病毒样颗粒及其制备方法技术

本发明专利技术提供了由重组番木瓜花叶病毒外壳蛋白和ssRNA制备病毒样颗粒(VLP)的体外方法，其允许以高产率大规模生产VLP。还提供了通过所述体外方法制备的包含ssRNA的VLP。所述VLP可用作佐剂，并且当与抗原融合时用作疫苗。还提供了所述VLP用于刺激先天免疫应答的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术提供了由重组番木瓜花叶病毒外壳蛋白和ssRNA制备病毒样颗粒(VLP)的体外方法，其允许以高产率大规模生产VLP。还提供了通过所述体外方法制备的包含ssRNA的VLP。所述VLP可用作佐剂，并且当与抗原融合时用作疫苗。还提供了所述VLP用于刺激先天免疫应答的用途。【专利说明】
本专利技术涉及佐剂和免疫调节剂的领域，并且特别地涉及病毒样颗粒(Virus-likeparticle, VLP)及制备VLP的方法。
技术介绍
以下专利和专利申请描述了番木瓜花叶病毒(papaya mosaic virus,PapMV)病毒样颗粒(VLP)增强抗原的免疫原性的能力。美国专利N0.7,641, 896、加拿大专利申请N0.2，434，000和国际专利申请N0.PCT/CA03/00985 (W02004/004761)描述了 PapMV或来源于PapMV外壳蛋白的VLP用于在动物中加强对抗原的免疫应答的用途。抗原可与PapMV或VLP连接或者它们可与PapMV或VLP组合施用。国际专利申请N0.PCT/CA2007/002069 (W02008/058396)描述了基于 PapMV 和PapMV VLP的流感疫苗。疫苗包含PapMV或PapMV VLP和一种或更多种流感抗原，所述抗原可与PapMV或VLP连接或者可与PapMV或VLP组合施用。国际专利申请N0.PCT/CA2007/001904(W02008/058369)描述了基于 PapMV 的免疫原性亲和缀合抗原系统。该申请描述了 PapMV外壳蛋白与能够结合目的抗原的多种亲和肽的融合体。国际专利申请N0.PCT/CA2008/000154(W02008/089569)描述了基于 PapMV 的对抗伤寒沙门氏菌(S.typhi)和其他肠道菌病原体的疫苗。所述疫苗包含PapMV或PapMV VLP和一种或更多种肠道菌抗原，所述抗原可与PapMV或VLP连接，或者可与PapMV或VLP组合施用。国际专利申请 N0.PCT/CA2009/00636 (W02010/012069)描述了包含 PapMV 成分和一种或更多种抗原的多价疫苗，及其提供对抗多种病原体株或对抗多于一种病原体的保护的用途。所述疫苗可任选地包含沙门氏菌属(Salmonella spp.)孔蛋白成分。已描述了由经分离的PapMV外壳蛋白制备PapMV VLP。Erickson和Bancroft (1978，Virology, 90:36_46&1978，Virology, 90:47-53)首先描述了通过体外自组装经分离的PapMV外壳蛋白和PapMV RNA来制备PapMV VLP。用于这些实验的PapMV外壳蛋白制备物分离自PapMV并且以蛋白质的聚合形式为主(在3S、14S和25S沉积)，其中的一种或更多种被认为是对于引发VLP形成必不可少的。Sit等(1994, Virology, 199:238-242)的后续研究确立了引发组装需要PapMV基因组的前38至47个核苷酸，并且提出了引发复合也需要14S聚合物种类(species)。后来，证明了 PapMV VLP可由在大肠杆菌中表达的PapMV外壳蛋白的单体形式来制备。重组外壳蛋白在细菌细胞中自组装，并且可通过使细胞破裂，然后进行几步纯化步骤(包括去污剂处理)来分离VLP (参见Tremblay等? 2006，FEBS J.，273: 14-25 ;国际专利申请 N0.PCT/CA2007/002069 (W02008/058396)、PCT/CA2007/001904 (W02008/058369) ,PCT/CA2008/000154(W02008/089569)和 PCT/CA2009/00636(W02010/012069))。提供该背景信息的目的是为了告知本 申请人:认为的可与本专利技术相关的信息。既未必旨在承认也不应解释为任何以上信息构成针对本专利技术的现有技术。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供番木瓜花叶病毒样颗粒及用于制备所述病毒样颗粒的方法。根据本专利技术的一个方面，提供了用于制备病毒样颗粒(VLP)的体外方法，其包括以下步骤:a)在约6.0至约9.0的pH下和约2°C至约37°C的温度下，将蛋白质:RNA比按重量计为约1:1至50:1的重组马铃薯X病毒(potexvirus)外壳蛋白与ssRNA组合足以允许VLP组装的时间山)用核酸酶处理VLP以移除从颗粒中突出的任何RNA ；以及c)将VLP与其他处理成分分尚。根据另一个方面，提供了通过根据本专利技术之方法制备的病毒样颗粒(VLP)。根据另一个方面，提供了包含通过根据本专利技术之方法制备的VLP的药物组合物。根据另一个方面，提供了通过根据本专利技术之方法制备的VLP，其用作佐剂。根据另一个方面，提供了通过根据本专利技术之方法制备的VLP，其用于在对象中刺激先天免疫应答并从而预防对象中的微生物感染或降低其严重程度。根据另一个方面，提供了通过根据本专利技术之方法制备的VLP，其与一种或更多种抗原组合用作疫苗。根据另一个方面，提供了通过根据本专利技术之方法制备的VLP，其用于制备药物。根据另一个方面，提供了一种在对象中增强对抗原的免疫应答的方法，其包括向对象施用包含通过根据本专利技术之方法制备的VLP的佐剂。`根据另一个方面，提供了一种在对象中刺激先天免疫应答并从而预防对象中的微生物感染或降低其严重程度的方法，其包括向对象施用通过根据本专利技术之方法制备的VLP。根据另一个方面，提供了一种在对象中刺激免疫应答的方法，其包括向对象施用与一种或更多种抗原组合的通过根据本专利技术之方法制备的VLP。根据本专利技术的另一个方面，提供了包含重组PapMV外壳蛋白和ssRNA的番木瓜花叶病毒(PapMV)病毒样颗粒(VLP)，其中所述ssRNA的长度为约50个核苷酸至约5000个核苷酸并且其包含对应于SEQ ID NO:5或6所示核酸序列的序列或其片段。根据本专利技术的另一个方面，提供了包含番木瓜花叶病毒(PapMV)病毒样颗粒(VLP)的药物组合物，所述VLP包含重组PapMV外壳蛋白和ssRNA，其中所述ssRNA的长度为约50个核苷酸至约5000个核苷酸并且其包含对应于SEQ ID NO:5或6所示核酸序列的序列或其片段。根据本专利技术的另一个方面，提供了包含重组PapMV外壳蛋白和ssRNA的番木瓜花叶病毒(PapMV)病毒样颗粒(VLP)，其中所述ssRNA的长度为约50个核苷酸至约5000个核苷酸并且其包含对应于SEQ ID NO:5或6所示核酸序列的序列或其片段，所述VLP用作佐剂。根据本专利技术的另一个方面，提供了包含重组PapMV外壳蛋白和ssRNA的番木瓜花叶病毒(PapMV)病毒样颗粒(VLP)，其中所述ssRNA的长度为约50个核苷酸至约5000个核苷酸并且其包含对应于SEQ ID N0:5或6所示核酸序列的序列或其片段，所述VLP用于在对象中刺激先天免疫应答并从而预防对象中的微生物感染或降低其严重程度。根据本专利技术的另一个方面，提供了包含重组PapMV外壳蛋白和ssRNA的番木瓜花叶病毒(PapMV)病毒样颗粒(VLP)，其中所述ssRNA的长度为约50个核苷酸至约5000个本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于制备病毒样颗粒(VLP)的体外方法，其包括以下步骤：a)在约6.0至约9.0的pH下和约2℃至约37℃的温度下，将蛋白质：RNA比按重量计为约1：1至50：1的重组马铃薯x病毒外壳蛋白与ssRNA组合足以允许VLP组装的时间；b)用核酸酶处理所述VLP以移除从所述颗粒中突出的任何RNA；以及c)将所述VLP与其他处理成分分离。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：德尼·勒克莱尔，皮埃尔·萨瓦尔，
申请(专利权)人：弗利亚生物技术公司，
类型：发明
国别省市：加拿大;CA