凝血因子抑制剂的结合蛋白制造技术

本发明专利技术涉及在体外和/或体内中和抗凝血剂的抗凝作用的抗原结合区、抗体、抗原结合抗体片段和抗体模拟物的鉴别和用途。本发明专利技术的抗体和功能片段以及抗体模拟物可用于特异性地逆转抗凝血剂例如FXa抑制剂的药理作用，用于治疗（解毒剂）和/或诊断目的。本发明专利技术还提供了编码上述分子的核酸序列、含所述核酸序列的载体、药物组合物和带有使用说明的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】凝血因子抑制剂的结合蛋白
本专利技术涉及与凝血因子的治疗性抑制剂相互作用并且中和所述凝血因子的治疗性抑制剂的抗原结合区、抗体、抗原结合抗体片段和抗体模拟物的鉴别和用途。本专利技术的抗体模拟物、抗体和功能片段可用于特异性地逆转(reverse)例如FXa抑制剂的药理作用，用于治疗(解毒剂)和/或诊断目的。本专利技术还提供了编码上述分子的核酸序列、含有所述核酸序列的载体、药物组合物和带有使用说明的试剂盒。
技术介绍
对抗凝血药物的通常限制是与治疗有关的出血风险和在紧急情况下受限的快速逆转其活性的能力。虽然新出现的抗凝血剂利伐沙班(rivaroxaban)是一种具有被证实的耐受性和安全性的新药，但是获得可快速中和其作用的特异性试剂(解毒剂)在医学上是有利的。在此，本专利技术人描述了可快速逆转由FXa抑制剂(例如利伐沙班)诱导的抗凝作用从而起到选择性解毒剂的作用的新的特异性抗体、抗原结合抗体片段和抗体模拟物。血栓栓塞性疾病(thromboembolie disorder)例如深部静脉血栓形成(DVT)、肺栓塞(PE)、中风和心肌梗死是与心血管疾病有关的发病和死亡的主要原因。多年以来，通过抗凝血药物如维生素K拮抗剂(VKA,例如华 法林(warfarin))、普通肝素(unfractionatedheparin, UFH)和低分子量肝素(LMWH)治疗和预防高风险患者中的血栓栓塞是得到广泛建立的医疗干预。然而，抗凝血剂的通常限制是与治疗有关的出血风险和在紧急情况下受限的快速逆转其活性的能力。对于典型的抗凝剂，可使用某些解毒剂，如硫酸鱼精蛋白(针对UHl和LMWH)和维生素K (针对VKA)。此外，可考将虑重组VIIa因子或血液制品作为非特异性的逆转剂(reversal agent)。然而,对于新出现的口服抗凝血剂(例如利伐沙班)，没有可用的或处于临床(cinical)开发中的特异性的解毒剂。在未来的数年中，这些新的抗凝血剂会变得越来越重要，并且针对所述新抗凝血剂之一的特异性解毒剂的存在会在紧急情况中提供医疗优势。虽然可使用常规抗凝血剂如UFH、LMWH和VKA，但是仍存在对具有可预测的药代动力学、更好的治疗窗口和方便的应用的改良治疗剂的强烈医疗需要。利伐沙班为一种新出现的可口服抗凝剂，其直接抑制凝血因子Xa (FXa) (Perzborn E.et al., Nat.Rev.Drug Discov.2011，10 (I):61-7)。FXa 代表凝血级联(coagulation cascade)的关键酶,其通过从凝血酶原产生凝血酶而催化血块形成。利伐沙班(化学名:5-氯-N-[[(5S)-2-氧代-3[4-(3-氧代吗啉-4-基)苯基]-1,3-恶唑啉-5-基]甲基]噻吩-2-甲酰胺)具有436g/mol的分子量，剂量依赖性地抑制FXa (Ki为0.4nM)且其选择性是对其他生物学上相关色氨酸蛋白酶的选择性的10，000倍以上。其具有快速起效的作用(km为1.7X10/M-1s-D并可逆结合(Iitjff为5X10-3S-1)。利伐沙班还抑制结合的凝血酶原酶(IC5tl为2.1nM)和与FXa有关的凝结(IC5tl为75nM)，并在多种动物模型中表现出对静脉和动脉血栓形成的剂量依赖性的抗凝活性。在临床研究中，利伐沙班表现出良好的安全性和耐受性情况，并且在非急需施行(elective)的髋或膝关节置换手术之后可有效预防成人患者中的VTEo利伐沙班以商品名本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在体外和/或体内中和抗凝血剂的抗凝活性的分离的抗体或其抗原结合片段或抗体模拟物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.01.19 EP 11151410.51.一种在体外和/或体内中和抗凝血剂的抗凝活性的分离的抗体或其抗原结合片段或抗体模拟物。2.一种结合抗凝血剂的分离的抗体或其抗原结合片段或抗体模拟物。3.一种结合抗凝血剂并在体外和/或体内中和所述抗凝血剂的抗凝活性的分离的抗体或其抗原结合片段或抗体模拟物。4.前述权利要求任一项的分离的抗体或其抗原结合片段或抗体模拟物，其中所述抗凝血剂具有小于5000Da的分子量。5.前述权利要求任一项的分离的抗体或其抗原结合片段或抗体模拟物，其中所述抗凝血剂为因子Xa抑制剂或凝血酶抑制剂。6.前述权利要求任一项的分离的抗体或其抗原结合片段或抗体模拟物，其中所述FXa抑制剂为含一组式I的化合物、阿哌沙班、贝曲西班、雷扎沙班、依杜沙班、奥米沙班或YM-150或者其中所述凝血酶抑制剂为达比加群。7.前述权利要求任一项的分离的抗体或其抗原结合片段或抗体模拟物，其中所述抗凝血剂为利伐沙班。8.前述权利要求任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体序列包含表1中抗体的可变重链CDR序列和可变轻链CDR序列。9.前述权利要求任一项的抗体或抗原结合片段，包含 由SEQ ID NO: 263 - 265表示的可变重链CDR序列和由SEQ ID NO: 266 - 268表示的可变轻链CDR序列，或者 由SEQ ID NO: 251 - 253表示的可变重链CDR序列和由SEQ ID NO: 254 - 256表示的可变轻链CDR序列，或者 由SEQ ID NO: 221 - 223表示的可变重链CDR序列和由SEQ ID NO: 224 - 226表示的可变轻链CDR序列。10.前述权利要求任一项的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体序列包含表I示出的抗体的可变重链序列和可变轻链序列。11.前述权利要求任一项的抗体或抗原结合片段，包含 由SEQ ID NO:489表示的重链片段序列和由SEQ ID N0:490表示的轻链序列，或者 由SEQ ID NO:217表示的可变重链序列和由SEQ ID NO:218表示的可变轻链序列，或者 由SEQ ID NO: 117表示的可变重链序列和由SEQ ID NO: 118表示的可变轻链序列，或者 由SEQ ID NO:207表示的可变重链序列和由SEQ ID NO:208表示的可变轻链序列，或者 由SEQ ID NO:493表示的重链片段序列和由SEQ ID NO:494表示的轻链序列。12.前述权利要求任一项的分离的抗体或其抗原结合片段或抗体模拟物，其中所述抗体或抗体模拟物与权利要求8-11中的抗体或抗原结合片段竞争结合。13.权利要求12的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段的氨基酸序列与表1中示出的至少一个CDR序列至少50%、55%、60%70%、80%、90或95%相同，或者与表1示出的至少一个VH或VL序列至少50%、60%、70%、80%、90%、92%或95%相同。14.权利要求12-13任一项的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段的氨基酸序列与M18-G08-G的至少一个CDR序列至少50%、55%、60%70%、80%、90或95%相同，或者与 M18-G08-G 的 VH 或 VL 序列至少 50%、60%、70%、80%、90%、92% 或 95% 相同。15.权利要求12-14任一项的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个重链CDR序列和/或至少一个轻链CDR序列，所述重链CDR序列符合共有序列 SEQ ID NO:497 或 SEQ ID NO:502 (CDR HI), SEQ ID NO:222 或 SEQ ID NO:503 (CDRH2)，或者SEQ ID NO:498或SEQ ID NO: 504 (CDR H3)，，所述轻链CDR序列符合...

【专利技术属性】
技术研发人员：F·迪特默，A·布奇穆勒，C·格德斯，A·特尔斯迪根，M·J·格诺斯，L·林登，A·哈伦加，J·格鲁德金斯卡高宝，M·杰斯科，M·沙弗尔，J·博肯费尔德，H·鲍尔森，R·芬纳恩，A·迈耶巴奇米德，A·埃克尔，S·格利文，S·斯泰尼格，
申请(专利权)人：拜耳知识产权有限责任公司，
类型：
国别省市：