一种抗水貂绿脓杆菌性肺炎兽药的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种抗水貂绿脓杆菌性肺炎兽药的制备方法，按如下步骤制得：菌种准备及细菌的增殖；制备灭活菌苗；产蛋鸡的免疫；高免蛋的收集；提取抗水貂绿脓杆菌性肺炎卵黄抗体兽药；效价、安全检验，形成产品。本发明专利技术用水貂绿脓杆菌性肺炎病原菌的灭活菌苗免疫产蛋母鸡，从鸡蛋黄中提取蛋白质，对水貂绿脓杆菌性肺炎具有特异性的预防和治疗作用，不仅不产生耐药性，在体内不存在药物残留，而且该药物药效期长，使用成本低，治愈率高，存活数大。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种抗水貂绿脓杆菌性肺炎兽药的制备方法，其特征在于：按如下步骤制得：(1)菌种准备及细菌的增殖将真空冻干保存的绿脓杆菌用生理盐水按体积比1∶1稀释，接种于NAC琼脂培养基，在 37℃的培养箱中培养18～24小时，经纯度检验没有杂菌生长后，用生理盐水制成菌悬液接种于LB琼脂培养基，在37℃的培养箱中培养36～48小时后，收集细菌； (2) 制备灭活菌苗将收集的细菌用生理盐水悬浮成菌悬液，使每毫升菌悬液含150～200亿个细菌，用终浓度0.3%甲醛在37℃下灭活24小时，即为制苗用抗原；把抗原乳化制成油乳剂灭活菌苗，并进行灭活菌苗的安全检验；(3) 产蛋鸡的免疫选25周龄的健康产蛋母鸡用安全检验合格的灭活菌苗进行免疫，免疫程序为：第1次免疫：每只鸡腿肌注射0.2ml，颈部皮下注射0.2ml，第2次免疫：2周后每只鸡颈部皮下注射1.0ml，第3次免疫： 2周后，每只鸡颈部皮下多点注射1.5ml；(4) 高免蛋的收集产蛋鸡第3次免疫后14天，开始抽样测定高免鸡蛋黄中抗水貂绿脓杆菌性肺炎卵黄抗体效价，蛋黄与生理盐水按体积比1∶3稀释后，加入等体积三氯甲烷萃提，上清液琼扩效价≥1∶16即为合格，之后收集鸡蛋；(5) 提取抗水貂绿脓杆菌性肺炎卵黄抗体兽药A、蛋壳消毒：将鸡蛋浸入加热至42℃的0.1%新洁尔灭水溶液中消毒25～35分钟，取出凉干或吹干备用；B、打蛋分离蛋黄：打蛋，充分除去蛋清、胚盘和系带，收集蛋黄；C、萃提：先充分搅拌蛋黄呈均匀膏状，然后加入3倍体积的高压灭菌生理盐水，再次充分搅拌混匀，使成为蛋黄液；在该蛋黄液中加入等体积的三氯甲烷，充分振荡混合，静置60分钟后装入离心管以3500～4000rpm离心30分钟，收集离心管中的上清液；D、加入灭活剂和稳定剂：上清液按终浓度为0.05%加入甲醛，充分搅拌混合，密封30～60分钟后加入终浓度为0.02%的稳定剂吐温‑20，混匀；E、除菌过滤：用0.2～0.3um微孔滤膜过滤除菌，即得到抗水貂绿脓杆菌性肺炎卵黄抗体兽药；(6)效价、安全检验，形成产品效价用含氯化钠的琼脂为载体进行琼扩试验检测，所述含氯化钠的琼脂是用8%氯化钠溶液配制的琼脂，琼脂的含量是1%，检测用抗原为绿脓杆菌脂多糖抗原，抗原含量为150～200mg/ml；18～20g小鼠3只做安全性检验，每只小鼠腹腔注射0.5ml菌苗，观察7天，无任何异常反应为合格。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵成新，李晓丽，王先德，栾浩麟，房超，邹德志，刘怀华，
申请(专利权)人：烟台金海药业有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37