狐狸尾兰组织培养方法技术

本发明专利技术公开了一种狐狸尾兰组织培养方法。本发明专利技术以狐狸尾兰未成熟种子作外植体，应用组织培养等生物技术对狐狸尾兰类原球茎体诱导、增殖和催根并获得狐狸尾兰组织培养所需培养基的最佳条件；（1）液体培养基有利于类原球茎体短期的快速增殖，长期继代培养及保存类原球茎体时选用固体1/2MS培养基适宜；（2）在培养过程中，施加1mg/L的BA的效果更优一些，及可以增加类原球茎体的数目，又不会引起玻璃化的产生；（3）在培养基中加入1.0g/L维生素C可以有效抑制外植体的褐化。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种。
技术介绍
狐狸尾兰(Rhynchos tylis gigantea)又名钻_兰、海南钻_兰、狐尾兰，为兰科钻喙兰尾多年生附生草本，其在野生环境下多附生于橡胶树、枫树或榕树上，是我国海南野生名优兰品种之一。狐狸尾兰叶片肥厚、翠绿，宽带状，外弯，多有数条浅色的纵条纹，茎直立，具数节，不分枝。狐狸尾兰花序直立或呈下垂状，且花序多而密集；花瓣比萼片小；其唇瓣呈浅3裂或不裂状；距两侧压扁；蕊柱短，蕊柱足较短；花粉块2个，有不同程度的裂隙，呈蜡质状；具有狭长的蕊喙柄以及较小粘盘，花期通常在1-3月。狐狸尾兰的花色也较为丰富，有红、粉红、白、蓝、橘等颜色。由于其花型独特，花色丰富，花期长，且花期为我国传统春节前后，是极好的新春贺岁花卉，因此受到人们的极度喜欢[1]。然而，由于我国海南地区热带森林过量采伐，致使野生狐狸尾兰的自然生境受到严重破坏，加上人为的过度采集出售，致使野生狐狸尾兰数量锐减，严重影响了狐狸尾兰生态群的构成。且由于狐狸尾兰的种子在自然条件下不易萌发，采用种子繁殖很难获得后代，虽然可以采取分株方法，但是这种方法不仅繁殖系数低，且繁殖速度非常慢，远远不能满足市场的需求[2]。目前，通过组织培养的技术来快速繁殖已在很多兰科植物普遍应用，比较常见的如蝴蝶兰、大花蕙兰等。
技术实现思路
`本专利技术提供一种，为狐狸尾兰工厂化育苗提供科学依据。本专利技术是以如下技术方案实现的:一种，以狐狸尾兰未成熟种子作外植体，应用组织培养等生物技术对狐狸尾兰类原球茎体诱导、增殖和催根并获得狐狸尾兰组织培养所需培养基的最佳条件；具体步骤如下:1)无菌材料的获得用去离子水冲洗狐狸尾兰果实表面，然后在超净工作台上用80%酒精表面消毒果实2min,无菌水冲洗3次，再用无菌滤纸吸干水分，然后用解剖刀切开荚果，取出细小种子，轻轻将种子均匀散落到固体培养基上，每平板接种量为55粒种子；2)类原球茎体诱导把狐狸尾兰的种子分别接种于诱导培养基中，诱导原球茎(类原球茎体)的形成。培养基组成成分如下:VW+6-BAl.5mg/L+NAA0.lmg/L ；3)培养方式的筛选将诱导出的类原球茎体接种在1/2MS培养基上，分别采用固体培养和液体转动培养两种方式，4次重复，每个处理接种20个三角瓶；四周后统计类原球茎体的增殖倍数；其增殖倍数=新长出的类原球茎体/接种类原球茎体数；4)植物生长调节剂浓度的筛选以1/2MS为基本培养基，添加不同浓度的BA，KT, IBA NAA这四种生长调节剂，分别进行单因素试验，每处理4次重复，每个处理接种20个三角瓶；四周后统计类原球茎体的增殖倍数，计算方法同步骤3)；5)不同添加物对类原球茎体的褐化以1/2MS为基本培养基，在培养基中分别添加不同浓度的维生素C、活性炭AC和Na2S203 ;分别进行单因素试验，每处理3次重复，每个处理接种20个三角瓶；50天后观察并记录类原球茎体褐化和生长状况。本专利技术的有益效果是:本专利技术通过对不同条件下类原球茎体增殖倍数的研究，来明确培养基中各种成分的作用方式，最终得出如下结论:1)液体培养基有利于类原球茎体短期的快速增殖，长期继代培养及保存类原球茎体时选用固体1/2MS培养基适宜；(2)在培养过程中，施加lmg/L的BA的效果更优，可以增加类原球茎体的数目，又不会引起玻璃化的产生；(3)在培养基中加入1.0g/L维生素C可以有效抑制外植体的褐化。【具体实施方式】实施例11)无菌材料的获得用去离子水冲洗狐狸尾兰果实表面，然后在超净工作台上用80%酒精表面消毒果实2min,无菌水冲洗3次，再用无菌滤·纸吸干水分，然后用解剖刀切开荚果，取出细小种子，轻轻将种子均匀散落到固体培养基上，每平板接种量为55粒种子；2)类原球茎体诱导把狐狸尾兰的种子分别接种于诱导培养基中，诱导原球茎(类原球茎体)的形成。培养基组成成分如下:VW+6-BAl.5mg/L+NAA0.lmg/L ；3)培养方式的筛选将诱导出的类原球茎体接种在1/2MS培养基上，分别采用固体培养和液体转动培养两种方式，4次重复，每个处理接种20个三角瓶；四周后统计类原球茎体的增殖倍数；其增殖倍数=新长出的类原球茎体/接种类原球茎体数；4)植物生长调节剂浓度的筛选以1/2MS为基本培养基，添加不同浓度的BA，KT, IBA NAA这四种生长调节剂，分别进行单因素试验，每处理4次重复，每个处理接种20个三角瓶；四周后统计类原球茎体的增殖倍数，计算方法同步骤3)；5)不同添加物对类原球茎体的褐化以1/2MS为基本培养基，在培养基中分别添加不同浓度的维生素C、活性炭AC和Na2S203 ;分别进行单因素试验，每处理3次重复，每个处理接种20个三角瓶；50天后观察并记录类原球茎体褐化和生长状况。实验结果分析1、培养条件对类原球茎体增殖的影响在两种培养模式下的类原球茎体增殖倍数统计见表1。表1.原球茎体增殖在不同培养条件下的增殖情况本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种狐狸尾兰组织培养方法，其特征在于：以狐狸尾兰未成熟种子作外植体,应用组织培养等生物技术对狐狸尾兰类原球茎体诱导、增殖和催根并获得狐狸尾兰组织培养所需培养基的最佳条件；具体步骤如下：1）无菌材料的获得用去离子水冲洗狐狸尾兰果实表面,然后在超净工作台上用80%酒精表面消毒果实2min,无菌水冲洗3次,再用无菌滤纸吸干水分,然后用解剖刀切开荚果,取出细小种子,轻轻将种子均匀散落到固体培养基上,每平板接种量为55粒种子；2）类原球茎体诱导把狐狸尾兰的种子分别接种于诱导培养基中,诱导原球茎(类原球茎体)的形成；培养基组成成分如下：VW+6?BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L；3）培养方式的筛选将诱导出的类原球茎体接种在1/2MS培养基上，分别采用固体培养和液体转动培养两种方式，4次重复，每个处理接种20个三角瓶；四周后统计类原球茎体的增殖倍数；其增殖倍数=新长出的类原球茎体/接种类原球茎体数；4）植物生长调节剂浓度的筛选以1/2MS为基本培养基，添加不同浓度的BA,KT,IBA?NAA这四种生长调节剂,分别进行单因素试验，每处理4次重复，每个处理接种20个三角瓶；四周后统计类原球茎体的增殖倍数，计算方法同步骤3）；5）不同添加物对类原球茎体的褐化以1/2MS为基本培养基，在培养基中分别添加不同浓度的维生素C、活性炭AC和Na2S2O3；分别进行单因素试验，每处理3次重复，每个处理接种20个三角瓶；50天后观察并记录类原球茎体褐化和生长状况。...

【技术特征摘要】
1.一种狐狸尾兰组织培养方法，其特征在于:以狐狸尾兰未成熟种子作外植体，应用组织培养等生物技术对狐狸尾兰类原球茎体诱导、增殖和催根并获得狐狸尾兰组织培养所需培养基的最佳条件；具体步骤如下:1)无菌材料的获得用去离子水冲洗狐狸尾兰果实表面，然后在超净工作台上用80%酒精表面消毒果实2min,无菌水冲洗3次，再用无菌滤纸吸干水分，然后用解剖刀切开荚果，取出细小种子，轻轻将种子均匀散落到固体培养基上，每平板接种量为55粒种子；2)类原球茎体诱导把狐狸尾兰的种子分别接种于诱导培养基中，诱导原球茎(类原球茎体)的形成；培养基组成成分如下:VW+6-BAl.5mg/L+NAA0.lmg/L ；3)培养方式的筛选将诱导出的类原球茎体接种在1/...

【专利技术属性】
技术研发人员：高宏秀，强承魁，张光琴，张莹，
申请(专利权)人：徐州生物工程职业技术学院，
类型：发明
国别省市：