一种杨梅快速繁殖的方法技术

本发明专利技术公开了一种杨梅快速繁殖的方法，包括以下步骤：1)外植体的选取；2）外植体消毒；3)初始诱导培养；4)愈伤组织诱导；5）分化和增殖培养；6)生根培养。按上述方法繁殖杨梅既有效解决杨梅组织培养中外植体污染率高的问题，又可实现杨梅组培苗的大量快速繁殖。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物快速繁殖
，尤其是杨梅快速繁殖
。
技术介绍
目前，杨梅多采用嫁接繁育来进行生产栽培，这繁育技术提高品种的纯度，保持了品种特性，但成活率较低及繁殖速度较慢，制约了杨梅产业的发展。而组织培养育苗技术既可以保持种的纯度和特性， 也可以降低生产成本，提高繁殖速度和成活率。杨梅的组织培养目前很少有人报道，究其原因主要还是由于杨梅外植体培养时，灭菌不易，愈伤组织诱导容易褐化，特别是叶片、茎等部位均含有多种次生代谢产物，抑制其分化及愈伤组织诱导，因此，组织培养很难取得成功。中国专利ZL201010603448.4涉及到一种以芽苗途径获得杨梅再生植株的方法:以杨梅茎为外植体，诱导产生芽，在此基础上伸长后诱导生根，但这一方法诱导周期长，繁殖量小。现有技术中尚无经愈伤组织途径获得杨梅再生植株的报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供，经愈伤组织途径获得杨梅丛生芽，诱导生根，既有效解决杨梅组织培养中外植体污染率高的问题，又可实现杨梅组培苗的大量快速繁殖。为了解决上述技术问题，本专利技术提出下列技术方案:，其特征在于所述的方法包括以下步骤:1)外植体的选取:取当年生直径2_5mm的杨梅枝条为外植体，剪去叶片后剪成2-3cm的茎段；2)外植体消毒:将上述茎段放入盛有自来水的20-25KHZ超声波清洗中保持温度30-35°C处理30-45min，然后以自来水冲洗10_20min ;随后在超净工作台上以70-75%的酒精消毒25-35秒，0.1%升汞溶液中处理5-7分钟，然后以无菌水冲洗4_5遍，置于无菌培养皿备用；3)初始诱导培养:将灭菌后外植体茎段各剪去2-3mm，茎段按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强2500-3500LX、光周期10-14h/d，温度25°C ±2°C ;培养4-6d后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养12-18d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成为:WPM+6-BA0.1-0.2mg/L+NAA0.01-0.02mg/L+PVP5-10mg/L ；4)愈伤组织诱导:取初始诱导培养中的芽，放入愈伤组织诱导培养基中培养15-20d,条件为暗培养，温度20°C ±2°C ;所述愈伤组织培养基为:MS+6-BA0.5-2.0mg/L+NAA0.02-0.5mg/L+PVP5-10mg/L ；5)分化和增殖培养:将透明无色的愈伤组织块放入分化培养基中培养20-25d，增殖产生大量丛生苗，培养条件为光强1800-2500LX、光周期10_14h/d，温度25°C ±2°C ;所述分化和增殖培养用培养基为:WPM+6-BA0.1-0.5mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+PVP5-10mg/L ；6)生根培养:将5)步骤中的丛生苗切割成单个，转移至生根培养基中培养15-20d后生根，培养条件为光强1800-2500LX、光周期10_14h/d，温度25°C ±2°C ;所述生根用培养基为:1/2MS+IBA0.1-0.5mg/L+PVP5-10mg/L ；7)炼苗和移栽:将有生根的杨梅幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗3-5d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25°C，湿度85%-95%，适当遮荫即可；所述的WPM培养基配方为:大量元素:硝酸铵NH4N03400mg/L，硫酸钾K2S04900mg/L，磷酸二氢钾 KH2P03170mg/L，硫酸镁 MgS04.7H20370mg/L ;钙盐:氯化钙 CaCl2.2H2096mg/L ；四水合硝酸钙Ca(N03)2.4H20556mg/L ;微量元素:硼酸H3B036.2mg/L,硫酸锰MnS04.4Η2022.5mg/L,硫酸锌 ZnS04.7Η208.6mg/L,钥酸钠 Na2Mo04.2Η200.25mg/L,硫酸铜CuS04.5H200.25mg/L ;铁盐:乙二胺四乙酸二钠Na2_EDTA37.3mg/L,硫酸亚铁FeS04.7H2027.8mg/L ;有机酸:肌醇100mg/L,甘氨酸2mg/L,盐酸硫胺素lmg/L,盐酸吡口多醇 0.5mg/L,烟酸 0.5mg/L ；所述的MS培养基配方为:大量元素:硝酸钾KN031900mg/L，硝酸铵NH4N031650mg/L，磷酸二氢钾 KH2P03170mg/L，硫酸镁 MgS04 *7H20370mg/L ;钙盐:氯化钙 CaCl2 *2H20440mg/L ;微量元素:碘化钾 KI0.83mg/L,硼酸 H3B036.2mg/L,硫酸锰 MnS04.4H2022.3mg/L,硫酸锌 ZnS04.7Η208.6mg/L,钥酸钠 Na2Mo04.2Η200.25mg/L,硫酸铜 CuS04.5Η200.025mg/L,氯化钴CoCl2.6H200.025mg/L ;铁盐:乙二胺四乙酸二钠Na2_EDTA37.25mg/L,硫酸亚铁FeS04.7H2027.85mg/L ;有机酸:肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素0.5mg/L，盐酸吡哆醇 0.5mg/L,烟酸 0.5mg/L ;蔗糖 30g/L,琼脂粉 7g/L，pH 为 5.7 ;所述的1/2MS培养基配方为:大量元素:硝酸钾KN039 50mg/L，硝酸铵NH4N038 2 5mg/L，磷酸二氢钾 KH2P0385mg/L，硫酸镁 MgS04.7H20185mg/L ;钙盐:氯化钙 CaCl2.2H20220mg/L ；所述的6-BA为6-苄氨基嘌呤；所述的NAA为α -萘乙酸；所述的ΙΒΑ为吲哚-3- 丁酸；所述的PVP为聚乙烯吡咯烷酮。步骤3)中初始诱导培养基为:WPM+6-BA0.15mg/L+NAA0.015mg/L+PVP8mg/L。步骤4)中愈伤组织培养基为:MS+6-BAl.5mg/L+NAA0.2mg/L+PVP8mg/L。步骤5)中分化和增殖培养用培养基为:WPM+6-BA0.3mg/L+NAA0.2mg/L+PVP8mg/L0步骤6)中生根用培养基为:1/2MS+IBA0.2mg/L+PVP8mg/L。采用本专利技术繁殖杨梅，既有效解决杨梅组织培养中外植体污染率高的问题，又可实现杨梅组培苗的大量快速繁殖，为杨梅生产栽培和品种改良奠定基础。试验表明，采用愈伤组织途径所得杨梅试管苗的移栽成活率明显高于采用芽苗途径者，其效果可以通过下列试验证明。试验1不同途径所得试管苗的移栽成活率比较一、材料和方法1、材料:[0031 ] 愈伤组织苗(简称SM)，按实施例3制备；芽苗(简称YM)，按下列方法制备:1)外植体的选取:取当年生直径2_5mm的杨梅枝条为外植体，剪去叶片后剪成2-3cm的茎段；2)外植体消毒:将上述茎段放入盛有自来水的20KHZ超声波清洗中保持温度30-35°C处理30-45min，然后以自来水冲洗10_20min ;随后在超净工作台上以70-75%的酒精消毒25-35秒，0.1%升汞溶液中处理5-7分钟，然后以无菌水冲洗4-5遍，置于无菌培养皿备用；3)初始诱导培养:将灭菌后外植体茎段各剪去2_3mm，茎段按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强2500-350本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种杨梅快速繁殖的方法，其特征在于所述的方法包括以下步骤：1)外植体的选取：取当年生直径2?5mm的杨梅枝条为外植体，剪去叶片后剪成2?3cm的茎段；2）外植体消毒：将上述茎段放入盛有自来水的20?25KHZ超声波清洗中保持温度30?35℃处理30?45min，然后以自来水冲洗10?20min；随后在超净工作台上以70?75%的酒精消毒25?35秒，0.1％升汞溶液中处理5?7分钟，然后以无菌水冲洗4?5遍，置于无菌培养皿备用；3)初始诱导培养：将灭菌后外植体茎段各剪去2?3mm，茎段按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强2500?3500Lx、光周期10?14h/d,温度25℃±2℃；培养4?6d后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养12?18d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成为：WPM+6?BA0.1?0.2mg/L+NAA0.01?0.02mg/L+PVP5?10mg/L；4)愈伤组织诱导：取初始诱导培养中的芽，放入愈伤组织诱导培养基中培养15?20d，条件为暗培养，温度20℃±2℃；所述愈伤组织培养基为：MS+6?BA0.5?2.0mg/L+NAA0.02?0.5mg/L+PVP5?10mg/L；5）分化和增殖培养：将透明无色的愈伤组织块放入分化培养基中培养20?25d，增殖产生大量丛生苗，培养条件为光强1800?2500Lx、光周期10?14h/d,温度25℃±2℃；所述分化和增殖培养用培养基为：WPM+6?BA0.1?0.5mg/L+NAA0.1?0.5mg/L+PVP5?10mg/L；6)生根培养：将5）步骤中的丛生苗切割成单个，转移至生根培养基中培养15?20d后生根，培养条件为光强1800?2500Lx、光周期10?14h/d,温度25℃±2℃；所述生根用培养基为：1/2MS+IBA0.1?0.5mg/L+PVP5?10mg/L；7）炼苗和移栽：将有生根的杨梅幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗3?5d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20?25℃，湿度85%?95%，适当遮荫即可；所述的WPM培养基配方为：大量元素：硝酸铵NH4NO3400mg/L，硫酸钾K2SO4900mg/L，磷酸二氢钾KH2PO3170mg/L，硫酸镁MgSO4·7H2O370mg/L；钙盐：氯化钙CaCl2·2H2O96mg/L；四水合硝酸钙Ca(NO3)2·4H2O556mg/L；微量元素：硼酸H3BO36.2mg/L，硫酸锰MnSO4·4H2O22.5mg/L，硫酸锌ZnSO4·7H2O8.6mg/L，钼酸钠Na2MoO4·2H2O0.25mg/L，硫酸铜CuSO4·5H2O0.25mg/L；铁盐：乙二胺四乙酸二钠Na2?EDTA37.3mg/L，硫酸亚铁FeSO4·7H2O27.8mg/L；有机酸：肌醇100mg/L， 甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素1mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，烟酸0.5mg/L；所述的MS培养基配方为：大量元素：硝酸钾KNO31900mg/L，硝酸铵NH4NO31650mg/L，磷酸二氢钾KH2PO3170mg/L，硫酸镁MgSO4·7H2O370mg/L；钙盐：氯化钙CaCl2·2H2O440mg/L；微量元素：碘化钾KI0.83mg/L，硼酸H3BO36.2mg/L，硫酸锰MnSO4·4H2O22.3mg/L，硫酸锌ZnSO4·7H2O8.6mg/L，钼酸钠Na2MoO4·2H2O0.25mg/L，硫酸铜CuSO4·5H2O0.025mg/L，氯化钴CoCl2·6H2O0.025mg/L；铁盐：乙二胺四乙酸二钠Na2?EDTA37.25mg/L,硫酸亚铁FeSO4·7H2O27.85mg/L；有机酸：肌醇100mg/L，甘氨酸2mg/L，盐酸硫胺素0.5mg/L，盐酸吡哆醇0.5mg/L，烟酸0.5mg/L；蔗糖30g/L，琼脂粉7g/L，pH为5.7；所述的1/2MS培养基配方为：大量元素：硝酸钾KNO3950mg/L，硝酸铵NH4NO3825mg/L，磷酸二氢钾KH2PO385mg/L，硫酸镁MgSO4·7H2O185mg/L；余同上述MS培养基；所述的6?BA为6?苄氨基嘌呤；所述的NAA为α?萘乙酸；所述的IBA为吲哚?3?丁酸；所述的PVP为聚乙烯吡咯烷酮。...

【技术特征摘要】
1.一种杨梅快速繁殖的方法，其特征在于所述的方法包括以下步骤:1)外植体的选取:取当年生直径2-5mm的杨梅枝条为外植体，剪去叶片后剪成2_3cm的茎段；2)外植体消毒:将上述茎段放入盛有自来水的20-25KHZ超声波清洗中保持温度30-35°C处理30-45min，然后以自来水冲洗10_20min ;随后在超净工作台上以70-75%的酒精消毒25-35秒，0.1 %升汞溶液中处理5-7分钟，然后以无菌水冲洗4_5遍，置于无菌培养皿备用；3)初始诱导培养:将灭菌后外植体茎段各剪去2-3mm，茎段按末端向下插入初始诱导培养基中培养，培养条件为光强2500-3500LX、光周期10_14h/d，温度25°C ±2°C ;培养4-6d后将其中未污染的外植体茎段转接到新的初始诱导培养基中，并继续培养12-18d至新芽长出；所述的初始诱导培养基组成为:WPM+6-BA0.1-0.2mg/L+NAA0.01-0.02mg/L+PVP5-10mg/L ；4)愈伤组织诱导:取初始诱导培养中的芽，放入愈伤组织诱导培养基中培养15-20d，条件为暗培养，温度20°C ±2°C ;所述愈伤组织培养基为:MS+6-BA0.5-2.0mg/L+NAA0.02-0.5mg/L+PVP5-10mg/L ；5)分化和增殖培养:将透明无色的愈伤组织块放入分化培养基中培养20-25d，增殖产生大量丛生苗，培养条件为光强1800-2500LX、光周期10_14h/d，温度25°C ±2°C ;所述分化和增殖培养用培养基为:WPM+6-BA0.1-0.5mg/L+NAA0.1-0.5mg/L+PVP5-10mg/L ；6)生根培养:将5)步骤中的丛生苗切割成单个，转移至生根培养基中培养15-20d后生根，培养条件为光强 1800-2500LX、光周期10_14h/d，温度25°C ±2°C ;所述生根用培养基为:1/2MS+IBA0.1-0.5mg/L+PVP5-10mg/L ；7)炼苗和移栽:将有生根的杨梅幼苗的培养基瓶盖打开，室温下炼苗3-5d后，取出幼苗，洗去根部培养基，移栽装有河沙基质的苗床上，保持温度20-25°C，湿度85%-95%，适当遮荫即可；所述的WPM培养基配方为:大量元素:硝酸铵NH4N03400mg/L，硫酸钾K2S04900mg/L，磷酸二氢钾 KH2P03170mg/L，硫酸镁 MgS04.7H20370mg/L ;钙盐:氯化钙 CaCl2.2H2096mg/L ；四水合硝酸钙Ca(N03)2.4H20556mg/L ;微量元素:硼酸H3B036.2mg/L,硫酸锰MnS...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜波，沈宗根，吕洪飞，郁达，
申请(专利权)人：常熟理工学院，
类型：发明
国别省市：