本发明专利技术涉及多肽，相应的核酸分子，包含上述核酸分子的构建体和/或载体和/或细胞，和/或包含所述多肽、核酸分子、构建体、载体和/或细胞的组合物。本发明专利技术进一步涉及上述组合物用于医疗用途，优选用于治疗传染病。此外，本发明专利技术涉及所述多肽、核酸分子、构建体、载体、细胞和/或组合物作为抗菌剂、优选作为食品添加剂或消毒剂的应用，或用于检测细菌，优选用于诊断应用。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术涉及多肽，相应的核酸分子，包含上述核酸分子的构建体和/或载体和/或细胞，和/或包含所述多肽、核酸分子、构建体、载体和/或细胞的组合物。本专利技术进一步涉及上述组合物用于医疗用途，优选用于治疗传染病。此外，本专利技术涉及所述多肽、核酸分子、构建体、载体、细胞和/或组合物作为抗菌剂、优选作为食品添加剂或消毒剂的应用，或用于检测细菌，优选用于诊断应用。【专利说明】一种多肽
本专利技术涉及一种多肽，相应的核酸分子，包含上述核酸分子的构建体和/或载体和/或细胞，和/或包含所述多肽、核酸分子、构建体、载体和/或细胞的组合物。本专利技术进一步涉及上述多肽、相应的核酸分子、包含上述核酸分子的构建体和/或载体和/或细胞、和/或组合物，用于医疗用途，优选用于治疗传染病。此外，本专利技术涉及所述多肽、核酸分子、构建体、载体、细胞和/或组合物作为抗菌剂、优选作为食品添加剂或消毒剂的应用，或在用于检测细菌、优选用于诊断应用中的应用。
技术介绍
金黄色葡萄球菌是一种主要的人类病原体，其通常牵涉若干严重的传染病和食物中毒。由于新出现的耐抗生素菌株，它的治疗变得越来越困难。来自感染金黄色葡萄球菌的噬菌体的内溶素已表明潜在地控制这些病原体并可以用于它们的特异性检测。在大多数情况下，靶向葡萄球菌物种的内溶素应用的主要障碍是低酶活性、难以大批量生产和/或蛋白质稳定性。总是需要关于例如抗微生物活性和/或稳定性具有改善特性的新抗菌剂。
技术实现思路
本文报道的是新表征的Ply2638，金黄色葡萄球菌噬菌体Φ2638&的内溶素。上述酶和若干工程化衍生物以可溶性方式表达在大肠杆菌中并在冻干(冷冻干燥，Iyophilisation)以后显示出乎意料的稳定性,如在重建(重构,reconstitution)以后由它们的裂解活性所证明的。除细胞壁结合域(其结合葡萄球菌属的细胞壁)之外，我们还示出，两个功能域，即M23内肽酶域和酰胺酶域对于最佳的裂解活性是至关重要的。我们示出，具有催化结构域的酶的改造和/或源自金黄色葡萄球菌Φ11内溶素、OTwort内溶素、和溶葡萄球菌素的细胞壁结合域的复制产生异源多肽融合产物，其在冻干和重建以后具有增强的裂解活性和/或改变的pH最适点(最适度,optimum)和/或增加的稳定性。核酸分子在第一方面，提供了一种核酸分子，其包括第一核苷酸序列或由第一核苷酸序列组成，所述核苷酸序列与 SEQ ID NO: 12 具有 80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100%的序列同一性(关于所有本文使用的SEQ ID NO的概述参见表1)。优选地，所述第一核苷酸序列具有至少282、285、290、300、310、320、330、340、350、360或370个核苷酸，更优选至少381个核苷酸的长度，和/或至多510、480、450、420或390个核苷酸的长度。优选地，所述核酸分子具有至少282、285、290、300、310、320、330、340、350,360,370个核苷酸，更优选至少381个核苷酸的长度，和/或至多4500、4200、3900和/或3600个核苷酸的长度。优选地，所述核酸分子具有至少1200、1230、1260、1290、1320、1350、1380、1410、1440、1470、1500、1530 或 1560 个核苷酸的长度，和 / 或至多 4500,4200,3900和/或3600个核苷酸的长度。还优选的是，按照本专利技术的核酸分子具有至少1890、1920、1950、1980、2010、2040、2070、2100、2130 或 2160 个核苷酸的长度，和 / 或至多 4500、4200,3900和/或3600个核苷酸的长度。优选地，所述第一核苷酸序列编码细胞壁结合域，其结合葡萄球菌属的肽聚糖细胞壁。优选地，所述第一核苷酸序列源于金黄色葡萄球菌噬菌体O2638a内溶素。如估计自与ALE-1的C端92个残基的晶体结构的序列对比(Lu et al., J.Biol.Chem.，2006, 281(1): 549-58)，据估计，来自源自金黄色葡萄球菌噬菌体①2638a内溶素的细胞壁结合域的最少94个氨基酸可以足以将上述酶引导到葡萄球菌属的细胞壁。可以利用技术人员公知的测定来评估(结构)域与葡萄球菌属的肽聚糖细胞壁的结合。在优选的实施方式中，免疫组织化学技术和/或基因融合技术(其产生标记的构建体)用来评估肽、多肽或蛋白质与葡萄球菌属的肽聚糖细胞壁的特异性结合。在上述免疫组织化学或融合技术中所使用的信号的定量方法是本领域公知的。在一种实施方式中，可以利用荧光融合构建体来量化葡萄球菌属肽聚糖细胞壁结合，上述突光融合构建体包含多肽，其包含由第一核苷酸序列编码的域。由Loessner etal (Molecular Microbiology2002, 44(2):335 - 349)以及在实施例1 中详细描述了这样的细胞壁结合测定。在该测定中，使包含所述荧光融合构建体或阴性对照、优选绿色荧光蛋白(GFP)的溶液经受葡萄球菌属细胞、优选金黄色葡萄球菌细胞、更优选金黄色葡萄球菌BB255指定时间段，其后通过离心作用，和结合的荧光融合构建体一起，沉降细胞。暴露于荧光融合构建体的葡萄球菌属细胞的荧光信号减去暴露于阴性对照(优选GPF)的葡萄球菌属细胞的荧光信号是细胞结合的度量，如在本公开中所指的。 优选地，在本专利技术的范围内，核酸分子将编码多肽域，该多肽域结合葡萄球菌属的肽聚糖细胞壁，当使用这种测定时，检测到沉降细胞的荧光信号的增加高于阴性对照(如本文中所定义的)。上述结合优选是特异性的。优选地，本专利技术涉及核酸分子，该核酸分子编码多肽或域，其呈现由SEQ ID NO:1编码的金黄色葡萄球菌噬菌体O2638a内溶素(Ply2638)的肽聚糖细胞壁结合如本文所定义的至少50、60、70、80、90或100、150或200%的结合。在一种实施方式中，本专利技术涉及核酸分子，其与编码金黄色葡萄球菌噬菌体^2638 内溶素的 SEQ ID NO:1 具有 80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99 或 100% 的序列同一性。本专利技术进一步涉及核酸分子，除所述第一核苷酸序列之外，其还包含编码裂解域的异源核苷酸序列。优选地，所述裂解域呈现肽聚糖水解酶活性(如后文中所定义的)。所述核酸分子包含异源核苷酸序列，其在本文中被定义为“改造构建体(retrofittedconstruct)，，。 如在本文中所使用的，术语〃异源序列〃或〃异源核酸〃是指这样的核酸，其不是天然存在的，可操作地连接为所述第一核苷酸序列的邻近序列。如在本文中所使用的，术语“异源”可以指“重组体”。〃重组体〃是指这样的遗传本体(entity)，其不同于一般在天然界中发现的遗传本体。当应用于核苷酸序列或核酸分子时，这意味着所述核苷酸序列或核酸分子是克隆、限制和/或连接步骤、和其它程序(其致使产生不同于在天然界中发现的序列或分子的构建体)的各种组合的产物。可以通过技术人员公知的方法来评估“肽聚糖水解酶活性本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种包含第一核苷酸序列的核酸分子，其中，所述核苷酸序列与SEQ ID NO:12具有至少80%的序列同一性。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
【专利技术属性】
技术研发人员：马丁·约翰内斯·勒斯纳，弗里茨·艾兴泽埃尔，
申请(专利权)人：迈克瑞欧斯人体健康有限公司，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL
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