD3ε(CD3ε)的表位的跨物种特异性结合结构域的多肽的方法。

【技术实现步骤摘要】
跨物种特异性CD3- ε结合结构域本专利技术涉及包含能够结合于人类和非黑猩猩灵长类⑶3(ε)的表位的第一人类结合结构域的多肽以及产生所述多肽的方法。本专利技术还涉及编码该多肽的核酸、包含该核酸的载体以及包含该载体的宿主细胞。在另一方面，本专利技术提供包含所述多肽的药物组合物和所述多肽的医学应用。T细胞识别受克隆型地分布的α β和y δ T细胞受体(TcR)介导，这些受体与肽 MHC(pMHC)的肽负载分子相互作用(Davis & Bjorkman, Nature334(1988), 395-402)。TcR的抗原特异性链不具备信号传导结构域，但代替地偶合于保守的多亚基信号传导器CD3(Call, Celllll(2002), 967-979, Alarcon, Immunol.Rev.191 (2003), 38-46, MalissenImmunol.Rev.191 (2003)，7-27)。TcR连接藉以直接传达至信号传导器的机制仍是T细胞生物学的根本问题(Alarcon,上述引文；Davis, CellllO (2002)，285-287)。看起来明显的是，持续的T细胞响应牵涉共同受体接合、TcR低聚和免疫突触中TcR-pMHC复合体的更高级的排列(Davis & van der Merwe, Curr.Biol.11 (2001), R289-R291, Davis, Nat.1mmunol.4(2003), 217-224)。然而，很早的TcR信号传导在不存在这些事件时发生，并可包括配体诱导的CD3 ε构象变化(Alarcon,上述引文；Davis (2002)，上述引文；Gil，J.Biol.Chem.276(2001)，11174-11179,Gil, Celll09 (2002)，901-912)。信号传导复合体的 ε、Y、δ和δ亚基彼此缔合以形成⑶3的ε - Υ异二聚体、⑶3的ε - δ异二聚体和⑶3的δ - δ同二聚体(Call，上述引文)。不同研究已经揭示，⑶3分子对于α β TcR的适当细胞表面表达和正常 T 细胞发育是重要的(Berkhout，J.Biol.Chem.263 (1988)，8528-8536，Wang, J.Exp.Med.188(1998)，1375-1380, Kappes, Curr.0pin.1mmunol.7 (1995)，441-447)。小鼠 CD3的ε Y异二聚体的胞外域片段的溶液结构显示，ε y亚基两者都是C2_set Ig结构域，它们彼此相互作用以形成异常的侧-对-侧二聚体构型(Sun，Celll05 (2001), 913-923)。尽管富含半胱氨酸的主干(stalk)表现为在驱使⑶3 二聚化中起重要作用(Su，上述引文，Borroto, J.Biol.Chem.273 (1998)，12807-12816)，但是通过 CD3 ε 与 CD3 Y 的细胞外结构域相互作用足以组装这些蛋白与TcRP (Manolios, Eur.J.1mmunol.24(1994)，84-92,Manolios & Li, Immunol.Cell Biol.73 (1995)，532-536)。尽管仍有争论，但 TcR 的优势化学计量学最可能包含一个a PTcR、一个⑶3的ε y异二聚体、一个⑶3的ε δ异二聚体和一个⑶3的δ δ同二聚体(Call,上述引文)。由于人类⑶3的ε y异二聚体在免疫应答中的关键作用，近来解释了结合于治疗抗体0KT3的该复合体的晶体结构(Kjer-Nielsen，PNAS101, (2004)，7675-7680)。 许多治疗策略通过靶向TcR信号传导、尤其是临床上广泛用于免疫抑制方案的抗人类⑶3的单克隆抗体(mAb)来调节T细胞免疫性。⑶3特异性小鼠mAb 0KT3是第一个批准用于人类的mAb (Sgro, Toxicologyl05 (1995)，23-29)，并且作为免疫抑制剂在临床上广泛用于移植(Chatenoud, Clin.Transplant? (1993), 422-430, Chatenoud, Nat.Rev.1mmunol.3 (2003)，123-132，Kumar, Transplant.Proc.30 (1998)，1351-1352)、I 型糖尿病(Chatenoud (2003)，上述引文)和银屑病(Utset, J.Rheumatol.29 (2002)，1907-1913)。而且，抗⑶3的mAb可诱导部分T细胞信号传导和克隆无反应性(Smith, J.Exp.Med.185 (1997)，1413-1422)。已在文献中描述0KT3为有效的T细胞促分裂原(Vanffauve, J.1mmunol.124 (1980), 2708-18)以及有效的 T 细胞杀伤剂(Wong, Transplantation50(1990)，683-9)。0KT3以时间依赖性方式表现这两种活性；在导致细胞因子释放的T细胞早期激活之后，进一步施用时，0KT3在后来阻断所有已知的T细胞功能。正是由于这种后来对T细胞功能的阻断，0KT3得以作为免疫抑制剂如此广泛应用在治疗方案中，以减少或甚至消除同种异体移植组织排斥。0KT3逆转同种异体移植组织排斥最有可能是通过阻断所有T细胞的功能，T细胞在急性排斥中起主要作用。0KT3与人类T细胞膜中的CD3复合体反应并阻断其功能，该CD3复合体与T细胞的抗原识别结构(TCR)缔合并对信号转导是必需的。TCR/CD3的哪个亚基被0KT3结合已经是很多研究的主题。尽管一些证据指出0KT3对TCR/⑶3复合体的ε亚基的特异性(Tunnacliffe, Int.1mmunol.1 (1989)，546-50 ；Kjer-Nielsen, PNAS101, (2004)，7675-7680)。进一步的证据已经显示，0KT3结合TCR/CD3复合体要求该复合体的其它亚基存在(Salmeron, J.1mmunol.147 (1991), 3047-52)。对⑶3分子有特异性的其它众所周知的抗体列在Tunnacliffe, Int.1mmunol.1 (1989)，546-50。如上所述，这种CD3特异性抗体能够诱导各种T细胞应答，诸如淋巴因子的产生(Von ffussow, J.1mmunol.127(1981)，1197 ；Palacious, J.1mmunol.128(1982)，337)、增殖(Van ffauve, J.1mmunol.124 (1980)，2708-18)和抑制性T 细胞的诱导(Kunicka,在〃Lymphocyte Typing II (淋巴细胞分型 II) 〃1 (1986)，223)。即，取决于实验条件，CD3特异性单克隆抗体可抑制或诱导细胞毒性(Leewenberg, J.1mmunol.134(1985), 3770 ;Phillips,J.1mmunol.136(1986) 1579 ；Platsoucas, Proc.Natl.Acad.Sc1.USA78(1981)，4500 ；Itoh, Cell.1mmunol.10本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多肽，其包含作为抗原相互作用位点的能够结合于人类和普通绒猴、绒顶柽柳猴或松鼠猴CD3ε链的表位的结合结构域，其中所述表位是包括在由SEQ ID NO.2、4、6或8组成的组中的氨基酸序列的一部分，并且至少包含氨基酸序列Gln‑Asp‑Gly‑Asn‑Glu。

【技术特征摘要】
2007.04.03 EP 07006988.5;2007.04.03 EP 07006990.1;1.一种多肽，其包含作为抗原相互作用位点的能够结合于人类和普通绒猴、绒顶柽柳猴或松鼠猴⑶3 ε链的表位的结合结构域，其中所述表位是包括在由SEQ ID N0.2、4、6或8组成的组中的氨基酸序列的一部分，并且至少包含氨基酸序列Gln-Asp-Gly-Asn-Glu。2.根据权利要求1所述的多肽，其中所述表位是包括在由SEQID N0.2、4、6和8组成的组中的氨基酸序列的一部分，并且至少包含氨基酸序列Gln-Asp-Gly-Asn-Glu。3.根据权利要求1或2中任一项所述的多肽，其中所述多肽还包含能够结合于细胞表面抗原的第二结合结构域。4.根据权利要求1至3中任一项所述的多肽，其中所述第一结合结构域包含VL区，所述VL区包含选自以下的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3:(a)SEQ ID N0.27 所示的 CDR-LUSEQ ID N0.28 所示的 CDR-L2 和 SEQ ID N0.29 所示的 CDR-L3 ；(b)SEQ ID N0.117 所示的 CDR-L1、SEQ ID N0.118 所示的 CDR-L2 和 SEQ ID N0.119 所示的CDR-L3 ;和(c)SEQ ID N0.153 所示的 CDR-L1、SEQ ID N0.154 所示的 CDR-L2 和 SEQ ID N0.155 所示的 CDR-L3。5.根据权利要求1至3中任一项所述的多肽，其中所述第一结合结构域包含VH区，所述VH区包含选自以下的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3:(a)SEQ ID N0 .12 所示的 CDR-HUSEQ ID N0.13 所示的 CDR-H2 和 SEQ ID N0.14 所示的 CDR-H3 ；(b)SEQ ID N0.30 所示的 CDR-HUSEQ ID N0.31 所示的 CDR-H2 和 SEQ ID N0.32 所示的 CDR-H3 ；(c)SEQ ID N0.48 所示的 CDR-HUSEQ ID N0.49 所示的 CDR-H2 和 SEQ ID N0.50 所示的 CDR-H3 ；(d)SEQ ID N0.66 所示的 CDR-HUSEQ ID N0.67 所示的 CDR-H2 和 SEQ ID N0.68 所示的 CDR-H3 ；(e)SEQ ID N0.84 所示的 CDR-HUSEQ ID N0.85 所示的 CDR-H2 和 SEQ ID N0.86 所示的 CDR-H3 ；(f)SEQ ID N0.102 所示的 CDR-H1、SEQ ID N0.103 所示的 CDR-H2 和 SEQ ID N0.104 所示的 CDR-H3 ；(g)SEQ ID N0.120 所示的 CDR-H1、SEQ ID N0.121 所示的 CDR-H2 和 SEQ ID N0.122 所示的 CDR-H3 ；(h)SEQ ID N0.138 所示的 CDR-H1、SEQ ID N0.139 所示的 CDR-H2 和 SEQ ID N0.140 所示的 CDR-H3 ；(i)SEQID N0.156 所示的 CDR-H1、SEQ ID N0.157 所示的 CDR-H2 和 SEQ ID N0.158 所示的CDR-H3 ;和(j) SEQ ID N0.174 所示的 CDR-H1、SEQ ID N0.175 所示的 CDR-H2 和 SEQ ID N0.176 所示的 CDR-H3。6.根据权利要求1至4中任一项所述的多肽，其中所述第一结合结构域包含VL区，所述VL区选自由SEQ ID N0.35、39、125、129、161或165所示的VL区组成的组。7.根据权利要求1至3和5中任一项所述的多肽，其中所述第一结合结构域包含VH区，所述 VH 区选自由 SEQ ID N0.15、19、33、37、51、55、69、73、87、91、105、109、123、127、141、145、159、163、177或181所示的VH区组成的组。8.根据权利要求1至7中任一项所述的多肽，其中所述第一结合结构域包含VL区和VH区，所述VL区和VH区选自由以下组成的组: (a)SEQ ID N0.17或21所示的VL区和SEQ ID N0.15或19所示的VH区； (b)SEQ ID N0.35或39所示的VL区和SEQ ID N0.33或37所示的VH区； (c)SEQ ID N0.53或57所示的VL区和SEQ ID N0.51或55所示的VH区； (d)SEQ ID N0.71或75所示的VL区和SEQ ID N0.69或73所示的VH区； (e)SEQ ID N0.89或93所示的VL区和SEQ ID N0.87或91所示的VH区；(f)SEQ ID N0.107 或 111 所示的 VL 区和 SEQ ID N0.105 或 109 所示的 VH 区；(g)SEQ ID N0.125 或 129 所示的 VL 区和 SEQ ID N0.123 或 127 所示的 VH 区；(h)SEQ ID N0.143 或 147 所示的 VL 区和 SEQ ID N0.141 或 145 所示的 VH 区； (i)SEQ ID N0.161或165所示的VL区和SEQ ID N0.159或163所示的VH区；和(j) SEQ ID N0.179 或 183 所示的 VL 区和 SEQ ID N0.177 或 181 所示的 VH 区。9.根据权利要求8所述的多肽，其中所述第一结合结构域包含选自由SEQID NO:23、25、41、43、59、61、77、79、95、97、113、115、131、133、149、151、167、169、185 或 187 组成的组的氨基酸序列。10.根据权利要求3至9中任一项所述的多肽，其中所述细胞表面抗原是肿瘤抗原。11.根据权利要求3至10中任一项所述的多肽，其中所述多肽是双特异性单链抗体分子。12.根据权利要求11所述的多肽，其中所述双特异性单链抗体分子在所述第二结合结构域中包含一组如下的序列作为⑶R H1、⑶R H2、⑶R H3、⑶R L1、⑶R L2和⑶R L3，所述序列选自由以下组成的组:SEQ ID NO:189-194,SEQ ID NO:201-206,SEQ ID NO:219-224,SEQ ID NO:237-242、SEQID NO:255-260、SEQ ID NO:273-279、SEQ ID NO:382-384 和 387-389、SEQ ID NO:400-402和 405-407、SEQ ID NO:418-420 和 423-425、SEQ ID NO:436-438 和 441-443、SEQ IDNO:454-456 和 459-461、SEQ ID NO:472-474 和 477-479、SEQ ID NO:490-492 和 495-497、SEQ ID N0:508-510 和 513-515、 SEQ ID NO: 530-532 和 1568 至 1570、SEQ ID NO:545-547 和 550-552、SEQ IDNO:559-561和 564-566、SEQ ID NO:577-579 和 582-584、 SEQ ID NO:615-617 和 620-622、SEQ ID NO:633_635、638、639 和 1571、SEQ IDNO:650-652 和 655-657、SEQ ID NO:668-670 和 673-675、SEQ ID NO:682-684 和 687-689、SEQ ID NO:696-698 和 701-703、SEQ ID N0:710_712 和 715-717、SEQ ID NO:724-726和 729-731、SEQ ID NO:738-740 和 743-745、SEQ ID NO:752-754 和 757-759、SEQ IDNO:766-768 和 771-773、SEQ ID NO:780-782 和 785-787、SEQ ID NO:794-796 和 799-801、SEQ ID N0:808-810 和 813-815、SEQ ID NO:822-824 和 827-829、SEQ ID NO:836_838 和841-843、SEQ ID NO:850-852 和 855-857、SEQ ID NO:866-868 和 871-873、SEQ ID NO:884-886 和 889-891、SEQ ID NO:902-904和 907-909、SEQ ID NO:920-922 和 925-927、SEQ ID NO:938...

【专利技术属性】
技术研发人员：马赛厄斯·克林格，托拜厄斯·劳姆，桃瑞丝·劳，苏珊娜·曼高德，罗曼·基谢尔，拉尔夫·鲁特布瑟，帕特里克·霍夫曼，彼得·库菲，
申请(专利权)人：安进研发慕尼黑股份有限公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE