一种鸭疫里默氏菌荚膜抗原蜂胶疫苗的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种鸭疫里默氏菌荚膜抗原蜂胶疫苗的制备方法，属于兽医传染病学领域。它由鸭疫里默氏菌荚膜抗原与蜂胶制成，其含荚膜蛋白量为1.0~2.0mg/mL，含蜂胶干物质10~15mg/mL。它主要通过制备鸭疫里默氏菌荚膜抗原、制备蜂胶佐剂、配制菌苗来获得疫苗，其免疫产生期为10d，免疫持续期长达90d。制成的疫苗对鸭、鹅等具有较好安全性，可以诱导机体产生良好的免疫保护。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种鸭疫里默氏菌荚膜抗原蜂胶疫苗的制备方法，其特征在于：其制备方法包括：?1）　培养基的制备：制备改良LB培养基及改良TSA平板。2）菌种制备：取灭菌注射器吸2.5?mL的改良LB培养基，加入鸭疫里默氏菌菌种冻干瓶中，将溶解的菌种液划线接种于1个改良TSA平板上，置体积分数5%CO2培养箱中37℃培养24?26?h；挑选圆形微突起、表面光滑奶油状半透明的特征单菌落2~3个，接种于20?mL改良LB培养基中，37℃振荡培养16??18?h后取出，作为一级种子，2℃~8℃可保存5?d；取一级种子1?mL接种于100?mL改良LB培养基中，37℃振荡培养16??18?h后取出，作为二级种子，2℃~8℃可保存5?d；3）荚膜提取：按1%体积比，将二级种子接种于改良LB培养基中，37℃振荡培养16??18?h后取出，10000?g离心20??30?min，弃上清，按菌泥湿重每1?g加入20?mL脱膜液，吹打混匀，于55?57℃水浴锅中用电动搅拌器不间断搅拌1?2?h，然后将脱膜液相继用冷水浴、冰水浴，分成小份于冰箱中冷却，直至液体发白但确保不能结冰，10000?g离心50?60?min，取上清，装入透析袋内，紧塞透析管口，悬挂于盛有蒸馏水的透析箱横梁上，2℃~8℃静置，每12?h换水1次，换3?4次水，最后换水12?h后收集透析袋内液体，即为鸭疫里默氏菌荚膜抗原；4）鸭疫里默氏菌荚膜提原的蛋白浓度测定：用紫外吸收法快速计算荚膜抗原中的蛋白浓度，测定3次，取平均值；5）荚膜提原蜂胶疫苗的制备：取纯度在80%以上的蜂胶，磨碎，溶解于无水乙醇中，根据要求配成100~150?mg/mL浓度的蜂胶乙醇溶液，将鸭疫里默氏菌荚膜抗原和蜂胶乙醇溶液混合配成混悬液，确保荚膜抗原的终浓度为1.0~2.0?mg/mL，蜂胶干物质含量为10~15?mg/mL，无菌分装于100?mL的疫苗瓶内，密封保存，2℃~8℃保存。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：程龙飞，黄瑜，陈红梅，傅光华，施少华，万春和，傅秋玲，林建生，
申请(专利权)人：福建省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：