本发明专利技术公开了一种可用于治疗神经元退行性病变的药物组合物。本发明专利技术提供了一种特异性诱导胶质细胞分化形成神经元的方法，具体地，首先将Myt1L基因构建在病毒载体上，包装获得带有Myt1L的假病毒颗粒，并通过Myt1L假病毒颗粒感染胶质细胞后，经过一段时间的培养，即可将胶质细胞分化为神经元细胞。所获得的神经元细胞及其组合物，能够在神经退行性疾病如帕金森病等的治疗中有潜在价值。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术公开了一种可用于治疗神经元退行性病变的药物组合物。本专利技术提供了一种特异性诱导胶质细胞分化形成神经元的方法，具体地，首先将Myt1L基因构建在病毒载体上，包装获得带有Myt1L的假病毒颗粒，并通过Myt1L假病毒颗粒感染胶质细胞后，经过一段时间的培养，即可将胶质细胞分化为神经元细胞。所获得的神经元细胞及其组合物，能够在神经退行性疾病如帕金森病等的治疗中有潜在价值。【专利说明】—种可用于治疗神经元退行性病变的药物组合物
本专利技术涉及生物
，具体地涉及一种特异性诱导胶质细胞转化成神经元细胞的方法和组合物。
技术介绍
干细胞在生物医学领域中有着十分广阔的应用前景，胚胎干细胞具有全面分化的潜能，成为研究的热点。1997年英国科学家Wilmut等人将羊体细胞的细胞核转入去核的卵母细胞中并发育成成熟的个体——著名的多利羊，从而在实践中证实了体细胞逆转成为全能干细胞的可能性。2006年，日本科学家Takahashi和Yamanaka发现4个转录因子(0ct_4、Sox-2、Klf4和c-Myc)共同作用小鼠皮肤细胞后，能够成功的将其诱导逆转分化为可以向三个胚层分化的多能干细胞，2007年Takahashi和Yamanaka利用这四个转录因子成功的将人的表皮细胞诱导分化形成多功能干细胞。尽管Takahashi和Yamanaka的研究成为了干细胞研究领域中的一个里程碑，但在实际操作中必须经历从体细胞诱导获得多功能干细胞，再从多功能干细胞基础上定向分化为目的靶细胞，整个过程步骤多、周期长，失败率高，所分化的细胞还具有肿瘤形成的潜在危险，这些问题不利于该技术的推广和应用。2010年Wernig实验室首次在Nature上报道了通过fcn2、Ascll和Mytll三个因子将小鼠的体细胞直接诱导获得具有功能性的类似神经元细胞，开启了神经科学领域的研究的新篇章。2011年Wernig实验室通过Brn2、Ascll、Mytll和NeuroDl四个转录因子,将人的成纤维细胞诱导形成功能性神经元细胞。这些研究简化了从体细胞诱导到多功能干细胞再定向分化为神经元的繁`琐途径，为神经生物学研究提供了更为有效的工具。帕金森病主要是因位中脑部位〃黑质〃区中的神经元细胞发生病变，多巴胺的合成减少、抑制乙酰胆碱的功能降低而造成的，病变之后，神经元数量减少、功能下降，该区域将会被胶质细胞所“占领”，如果能够让这些胶质细胞再变回为神经元细胞，那么也许对于帕金森病的治疗有一定的帮助作用。综上，本领域迫切需要开发简便有效诱导胶质细胞形成神经元的方法和组合物。
技术实现思路
本专利技术目的为提供一种简便有效的诱导形成神经元的方法和组合物。 在本专利技术的第一方面，提供了一种MytlL基因或MytlL蛋白的用途，用于制备诱导胶质细胞形成神经元的组合物；或制备治疗神经退行性疾病的组合物。 在另一优选例中，所述的组合物包括药物组合物。在本专利技术的第二方面，提供了一种假病毒颗粒，所述假病毒颗粒具有以下特征: (a)携带外源的MytlL的编码序列； (b)可感染胶质细胞，并且在胶质细胞中表达外源的MytlL转录因子。在另一优选例中，所述的MytlL来源于人。在另一优选例中，所述的假病毒颗粒选自下组慢病毒、腺病毒、疱疹病毒、或痘病毒。在另一优选例中，所述的假病毒颗粒是如下制备的: 将携带MytlL的编码序列的载体导入假病毒颗粒的包装细胞中，从而形成假病毒颗粒。在本专利技术的第三方面，提供了一种表达盒，所述表达盒从5’至3’依次包括以下元件: 胶质细胞特异性的启动子、MytlL的编码序列、终止密码子。在另一优选例中，所述的胶质细胞特异性的启动子包括:GFAP启动子(GFAP，胶质纤维酸性蛋白)和HRE-GFAP杂合启动子(HRE，低氧反应元件)。在另一优选例中，MytlL来源于哺乳动物，优选人。在本专利技术的第四方 面，提供了一种表达载体，所述的表达载体含有本专利技术第三方面中所述的表达盒。在另一优选例中，所述的表达载体包括质粒、病毒载体。在另一优选例中，所述的病毒载体包括慢病毒载体、腺病毒载体、疱疫病毒载体、痘病毒载体、或腺相关病毒载体。在本专利技术的第五方面，提供了一种药物组合物，所述的组合物包括(i)药学上可接受的载体以及(ii)本专利技术第四方面所述的表达载体或本专利技术第二方面所述的假病毒颗粒。在本专利技术的第六方面，提供了一种本专利技术第四方面所述表达载体或本专利技术第二方面所述的假病毒颗粒的用途，它们被用于制备诱导胶质细胞形成神经元的组合物；或制备治疗神经退行性疾病的组合物。在本专利技术的第七方面，提供了一种诱导胶质细胞形成神经元细胞的方法，包括步骤: 在外源MytlL蛋白存在下，培养胶质细胞，从而诱导胶质细胞形成神经元细胞。在另一优选例中，所述的外源MytlL蛋白包括在培养体系中添加的MytlL蛋白，或在所述胶质细胞内表达外源MytlL编码序列而产生的外源MytlL蛋白。应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。【专利附图】【附图说明】图1显示了用于构建MytlL慢病毒载体的载体FUGW的结构图。图2显示了被MytlL慢病毒感染后的U251细胞的明视野图。图3显示了被MytIL慢病毒感染后的U251细胞的荧光野图，结果说明被感染的细胞已经表达Tujl蛋白。图4显示了被MytlL慢病毒感染后的U251细胞的DAPI染色图，说明细胞核处被染色。图2-图4结果显示，被感染的细胞已经表达神经特异性蛋白Tujl。【具体实施方式】本专利技术人经过长期深入的研究，首次意外地发现，MytlL单基因可有效地诱导胶质细胞形成神经元细胞。本专利技术人将MytlL基因构建在病毒载体上，包装获得带有MytlL的假病毒颗粒，并通过MytlL假病毒颗粒感染胶质细胞后，经过一段时间的培养，即可将胶质细胞诱导分化为神经元细胞。在此基础上，完成了本专利技术。启动子 在本专利技术中，可用的启动子没有特别限制，为一段位于结构基因5’端上游区的DNA序列，能活化RNA聚合酶，有与MytlL模板DNA准确地相结合并具有转录起始的特异性。可以选自组成性因子、诱导性因子和组织特异性因子。更佳地为组织特异性启动子，如胶质细胞特异性启动子，可在胶质细胞中特异性启动遗传物质的转录。 MytlL基因和蛋白 MytlL,髓磷脂转录因子样蛋白，作为一个转录因子，参与神经细胞的分化；中央神经系统中在神经元和少突神经胶质细胞的发育过程中起到关键作用。基因名称:MYT1L物种:人源；转录本的Genbank编号:NM_015025。MYTlL的氨基酸序列的登录号为NP_055840，具体序列如下: MEVDTEEKRH RTRSKGVRVP VEPAIQELFS CPTPGCDGSG HVSGKYARHR SVYGCPLAKK60 RKTQDKQPQE PAPKRKPFAV KADSSSVDEC DDSDGTEDMD EKEEDEGEEY SEDNDEPGDE120 DEEDEEGDRE EEEEIEEEDE DDDEDGEDVE DEEEEEEEEE EEEEEEENED HQMNCHN本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种Myt1L基因或Myt1L蛋白的用途，其特征在于，用于制备诱导胶质细胞形成神经元的组合物；或制备治疗神经退行性疾病的组合物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：高博，盛一，谢胜华，吴庆，徐述，
申请(专利权)人：上海吉凯基因化学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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