一种基于万能碱基的DNA测序方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种基于万能碱基的DNA测序方法。本发明专利技术利用万能碱基构建四种带有不同的荧光基团的n聚核苷酸；然后利用万能碱基构成的n聚核苷酸和DNA连接酶对DNA模板链进行测序延伸反应；测序延伸反应结束后，读取荧光信息，再用RNA酶切除带有荧光基团的万能碱基；多次循环测序反应，直至得到DNA模板的完整序列。本发明专利技术无需要构建4n的寡聚核苷酸库，方法简单可靠，成本优势明显；本方法适用于短片段DNA的大规模实验室测序和基于循环芯片测序技术的高通量DNA测序。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种基于万能碱基的DNA测序方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）利用万能碱基构建如式I所示n聚核苷酸，其中N为天然碱基A、T、G、或C，U为万能碱基，F为荧光基团，n大于3；当N分别为不同的天然碱基时，得到四种n聚核苷酸；所述四种n聚核苷酸分别带有不同的荧光基团；所述四种n聚核苷酸的万能碱基为3?硝基吡咯、5?硝基吲哚、3?甲酰胺基?5?硝基吲哚、或4?硝基?1?氢咪唑；（2）将结合有引物的DNA微阵列浸入到DNA连接酶缓冲液中，加入连接试验混合液，所述连接试验混合液中含有上述四种n聚核苷酸和DNA连接酶，于45～50℃孵育30～60分钟；（3）将经步骤（2）处理过的DNA微阵列用洗液清洗，以除去未反应的寡核苷酸，将清洗后的微阵列用空气吹干，读取DNA微阵列的荧光数据，得到碱基序列信息；（4）待荧光数据读取结束后，将DNA微阵列置在切割缓冲液中，加入RNA酶，于37℃孵育30～60分钟；（5）将经步骤（4）处理过的DNA微阵列用洗液清洗，清洗后的DNA微阵列用空气吹干；（6）重复上述步骤（2）～（5），直至得到待测DNA的完整序列。FDA0000426566470000011.jpg

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：梁峰，张丕明，陈荣生，
申请(专利权)人：武汉科技大学，
类型：发明
国别省市：