SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法技术

本发明专利技术公开了SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法，包括如下步骤：1）提取待测鸡DNA样品，用DNA特异性引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；2）对PCR扩增产物中的鸡第3号染色体70486623bp位点进行单核苷酸多态性检测。本发明专利技术提供了一个高效准确、简便快速的鸡育种辅助选择分子遗传标记，为鸡的丝羽性状的选种和保种提供了一种有效的分子标记育种手段。本发明专利技术的检测方法操作简单，费用低廉，准确度高，可实现自动化检测。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法，包括如下步骤：1）提取待测鸡DNA样品，用DNA特异性引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；2）对PCR扩增产物中的鸡第3号染色体70486623bp位点进行单核苷酸多态性检测。本专利技术提供了一个高效准确、简便快速的鸡育种辅助选择分子遗传标记，为鸡的丝羽性状的选种和保种提供了一种有效的分子标记育种手段。本专利技术的检测方法操作简单，费用低廉，准确度高，可实现自动化检测。【专利说明】SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法
本专利技术涉及SNP检测筛选鸡的方法，具体涉及SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法。
技术介绍
单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms, SNP),是指在基因组上单个核苷酸的变异，在遗传物质传递过程中可以稳定遗传给后代，因此可以作为分子标记进行育种和保种。外貌是鸡(Gallus gallus domesticus)重要的品种特征之一，在育种和保种中占据了重要地位，目前，对于控制鸡外貌特征的分子标记研究仍然较少，仅有少量的外貌特征能够通过分子标记进行辅助选择育种。羽毛是动物最复杂的外皮附属物之一，具有不同的形状、大小、花纹、色素沉积等各种方面的表型变异，而且变异可以发生在羽毛发育和分化的每个阶段，因此可以作为研究进化和发育的一种理想的模型。羽毛发育的过程中可以形成部分或全部的羽枝结构，构成了不同的羽毛类型。家禽遗传学家、动物学家和胚胎学家等多个领域的研究者都对决定羽毛形态的影响因素进行了很多研究，但是迄今为止，对于羽毛形态发生相关性状的突变仍然知之甚少(Lucas, A.M.and P.R.Stettenheim.Avian anatomy:1ntegument.1972:U.S.Government Printing Office; 1st edition)。丝羽，就是丝状的羽毛结构，是丝羽乌骨鸡等的特征性状之一。达尔文最早发现丝羽表型相对于正常羽毛来讲是隐性遗传的性状，后来被证实是单基因遗传的孟德尔性状(Dunn, L.C.and M.A.Jul1.0n the Inheritance ofsome characters of the Silky fowl.J Genet, 1927, 19:27-63)。丝羽在身体部分的廓羽羽枝中缺少了羽小钩的结构，因而羽小枝之间不能连接在一起，所以羽毛比较蓬松，不能紧密覆盖在皮肤上。丝羽的羽小枝结构相对于片羽来讲，变得更加细长。目前，Shh (Sonic hedgehog)和 Bmp2 (Bone morphogenetic protein2)信号通路之间的互作已被证实和羽枝的形成等有关(Harris, Μ.P., S.Williamson, J.F.Fallon, etal.Molecular evidence for an activator—inhibitor mechanism in development ofembryonic feather branching.Proc Natl Acad Sci U S A, 2005, 102(33):11734-11739),其中，但是关于羽小钩的发育和分化，在分子水平的研究还很少，更缺少检测鸡的丝羽性状分子标记方法。
技术实现思路
针对目前缺少检测鸡的丝羽性状分子标记方法的现状，本专利技术的目的是提供SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法。CAU资源家系是由中国农业大学李宁教授课题组1998年建立的用于定位影响鸡重要经济性状作用基因的实验群体， 亲本为法国明星肉鸡和泰和丝羽乌骨鸡(Deng，X.Μ., Li, J.Y., Li, N., and ffu, C.X.(2001).Genetic analysis of important growth traitbased on F_2 resource population in chicken.Yi Chuan Xue Bao 28,801-807)。在CAU资源家系中记录了 Fc^F1和F2代个体的丝羽性状，通过连锁分析定位了影响鸡丝羽性状的基因位点在鸡3号染色体上，通过分析该区域的基因序列，分离得到了影响鸡丝羽性状的基因和序列变异。本专利技术的检测鸡丝羽性状的分子标记方法，是利用鸡3号染色体的十聚异戍二烯焦憐酸合成酶 2 亚基(Decaprenyl-diphosphate synthase subunit 2, PDSS2)基因和正弦复眼结合蛋白(Sine oculis-binding protein homolog, S0BP)基因之间,位于第3号染色体70486623bp位点的一个核苷酸进行单核苷酸多态性检测，根据检测结果判定鸡的丝羽基因为纯合或杂合。本专利技术提供SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法，包括如下步骤:I)提取待测鸡DNA样品，用DNA特异性引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；2)对PCR扩增产物中的鸡第3号染色体70486623bp位点进行单核苷酸多态性(SNP)检测。如果SNP检测结果为GG，待测鸡的基因型为CC ;如果SNP检测结果为CC，待测鸡的基因型为GG ;如果SNP检测结果为CG，待测鸡的基因型为CG ;所述CC基因型鸡为片羽纯合个体，GG基因型鸡为丝羽纯合个体，CG基因型鸡为杂合个体(G为鸟嘌呤核苷酸，C为腺嘌呤核苷酸)。其中，步骤I)所述的DNA特异性引物对的脱氧核糖核苷酸序列为:上游引物:5’-Biotin-CGACTCTCAACGCGGGAAC-3’(如 SEQ ID N0.1 所示)下游引物:5’-CTGGGGGCAGCCATCTTG-3’(如 SEQ ID N0.2 所示)其中，步骤I)所述的扩增产物长度为123bp，且含鸡第3条染色体的70486623bp位。其中，步骤I)所述的PCR扩增，其反应体系终浓度(25 μ I)为:【权利要求】1.SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法，其特征在于，包括如下步骤: 1)提取待测鸡DNA样品，用DNA特异性引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物； 2)对PCR扩增产物中的鸡第3号染色体70486623bp位点进行单核苷酸多态性检测。2.如权利要求1所述的SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法，其特征在于，步骤I)所述的DNA特异性引物对的脱氧核糖核苷酸序列为: 上游引物:5’ -Biotin-CGACTCTCAACGCGGGAAC-3’ 下游引物:5’ -CTGGGGGCAGCCATCTTG-3’3.如权利要求1所述的SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法，其特征在于，步骤1)所述的PCR扩增，其25 μl反应体系终浓度为: 4.如权利要求1所述的SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法，其特征在于，步骤I)所述的PCR扩增的反应条件为:94°C变性5min ;94°C变性30sec，63°C退火30sec，65°C延伸lmin，其中每扩增I个循环退火温度降低1°C，共10循环；94°C变性30sec，53°C退火30sec，65°C延伸lmin，共30循环；65°C延伸7min ;20°C保存;取2μl用于琼脂糖检测，扩增得到单一的目的条带后用于进一步检测。5.如权利要求本文档来自技高网...

【技术保护点】
SNP检测筛选鸡的丝羽性状的方法，其特征在于，包括如下步骤：1）提取待测鸡DNA样品，用DNA特异性引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；2）对PCR扩增产物中的鸡第3号染色体70486623bp位点进行单核苷酸多态性检测。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：胡晓湘，冯春刚，宋迟，顾晓荣，王彦强，李宁，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11