具有效应功能的抗CXCR4抗体及其用于治疗癌症的用途制造技术

本发明专利技术涉及通过施用能够诱导效应功能的抗CXCR4单克隆抗体治疗癌症的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有效应功能的抗CXCR4抗体及其用于治疗癌症的用途
本专利技术涉及通过施用能够诱导效应功能的抗CXCR4单克隆抗体治疗癌症的方法。
技术介绍
趋化因子是小的分泌肽，特别是免疫反应期间其控制着白细胞沿被称为趋化因子梯度的配体化学梯度的迁移(Zlotnick A.等人，2000)。基于其NH2-端半胱氨酸残基的位置、及与G蛋白偶联受体(其两个主要亚家族被命名为CCR和CXCR)的结合，趋化因子被分为两个主要的亚家族，CC和CXC。到目前为止人们已发现了超过50个人趋化因子和18个趋化因子受体。 许多癌症具有复杂的趋化因子网络，其影响肿瘤的免疫细胞浸润以及肿瘤细胞生长、存活、迁移和血管生成。免疫细胞、内皮细胞和肿瘤细胞自身表达趋化因子受体，并可以响应趋化因子梯度。人类癌症活检样本和小鼠癌症模型的研究表明癌细胞趋化因子受体的表达与转移能力的增加有关。来自不同癌症类型的恶性细胞具有不同的趋化因子受体表达谱，但是趋化因子受体4 (CXCR4)是最常发现的。来自至少23种不同类型的上皮起源、间充质起源和造血起源的人类癌症的细胞表达CXCR4受体(Balkwill F.等人，2004)。趋化因子受体4 (也称为融合素、⑶184、LESTR或HUMSTR)作为包含352个或360个氣基酸的两种同种型存在。残基Asnll是糖基化的，残基Tyr21是通过添加硫酸基团修饰的，Cysl09和186通过二硫桥在受体的细胞外部分进行结合(Juarez J.等人,2004)。该受体由不同类型的正常组织、天然的(naive)、非记忆T细胞、调节性T细胞、B细胞、嗜中性粒细胞、内皮细胞、初级单核细胞、树突细胞、自然杀伤(NK)细胞、CD34+造血干细胞表达，且在心脏、结肠、肝、肾和脑中以低水平表达。CXCR4在白细胞转运(trafficking)、B细胞淋巴细胞生成和髓细胞生成中起关键作用。CXCR4受体在大量癌症中过表达，所述癌症包括但不限于淋巴瘤、白血病、多发性骨髓瘤、结肠癌(Ottaiano A.等人，2004)、乳癌(Kato M.等人，2003)、前列腺癌(SunY.X.等人，2003)、肺癌(小细胞癌和非小细胞癌(Phillips R.J.等人，2003))、卵巢癌(Scotton C.J.等人,2002)、胰腺癌(Koshiba T.等人,2000)、肾癌、脑癌(Barbero S 等人，2002),成胶质细胞瘤和淋巴瘤。迄今描述的CXCR4受体的唯一配体是间质细胞衍生因子-1 (SDF-1)或CXCL12。SDF-1在淋巴结、骨髓、肝、肺中大量分泌，肾、脑和皮肤分泌程度更少。CXCR4也被拮抗趋化因子识别，该拮抗趋化因子是III型人疱疹病毒编码的病毒巨噬细胞炎症蛋白II(vMIP-1I)。CXCR4/SDF-1轴在癌症中起关键作用，直接参与导致转移的迁移、侵入。实际上，癌细胞表达CXCR4受体，它们迁移并进入系统循环。然后，癌细胞被滞留(arrested)在产生高水平SDF-1的器官中的血管床中，在那儿其增殖、诱导血管生成和形成转移性肿瘤(MurphyPM.,2001 )0该轴也通过激活细胞外信号调节的激酶(ERK)途径(Barbero S.等人，2003)和血管生成(Romagnani P.，2004)参与细胞增殖。实际上，CXCR4受体及其配体SDF-1通过刺激VEGF-A表达显然地促进了血管生成，其转而增加了 CXCR4/SDF-1的表达(BachelderR.E.等人，2002)。还已知与肿瘤相关的巨噬细胞(TAM)聚集在肿瘤的缺氧区域，经刺激后与肿瘤细胞合作，并促进血管生成。据观察缺氧选择性地上调包括TAM的各种细胞类型中CXCR4的表达(Mantovani A.等人，2004)。最近证实CXCR4/SDF-1轴调节CXCR4+造血干细胞/祖细胞(HSC)的转运/归巢，可在新生血管形成中起作用。证据显示除了 HSC之外，功能性CXCR4也在来自其它组织(组织定向干细胞=TCSC)的干细胞上表达，因此SDF-1可在器官/组织再生所需的化学引诱(chemottracting) CXCR4+TCSC中起关键作用，但是这些TCSC也可以是癌症发展的细胞起源(癌症干细胞理论)。对于人类白血病，和最近对于几种实体肿瘤，比如脑和乳房，证实了癌症的干细胞起源。存在几个可以衍生自正常CXCR4+组织/器官特异性干细胞的CXCR4+的肿瘤实例，比如白血病、脑肿瘤、小细胞肺癌、乳癌、肝胚细胞瘤、卵巢癌和宫颈癌(Kucia M.等人，2005)。使用针对CXCR4受体的单克隆抗体在体内证实了通过干扰CXCR4受体可以靶向癌症转移(Muller A.等人，2001)。简而言之，已表明针对CXCR4受体(单抗173R&D系统)的单克隆抗体显著地减少了 SCID小鼠中常位(orthotopic)乳癌模型(MDA-MB231)中淋巴结转移的数量。另一个研究(Phillips R.J等人，2003)使用抗SDF-1的多克隆抗体也显示SDF-1/CXCR4轴在常位肺癌模型(A549)的转移中起决定性作用，但是在该研究中，其对于肿瘤生长和血管生成都没有作用。几个其它研究也描述了使用CXCR4的SiRNA双链体(Liang Z.等人，2005)生物稳定的CXCR4肽拮抗剂(Tamamura H.等人，2003)对体内转移的抑制，或使用CXCR4的小分子拮抗剂如AMD3100(Rubin J.B.等人，2003 ；De Falco V.等人，2007)或单抗(专利W02004/059285A2)对体内肿瘤生长的抑制。因此，CXCR4是经验证的用于癌症的治疗靶。也已经描述了能够指导与CXCR4的相互作用、从而抑制CXCR4激活的鼠单克隆抗体。通过如下干预发生这种抑制:i)在配体SDF-1的细胞膜上特异性结合受体CXCR4，ii)GTPyS的细胞膜上特异性结合受体CXCR4，iii)CXCR4介导的cAMP产生的调节，和iv)CXCR4受体介导的细胞内钙库调节的动员(参见，W02010/037831)。但是，这些抗体或SiRNA都不能导致表达CXCR4的癌细胞的杀死。因而，仍存在癌症复发的风险，应当停止CXCR4的靶向治疗。因而，需要直接靶向表达CXCR4的细胞的制剂，其能够杀死所述表达CXCR4的细胞。本专利技术涉及关于靶向CXCR4抗体的从未被鉴定的新型特性。
技术实现思路
事实上，本专利技术人已发现针对CXCR4的人或人源化抗体能够诱导针对表达CXCR4的细胞的效应功能，因此引发针对所述细胞的细胞毒性作用。更具体地，本专利技术涉及诱导针对表达CXCR4的癌细胞的效应功能的方法。如现有技术所述，转移性表达CXCR4的肿瘤的治疗涉及抑制迁移、侵入、增殖或血管生成，而非直接杀死表达CXCR4的细胞。与之截然相反的是，本专利技术涉及诱导引发表达CXCR4的靶细胞死亡的细胞毒性作用。具体而言，本专利技术提供人或人源化单克隆抗体，其能诱导针对表达CXCR4的癌细胞的一种或多种效应功能，从而实现杀死所述细胞。因此，本专利技术凭借人或人源化单克隆抗体通过诱导针对表达CXCR4的癌细胞的一种或多种效应功能，提供治疗癌症的方法。在第一方面，本专利技术涉及使用结合CXCR本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种结合CXCR4的人源化抗体、或其含有CH2的结合片段，所述人源化抗体包含选自序列SEQ?ID?No.7至10的重链可变结构域和选自序列SEQ?ID?No.11至17的轻链可变结构域；在效应细胞或补体成分存在时，通过诱导至少一种效应功能杀死表达CXCR4的癌细胞，用于治疗癌症的方法中。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.06.20 EP 11305773.1;2011.06.20 US 61/499,0041.一种结合CXCR4的人源化抗体、或其含有CH2的结合片段，所述人源化抗体包含选自序列SEQ ID N0.7至10的重链可变结构域和选自序列SEQ ID N0.11至17的轻链可变结构域；在效应细胞或补体成分存在时，通过诱导至少一种效应功能杀死表达CXCR4的癌细胞，用于治疗癌症的方法中。2.根据权利要求1所述的人源化抗体，其特征在于所述效应功能由抗体依赖的细胞细胞毒性(ADCC)组成。3.根据权利要求1所述的人源化抗体，其特征在于所述效应功能由补体依赖的细胞毒性(CDC)组成。4.根据权利要求1所述的人源化抗体，其特征在于所述效应功能由抗体依赖的细胞细胞毒性(ADCC)和补体依赖的细胞毒性(⑶C)组成。5.根据权利要求1至4任一项所述的人源化抗体，其中所述人源化抗体选自: 包含序列SEQ ID N0.8的重链可变结构域和选自序列SEQ ID N0.11至17的轻链可变结构域的人源化抗体； 包含选自序列SEQ ID N0.7至10的重链可变结构域和序列SEQ ID N0.13的轻链可变结构域的人源化抗体； 包含序列SEQ ID N0.8的重链可变结构域和序列SEQ ID N0.13的轻链可变结构域的人源化抗体； 包含选自序列SEQ ID N0.18至21的重链和/或选自序列SEQ ID N0.22至28的轻链的人源化抗体； 包含序列SEQ ID N0.19的重链和/或选自序列SEQ ID N0.22至28的轻链的人源化抗体；` 包含选自序列SEQ ID N0.18至21的重链和/或序列SEQ ID N0.24的轻链的人源化抗体；和 包含序列SEQ ID N0.19的重链和/或序列SEQ ID N0.24的轻链的人源化抗体。6.根据权利要求1至7任一项所述的人源化抗体，其特征在于所述抗体是IgGl。7.根据权利要求1至6任一项所述的人源化抗体，其特征在于所述表达CXCR4的癌细胞由恶性血液细胞组成。8.根据权利要求7所述的人源化抗体，其特征在于所述CXCR4恶性血液细胞选自淋巴瘤细胞、白血病细胞或多发性骨髓瘤细胞。9.根据权利要求1至8任一项所述的人源化抗体，其特征在于所述效应细胞包含NK细胞、巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞或嗜酸性粒细胞。10.根据权利要求1至9任一项所述的人源化抗体，其特征在于在4小时的孵育期后，所述人源化抗体诱导RAMOS淋巴瘤细胞上至少40%的ADCC水平。11.根据权利要求1至10任一项所述的人源化抗体，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·克林格阿穆，
申请(专利权)人：皮埃尔法布雷医药公司，
类型：
国别省市：