一种稳定的含菠萝蛋白酶的凝胶制造技术

本发明专利技术涉及一种稳定的含菠萝蛋白酶的凝胶，含有作为活性成分的菠萝蛋白酶和药学上可接受的载体PLGA-PEG-PLGA，具有稳定性良好，使用方便，作用迅速的特点，同时具有抑菌作用，用于蛋白变性修复、抗炎、止痛、增加抗生素效果，属于医药技术领域。

【技术实现步骤摘要】
一种稳定的含菠萝蛋白酶的凝胶
本专利技术涉及一种的含菠萝蛋白酶的凝胶，具有在良好的稳定性，使用方便，作用迅速的特点，同时具有抑菌作用，用于蛋白变性修复、抗炎、止痛、增加抗生素效果，属于医药
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技术介绍
菠萝蛋白酶(BiOmelain，简称菠萝酶，亦称为凤梨酶或凤梨酵素)是从菠萝果茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷冻干燥而得到的一种纯天然植物蛋白酶。其外观为浅灰色粉末状，分子量为33000，等电点为9.55，最适pH值:6~8。溶于水，不溶于乙醇、氯仿和乙醚。属糖蛋白。主要作用原理:使多肽类水解为低分子量的肽类。尚有水解酰胺基键和酯类的作用。主要的医药用途包括可抑制肿瘤细胞的生长；对心血管疾病的防治是有益的。它能抑制血小板聚集引起的心脏病发作和中风，缓解心绞痛症状，缓和动脉收缩，加速纤维蛋白原的分解。能选择性地除皮，使新皮移植得以尽早进行。动物实验证明，菠萝蛋白酶对邻近的正常皮肤无不良影响。菠萝蛋白酶在各种组织中能有效地治疗炎症和水肿(包括血栓静脉炎、骨骼肌损伤、血肿、口腔炎、糖尿病人溃疡及运动损伤)。将菠萝蛋白酶与各种抗生素(如四环素，阿莫西林等)联用，能提高其疗效。相关研究表明，它能促进抗生素在感染部位的传输，从而减少抗生素的用药量。据推断，对于抗癌药物，也有类似的作用。此外，菠萝蛋白酶能促进营养物质的吸收。另外，菠萝蛋白酶还具有嫩肤、美白去斑的优异功效。基本作用原理:菠萝蛋白酶可作用于人体皮肤上的老化角质层，促使其退化、分解、去除，促进皮肤新陈代谢，减少因日晒引起的皮肤色深现象。使皮肤保养呈现良好白嫩状态。在干燥或低湿的环境下，菠萝蛋白酶的失活发生在保存的前期，到后期趋于平稳，这是由于保存初期酶的湿度大于环境湿度，较高的水分赋予酶结构一定的柔性，酶活性中心的构象易发生变化。当酶与干燥环境达到平衡后，酶的水分减少，酶活趋于稳定。同时，在高湿环境下，酶活一直下降，其原因除了高水分增加了酶结构的柔性外，更重要的是由于蛋白酶的自水解作用。但是由于药用菠萝蛋白酶原料的对高湿和温度敏感，在水溶液或水分较多的状态下很快降解失活，使其提供的剂型仅限于胶囊、粉剂等，需要临用前用溶剂调制，使用不便。水凝胶是一种能够在水中溶胀并保持大量水而又并不溶解的亲水性聚合物，通过共价键、氢键或范德华力等作用相互交联构成三维网状结构。由于有大量的水分充斥于水凝胶聚合物网络中，因此整个材料具有了流体的性质，这与机体组织(含有大量水溶液)非常相似，湿润、柔软的表面还有与组织的亲和力大大减少了材料对机体组织的刺激，使得水凝胶的生物相容性比其他材料要好。另外，高分子水凝胶的网状结构还可以保护药物不被酶解或被胃酸破坏。根据水凝胶对外界刺激的响应情况可将其分为两大类:传统水凝胶(普通水凝胶)和智能水凝胶(环境敏感水凝胶)。前者对环境的变化不敏感，而后者对于外界微小的物理化学刺激，如温度、电场、磁场、光、pH、离子强度和压力等能够感知、处理并产生应答，表现为体积、形态等的显著变化。温敏水凝胶是一类响应温度变化的智能材料，由亲水性聚合物形成的网络结构，当温度超过低临界溶液温度(LCST)时，体系发生溶液-凝胶转变；当温度超过高临界溶液温度(UCST)时，体系发生凝胶-溶液转变；反相温敏凝胶材料的特征是，低温下为液态，高温时转变成固态或半固态的凝胶。其优越性能正是在于其相变的特性。在体外是液态，用于生物体或体表，在局部形成一定机械强度的凝胶，控制药物缓慢释放。由于在体外为不定型的液体，在给药后可以随给药部位不同形成各种形状，特别是用于局部的体表使用时，达到无死角给药，而后形成均匀的附着凝胶层，更好的发挥药效，并有一定的屏蔽作用。由于菠萝蛋白酶具有局部用药的潜质，为得到一种菠萝蛋白酶的局部用药，本专利技术进行了有关研究，发现使用水凝胶制剂可以解决菠萝蛋白酶在液体或半固体状态下的稳定性问题，为此本专利技术提供了一种稳定性良好的，使用方便的菠萝蛋白酶温敏性凝胶制剂。无需调剂，可直接涂抹于病患部位，作用迅速。
技术实现思路
本专利技术所提供一种含菠萝蛋白酶的水凝胶制剂，含有作为活性成分的菠萝蛋白酶和药学上可接受的载体；本专利技术的水凝胶制剂，其中所述菠萝蛋白酶为经过提纯步骤获得的精制蛋白水解酶。其水解酶活力为每克15-18万单位；蛋白含量为16-20%。其中所述精制蛋白水解酶的制备方法如下:1.取一定量的外购菠萝蛋白酶，加入15-20倍的pH6.0-7.2,0.02-0.05M的磷酸缓冲液浸提，4-10°C条件下磁力搅拌2-4小时，4000-10000转/分离心10分钟，收集上清液；或者用滤过法除去浸提液中的不溶性杂质；2.收集的液体用45%饱和度的硫酸铵进行沉淀，沉淀后，离心去掉上清液；`3.沉淀物再用蒸馏水透析脱盐(1:100)，脱去硫酸铵，得浓缩液；4.进一步进行冷冻干燥得到精制菠萝蛋白酶；或者浓缩液用冷丙酮沉淀，用冷冻离心机离心后，得到沉淀物，经自然低温干燥可得精制菠萝蛋白酶；本专利技术的水凝胶制剂，其中所述药学上可接受的载体为LA:GA:PEG1500=6:1:3的重量比例进行聚合反应得到的PLGA-PEG-PLGA，该载体在25°C下20%的共聚物水溶液粘度为6.9mm2/s。与50%的甘油溶液具有相同粘度，其在浓度为25%时发生胶凝的温度为32°C，即在25°C下，可自由流动，在32°C条件下，体系发生溶液-凝胶转变，本专利技术经过筛选发现该载体特别适合本专利技术的菠萝蛋白酶制剂。本专利技术所述PLGA-PEG-PLGA是一种三嵌段聚合物，由混旋丙交脂、乙交酯聚乙二醇1500经过聚合反应聚合而成。本专利技术优选使用LA:GA:PEG1500=6:1:3的重量比例进行聚合反应得到的PLGA-PEG-PLGA三嵌段聚合物，本专利技术的PLGA-PEG-PLGA三嵌段聚合物其制备方法如下:1)称量混旋丙交脂6份、乙交酯1份、聚乙二醇15003份；2)将混旋丙交脂、乙交酯置于40°C烘箱中挥水2h，同时将聚乙二醇1500放于140°C烘箱中挥水2h ；3)将挥水后的混旋丙交脂、乙交酯和聚乙二醇1500混与同一西林瓶中并加入催化剂异羊酸亚锡(0.1%，w/w)，真空封盖后压盖；4)将封盖后的西林瓶放于140°C烘箱中使其反应12h，完毕后趁热倒出，自然冷却至室温,4°C纯化水溶解，全溶后加热至70°C产生沉淀弃去水层，再加4°C纯化水，重复操作3次，除去反应的单体化合物和低分子水溶性共聚物。本专利技术的水凝胶制剂，制备方法如下:取精制菠萝蛋白酶适量，用水溶解，加入到PLGA-PEG-PLGA的水溶液中，在低于20°C条件下，搅拌溶解，补水到全量即得。其中，精制菠萝蛋白酶的用量为:10-30%，优选20%。PLGA-PEG-PLGA 的用量为:10-30%，优选 20% 。其余为水。溶解后，分装，得到可商用的制剂。由于PEG嵌段对蛋白酶的亲和吸附作用，使其保持相对稳定的空间结构，增加了在高水分条件下的稳定性。本专利技术的凝胶制剂，根据需要还可加入激动剂，所述激动剂选自:半胱氨酸、硫酸镁、氧化锌，其加入量根据各自的特点，加入适当的有效量即可。其中半胱氨酸能够启动激动程序，二价的镁离子和锌离子，可以调高蛋白酶的活力效应。同时在作用于有渗出的炎症时，可以吸收本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种含菠萝蛋白酶的水凝胶制剂，含有作为活性成分的菠萝蛋白酶和药学上可接受的载体；其中所述菠萝蛋白酶为经过提纯步骤获得的精制蛋白水解酶。其水解酶活力为每克15?18万单位；蛋白含量为16?20%；所述药学上可接受的载体为PLGA?PEG?PLGA。

【技术特征摘要】
1.一种含菠萝蛋白酶的水凝胶制剂，含有作为活性成分的菠萝蛋白酶和药学上可接受的载体；其中所述菠萝蛋白酶为经过提纯步骤获得的精制蛋白水解酶。其水解酶活力为每克15-18万单位；蛋白含量为16-20% ;所述药学上可接受的载体为PLGA-PEG-PLGA。2.根据权利要求1的水凝胶制剂，其中所述精制蛋白水解酶的制备方法如下:1)取一定量的外购菠萝蛋白酶，加入15-20倍的pH6.0-7.2,0.02-0.05M的磷酸缓冲液浸提，4-10°C条件下磁力搅拌2-4小时，4000-10000转/分离心10分钟，收集上清液；或者用滤过法除去浸提液中的不溶性杂质；2)收集的液体用45%饱和度的硫酸铵进行沉淀，沉淀后，离心去掉上清液；3)沉淀物再用蒸馏水透析脱盐(1:100)，脱去硫酸铵，得浓缩液；4)进一步进行冷冻干燥得到精制菠萝蛋白酶；或者浓缩液用冷丙酮沉淀，用冷冻离心机离心后，得到沉淀物，经自然低温干燥可得精制菠萝蛋白酶。3.根据权利要求1的水凝胶制剂，其中所述PLGA-PEG-PLGA在25°C下20%的共聚物水溶液粘度为6.9mm2/s。与50%的甘油溶液具有相同粘度，其在浓度为25%时发生胶凝的温度为32°C，即在25°C下，可自由流动，在32°C条件下，体系发生溶液-凝胶转变；所述PLGA-PEG-PLGA是按LA:GA:PEG1500=6:1:3的重量比例反应得到，其制备方法如下:1)称量混旋丙交脂6份 、乙交酯1份、聚乙二醇15003份；2)将混旋丙交脂、乙交酯置于40°C烘箱中挥水2h，同时将聚乙二醇1500放于140°C烘箱中?车水2h ；3)将挥水后的混旋丙交脂、乙交酯和聚乙二醇1500混与同一西林瓶中并加入催化剂异羊酸亚锡(0.1%，w/w)，真空封盖后压盖；4)将封盖后的西林瓶放于140°C烘箱中使其反应12h，完毕后趁热倒出，自然冷却至室温,4°C纯化水溶解，全溶后加热至70°C产生沉淀弃去水层，再加4°C纯化水，重复操作3次，除去反应的单体化合物和低分子水溶性共聚物。4.根据权利要求1的水凝胶制剂，根据需要还可加入激动剂，所述激动剂选自:半胱氨酸、硫酸镁、氧化锌；其中，精制菠萝蛋白酶的用量为:10-30%，PLGA-PEG-PLGA的用量为:10-30%，激动剂的用量为:0.1-5%，其余为水。5.根据权利要求1的水凝胶制剂，其中，精制菠萝蛋白酶的用量为:20%，PLGA-PEG-PLGA的用量为:20%，激动剂的用量为:0.1_5%，其余为水。6.根据权利要求1的水凝胶制剂的制备方法，步骤如下:取精制菠萝蛋白酶，用水溶解，加入到PLGA-PEG-PLGA的水溶液中，根据需要还可加入激动剂，在低于20°C条件下，搅拌溶解，补水到全量即得。7.根据权利要求6的制备方法，其中菠萝蛋白酶的精制方法如下:1)取菠萝蛋白酶，加入15倍的pH7.2，0.05M的...

【专利技术属性】
技术研发人员：尚丽霞，
申请(专利权)人：北京诺康达医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：