血液样品预处理方法技术

一种血液样品预处理方法，包括：在试管中加入乙腈溶剂和血浆，血浆与乙腈溶剂的体积比大于等于1∶3，血浆中的杂蛋白分离形成絮状物，锁链素附着在絮状物中；提取絮状物；在所述絮状物中加入高效液相色谱级酸性水溶液，絮状物中的锁链素以离子形态游离在所述高效液相色谱级酸性水溶液；提取具有锁链素离子的高效液相色谱级酸性水溶液。锁链素附着在絮状物中，后续絮状物加入高效液相色谱级酸性水溶液中，锁链素溶解，提取具有锁链素离子的高效液相色谱级酸性水溶液用于HPLC检测。本技术方案的血液样品预处理方法无需现有技术的萃取、氮气吹干等步骤，简化了血液样品预处理步骤，节省预处理时间，也不需操作人员实时监测，降低对人的依赖性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医疗
，特别涉及一种。
技术介绍
对血液样品进行预处理是指从血液样品中提取待测物。后续将通过检测该待测物的含量、成分等参数，达到疾病检查、健康检查的目的。例如，在现有技术中，肺损伤患者由于肺部富含的弹性纤维组织降解生成特异性产物锁链素(desmos ine，DES )，造成血浆中锁链素浓度的升高。因此，使用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)检测血衆中 DES 浓度，根据 DES 浓度可实现对肺损伤的临床检验及研究。但是，HPLC对血液样品上样前的预处理有较为苛刻的要求。由于血浆中成分复杂，其中DES含量相对较低，传统的预处理方法较为繁复。传统的包括:在试管中加入A溶液和血浆，A溶液用于分离血浆中的杂蛋白；涡旋振荡，使试管中的A溶液和血浆充分混匀，血浆中的杂蛋白形成絮状物，锁链素以离子态游离于溶液中；离心，将试管置于离心机中进行离心处理，絮状物与溶液分离，并沉积在试管底部；萃取，从试管中的上层溶液中提取含有锁链素的溶液至另一试管中；氮气吹干，使用氮气吹拂另一试管中的溶液，至液体完全吹干，试管中的干燥粉末包括锁链素成分，整个氮气吹干过程大概需要7至8个小时；复溶，向装有吹干的干燥粉末的试管中加入B溶液，干燥粉末再溶解，其中的锁链素以离子状态游离于B溶液中；过滤，去除复溶溶液中的其他微粒杂质，得到具有锁链素的溶液。具有锁链素离子的溶液用于HPLC检测。对传统的血液样品的预处理方法进行分析，整个过程过于繁琐，整个血液样品预处理时间总耗时长达十几个小时。氮气吹干步骤中，在吹干后需要及时停止氮气吹拂，否则干燥粉末可能被吹跑。而且氮气吹干步骤花费时间太长，这对操作人员的技术要求和依赖性特别高，需要操作人员实时监测。另外，传统的所需血浆样品较多，一般至少需要0.5?lmL，而且利用率也低。
技术实现思路
本专利技术解决的问题是，传统的的过程过于繁琐。为解决上述问题，本专利技术提供一种，所述包括:在试管中加入乙腈溶剂和血浆，血浆与乙腈溶剂的体积比大于等于1:3，血浆中的杂蛋白分离形成絮状物，锁链素附着在絮状物中；提取絮状物；在所述絮状物中加入高效液相色谱级酸性水溶液，絮状物中的锁链素以离子形态游离在所述高效液相色谱级酸性水溶液；提取具有锁链素离子的高效液相色谱级酸性水溶液。可选地，所述高效液相色谱级酸性水溶液为甲酸溶液或三氟乙酸溶液，所述甲酸溶液、三氟乙酸溶液的体积浓度范围为0.5%。?1%。。可选地，在提取所述絮状物之前，对装有乙腈溶剂和血浆的试管进行涡旋振荡。可选地，所述提取絮状物的方法为:进行离心过滤处理，得到甩干的絮状物，在所述离心过滤过程，离心机的转速范围为4000?5000rpm。可选地，在所述絮状物中加入高效液相色谱级酸性酸溶液后，静置2?3min。可选地，静置后，对装有高效液相色谱级酸性水溶液的试管进行涡旋振荡。可选地，所述涡旋振荡的时间范围为20?30s。可选地，提取具有锁链素离子的高效液相色谱级酸性水溶液的方法为:进行离心过滤处理，得到具有锁链素离子的高效液相色谱级酸性水溶液，在所述离心过滤过程，离心机的转速为lOOOOrpm。可选地，所述离心过滤时间范围为2?3min。可选地，在所述中，使用的试管包括第一管、可分离套装于第一管中的第二管，[0021 ] 所述第二管具有第一开口和第二开口，所述第一开口具有可横亘在第一管开口边缘的延伸件，乙腈溶剂、血浆和高效液相色谱级酸性水溶液通过第一开口进入第二管中；所述第二管中设置有滤膜，所述滤膜表面与所述第一开口相对，所述滤膜边缘与第二管内壁贴合，所述滤膜与第一开口之间的第二管部分用于盛装乙腈溶剂、血浆和高效液相色谱级酸性水溶液；提取絮状物过程，使用滤膜过滤第二管中的溶液，第二管中的溶液流入一第一管，絮状物沉积在滤膜表面；在提取絮状物后，分离第一管与第二管，将第二管套装于另一第一管中；提取具有锁链素离子的高效液相色谱级酸性水溶液过程，具有锁链素离子的高效液相色谱级酸性水溶液流入另一第一管。与现有技术相比，本专利技术的技术方案具有以下优点:血浆与乙腈溶剂的体积比大于等于1:3，可以使锁链素附着在絮状物中。由于锁链素附着在絮状物中，后续絮状物加入高效液相色谱级酸性水溶液中，锁链素从絮状物中释放并溶解，之后提取具有锁链素离子的高效液相色谱级酸性水溶液用于HPLC检测。本技术方案的无需现有技术中的萃取、氮气吹干等步骤，简化了血液样品预处理步骤，节省血液样品预处理时间，也不需要操作人员实时监测，降低对人的依赖性。【附图说明】图1是本专利技术具体实施例的血液样品预处理过程使用的试管的剖面结构示意图。【具体实施方式】本专利技术提供一种，该预处理方法操作简单，步骤少，节省时间。为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更为明显易懂，下面结合附图对本专利技术的具体实施例做详细的说明。第一步，取一干净试管，在试管中加入乙腈溶剂和血浆，血浆与乙腈的体积比大于等于1:3，在乙腈溶剂的作用下，血浆中的杂蛋白分离形成絮状物，血浆中的锁链素以离子态附着在絮状物中，絮状物位于试管的溶液中。在本实施例中，血浆的体积范围为75μ L?100 μ L,与现有技术相比，本实施例所需血浆体积很小。在本实施例中，血浆与乙腈溶剂的体积比为1:3，这样可以保证血浆中的锁链素基本全部吸附在絮状物中，避免混合溶液中存在锁链素残留，而影响检测结果。在具体实施例中，血浆与乙腈溶剂的体积比不限于1:3，大于1:3也是可行的。在本实施例中，可以遵循先加入质量密度较小的液体，后加入质量密度较大的液体的原则，先向试管中加入乙腈溶剂，乙腈溶剂的质量密度小于血浆的质量密度；接着向乙腈溶剂中加入血浆。质量密度较大的血浆会快速向乙腈溶剂中扩散，保证血浆与乙腈溶剂充分混合。在血浆与乙腈溶剂混合时，在乙腈溶剂的作用下，血浆中的杂蛋白凝聚形成絮状物，同时血浆中的锁链素呈离子态，并随着杂蛋白的凝聚附着在絮状物中。在本实施例中，乙腈溶剂为高效液相色谱级乙腈溶剂，所谓高效液相色谱级是指乙腈的纯度很高，可以在高效液相色谱中使用的试剂纯度。在具体实施例中，除了本实施例的高效液相色谱级乙腈溶剂，还可使用其他可行的高纯或超纯乙腈溶剂。第二步，涡旋振荡。将试管置于涡旋振荡器中，塞住试管的开口，进行涡旋振荡处理，涡旋振荡使得血浆与乙腈溶剂充分混匀，促进絮状物的形成。在涡旋振荡过程中，可同时进行搅拌，使得试管中的较大块絮状物被打散。由于锁链素除附着在于絮状物表面，还可能包裹在絮状物中，打散絮状物可以使锁链素充分暴露在絮状物表面，这样在后续过程的溶液中，絮状物中的锁链素能得到充分溶解，以保证测得的锁链素含量准确。在具体实施例中，涡旋振荡的时间范围为20?30s，可以实现血浆与乙腈溶剂充分混匀，并打散较大块絮状物。在本实施例中，涡旋振荡的时间为30s。第三步，离心过滤。进行离心过滤处理。在离心过滤过程中，溶液与絮状物分离，溶液被遭离心过滤至其他容器中，絮状物中的液体基本被甩干，得到干燥的絮状物，将干燥的絮状物放入另一试管中。在本实施例中，过滤过程使用的滤膜14为有机相滤膜，允许有机溶剂通过。滤膜14的滤孔孔径不大于0.5 μ m，可过滤掉溶液中的绝大多数难溶微粒杂质。在具体实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种血液样品预处理方法，其特征在于，包括：在试管中加入乙腈溶剂和血浆，血浆与乙腈溶剂的体积比大于等于1：3，血浆中的杂蛋白分离形成絮状物，锁链素附着在絮状物中；提取絮状物；在所述絮状物中加入高效液相色谱级酸性水溶液，絮状物中的锁链素以离子形态游离在所述高效液相色谱级酸性水溶液；提取具有锁链素离子的高效液相色谱级酸性水溶液。

【技术特征摘要】
1.一种血液样品预处理方法，其特征在于，包括: 在试管中加入乙腈溶剂和血浆，血浆与乙腈溶剂的体积比大于等于1:3，血浆中的杂蛋白分离形成絮状物，锁链素附着在絮状物中； 提取絮状物； 在所述絮状物中加入高效液相色谱级酸性水溶液，絮状物中的锁链素以离子形态游离在所述高效液相色谱级酸性水溶液； 提取具有锁链素离子的高效液相色谱级酸性水溶液。2.如权利要求1所述的血液样品预处理方法，其特征在于，所述高效液相色谱级酸性水溶液为甲酸溶液或三氟乙酸溶液，所述甲酸溶液、三氟乙酸溶液的体积浓度范围为0.5%0?1%0。3.如权利要求1所述的血液样品预处理方法，其特征在于，在提取所述絮状物之前，对装有乙腈溶剂和血浆的试管进行涡旋振荡。4.如权利要求1所述的血液样品预处理方法，其特征在于，所述提取絮状物的方法为:进行离心过滤处理，得到甩干的絮状物，在所述离心过滤过程，离心机的转速范围为4000 ?5000rpm。5.如权利要求1所述的血液样品预处理方法，其特征在于，在所述絮状物中加入高效液相色谱级酸性酸溶液后，静置2?3min。6.如权利要求5所述的血液样品预处理方法，其特征在于，静置后，对装有高效液相色谱级酸性水溶液的试管进行涡旋振荡。7.如权利要求3或6所述的血液样品预处理方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：许骥，陈杰，陈锐勇，刘晓波，何佳，陈新，向导，
申请(专利权)人：中国人民解放军海军医学研究所，
类型：发明
国别省市：