本发明专利技术涉及一种抗流感病毒广谱中和性的中和分子1F2，能够中和多种亚型流感病毒。本发明专利技术的抗体的功能由其轻链和重链可变区基因特异性基因序列决定，能够结合具有天然构象的流感病毒血凝素蛋白(HA)的HA2亚基，能够阻止多种亚型流感病毒侵染易感细胞。利用本发明专利技术的抗体可变区基因或互补决定区(CDR)基因，可在利用原核和真核细胞的任何表达系统中改造和生产不同形式的基因工程抗体。
【技术实现步骤摘要】
—种抗流感病毒广谱中和性的中和分子1F2
本专利技术提供一株能够中和多种亚型流感病毒的全人单克隆抗体1F2，具有临床上预防或治疗多种流感病毒感染的潜力。
技术介绍
自2009年4月起，甲型HlNl流感(A/H1N)疫情在世界范围内爆发。这一疫情从北美迅速传播扩散到5大洲200多个国家和地区。据世界卫生组织报道，截止2010年4月9日，甲型A/H1N1流感疫情已在超过213个国家爆发，全球甲型HlNl流感死亡病例已超过1.77万例。在我国，据中国疾病预防控制中心报道，截至2010年3月31日，全国31个省份累计报告甲型HlNl流感确诊病例12.7万余人，已治愈12.2万，死亡800例。流感病毒属于正粘病毒科，有包膜，呈球型、椭圆型或丝状，病毒包膜来自宿主细胞的双层类脂膜。流感病毒属单链的RNA病毒。根据核蛋白(NP)和细胞质蛋白(Ml)的差异，流感病毒可分为A、B、C(甲、乙、丙)三种亚型。对A型流感病毒，根据血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)表面糖蛋白抗原性的不同，又可进一步分为不同的亚型。目前，A型流感病毒有16种HA亚型(H1-H16)和9种NA亚型(N1-N9)。A型流感病毒的基因组由8个单独的单链RNA片段组成(见图1)，每个RNA片段编码一至两个蛋白。因此A型流感病毒共有8个基因，编码10种蛋白。其中，HA蛋白对于结合细胞表面受体和病毒与细胞的膜融合起重要作用，在感染细胞前，HA会水解成HAl和HA2,其中位于HAl上的受体结合区(receptor binding domain, RBD)的附近区域,在不同流感病毒株中高度变异(RBD本身比较保守)，是重要的中和性表位所在区域，目前发现的多种中和性抗体所针对的表位大多位于HAl蛋白的RBD附近区域。但是这些抗体大多不具备中和不同亚型或同一亚型不同毒株流感病毒的能力。NA可以去除唾液酸，帮助子代病毒的释放和避免病毒自身的聚集；PA、PB`1和PB2三种聚合酶以及NP核蛋白主要用于病毒RNA的复制和转录；基质蛋白Ml负责核外输送，M2负责形成离子通道；非结构蛋白NSl是干扰素的抑制剂，NS2负责核外输送。目前，国家许可用于治疗流感的药物主要为以下两大类:1)烷胺类(金刚烷胺和金刚乙胺)；2)流感病毒神经氨酸酶抑制剂(奥司他韦和扎那米韦)。对烷胺类药物，已出现大量的耐药性流感毒株，因此目前世界卫生组织不建议使用烷胺类药物作为治疗流感的药物；目前大部分流感病毒(包括甲型HlNl流感)仍对奥司他韦和扎那米韦敏感，但在日本等地区也已经出现耐药性毒株，耐药性毒株的出现限制了这些化学小分子药物的大规模使用。治疗性抗体用于流感的等病毒感染性疾病的治疗早有报道，抗血清用于治疗SARS和重症H5N1禽流感病毒感染者的案例已经证明了抗体在治疗病毒感染中发挥的重要作用。具有广谱中和活性的抗流感病毒的治疗性抗体具有以下潜在优势，一方面它可以阻断病毒与靶细胞的结合，另一方面通过补体和T细胞、NK细胞等效应细胞的作用，将被病毒感染的细胞杀死。因此，本领域很有必要针对流感病毒开发亲和性良好且副作用低的治疗性抗体，如人源化或全人源的抗体，以满足临床治疗的需求。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种抗流感病毒广谱中和性全人单克隆抗体及其应用。在本专利技术的一个方面，提供一种分离的结合分子，所述的结合分子识别(较佳地为特异性识别)流感病毒HA蛋白中HA2蛋白亚基序列第345-504位之间的表位。在一个优选例中，所述结合分子包含SEQ ID NO:8所示重链CDRl区、SEQ ID NO:9所示重链⑶R2和SEQ ID NO: 10所示重链⑶R3区；其能识别并结合流感血凝素蛋白(HA)的HA2亚基中的表位。在另一优选例中，所述结合分子包含SEQ ID NO: 14所示轻链⑶Rl区、SEQ IDNO: 15所示轻链⑶R2和SEQ ID NO: 16所示轻链⑶R3区；其能识别并结合流感血凝素蛋白(HA)的HA2亚基中的表位。在另一优选例中，所述结合分子包含以下的氨基酸序列:SEQ ID N0:8所示的重链CDRl，SEQ ID NO:9 所示的重链 CDR2 和 SEQ ID NO: 10 所示的重链 CDR3，SEQ ID NO: 14 所示的轻链CDR1、SEQ ID NO: 15所示的轻链CDR2和SEQ ID NO: 16所示的轻链CDR3 ;其能识别并结合流感血凝素蛋白(HA)的HA2亚基中的表位。在另一优选例中，所述的结合分子包含重链可变区，所述的重链可变区具有SEQID NO:2所示的氨基酸序列。在另一优选例 中，所述的结合分子包含轻链可变区，所述的轻链可变区具有SEQID NO:4所示的氨基酸序列。在另一优选例中，所述的结合分子包含重链可变区和轻链可变区，其重链可变区和轻链可变区分别具有SEQ ID N0:2和SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。在另一优选例中，所述的结合分子包含抗体的重链恒定区和或轻链恒定区。在另一优选例中，所述的结合分子是Fab、F(ab’ )、F(ab’)2、Fv、dAb、Fd、互补决定区(CDR)片段、单链抗体(scFv)、二价单链抗体、单链噬菌体抗体、双特异双链抗体、三链抗体、四链抗体。优选的，所述的结合分子是人单克隆抗体。更优选的，所述的人单克隆抗体其重链可变区和轻链可变区分别具有SEQ IDN0:2和SEQ ID N0:4所示的氨基酸序列，其重链恒定区选择下组中重链类型之一的恒定区:IgGU IgG2a、IgG2b和IgG3，和其轻链恒定区选择下组轻链类型的恒定区之一:κ链和λ链。更优选的，所述的人单克隆抗体其重链可变区和轻链可变区分别具有SEQ IDNO: 2和SEQ ID NO: 4所示的氨基酸序列，其重链恒定区和轻链恒定区分别具有Genebank号ACK87036和ACK87038所示的氨基酸序列。在另一优选例中，所述的单克隆抗体识别流感病毒HA蛋白上介于线性和空间构象之间的表位。在另一优选例中，所述的单克隆抗体识别流感病毒HA蛋白中ΗΑ2蛋白亚基序列第345-504位之间的表位(序列及位数的计算基于GenBank登录号ACP41105.1的ΗΑ2蛋白)。在本专利技术的一个方面，提供编码所述的结合分子的核酸分子。在本专利技术的一个方面，提供所述的结合分子在制备用于诊断、治疗和/或预防流感病毒所致的流感感染的药物中的用途。在另一优选例中，所述的流感病毒的毒株选自如下一组:H1亚型流感病毒(如H1N1)、H3亚型流感病毒(如H3N2)和H9亚型流感病毒(H9N2)。在本专利技术的一个方面，提供一种表达载体，所述表达载体中含有编码所述的结合分子的DNA。在本专利技术的一个方面，提供一种宿主细胞，所述宿主细胞中含有所述的表达载体。在本专利技术的一个方面，提供一种组合物，它含有有效量的所述的单克隆抗体，以及药学上可接受的载体。在本专利技术的一个方面，提供一种检测流感病毒的试剂盒，其包括所述的结合分子。在另一优选例中，所述的试剂盒还包括:抗原或抗体包被用试剂，洗涤试剂，第二抗体，标记物(如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酯酶、葡萄糖氧化酶、β -D-半乳糖苷酶、脲酶、过氧化氢酶、或葡萄糖淀粉酶)，显色剂酶底物等。在本专利技术的一个方面，提供一种(优选非治疗性地)抑本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离的结合分子，其特征在于，所述的结合分子识别流感病毒HA蛋白中HA2蛋白亚基序列第345?504位之间的表位。
【技术特征摘要】
1.一种分离的结合分子，其特征在于，所述的结合分子识别流感病毒HA蛋白中HA2蛋白亚基序列第345-504位之间的表位。2.如权利要求1所述的结合分子，其特征在于，所述结合分子包含SEQID NO:8所示重链CDRl区、SEQ ID NO:9所示重链CDR2和SEQ ID NO: 10所示重链CDR3区。3.如权利要求1所述的结合分子，其特征在于，所述结合分子包含SEQID N0:14所示轻链CDRl区、SEQ ID NO: 15所示轻链CDR2和SEQ ID NO: 16所示轻链CDR3区。4.如权利要求1所述的结合分子，其特征在于，所述结合分子包含以下的氨基酸序列:SEQ ID NO:8所示的重链CDRl，SEQ ID NO:9所示的重链CDR2和SEQ ID NO: 10所示的重链 CDR3, SEQ ID NO: 14 所示的轻链 CDR1，SEQ ID NO: 15 所示的轻链 CDR2 和 SEQ ID NO: 16所示的轻链⑶R3。5.如权利要求1-4任一所述的结合分子，其特征在于，包含重链可变区，所述的重链可变区具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。6.如权利要求1-4任一所述的结合分子，其特征在于，包含轻链可变区，所述的轻链可变区具有SEQ ID N0:4所示的氨基酸序列。7.如权利要求1-4任一所述的结合分子，其特征在于，包含重链可变区和轻链可变区，其重链可变区和轻链可变区分别具有SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。8.如权利要求1-4任一所述的结合分子，其特征在于，所述的结合分子是Fab、F(ab’)、F(ab’)2、Fv、dAb、Fd、互补决定区(CDR)片段、单链抗体(scFv)、二价单链抗体、单链噬菌体抗体、双特...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙兵，陈爱中，边超，胡伟斌，王同燕，凌志洋，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：
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