提供了涉及血管生成相关疾病的预防和治疗的组合物和方法，包括表达新的人/鼠嵌合内皮因子的新敲入小鼠，制备该小鼠所使用的载体，以及包括新人/鼠转基因的鼠胚胎干细胞。还提供了抗人内皮因子单克隆抗体(mAb)，该单克隆抗体用作用于预防或治疗人肿瘤血管生成和具有过度血管化的人血管生成相关疾病的抗血管生成剂。单克隆抗体和鼠内皮因子无交叉反应。还提供了使用抗人内皮因子单克隆抗体来预防或治疗人肿瘤血管生成以及具有过度血管化的血管生成相关疾病的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗内皮因子抗体和表达新人/鼠嵌合内皮因子的敲入小鼠相关申请的交叉引用本申请要求2011年2月23日提交的美国临时申请N0.61/445，971，以及2011年2月23日提交的美国临时申请N0.61/445，970的优先权，每个申请的内容通过引用并入本文。关于联邦资助的研究或发展的声明本专利技术是在政府支持下在美国国防部乳腺癌研究计划署授予的基金BC020043的资助下进行的。政府对本专利技术具有一些权利。
本专利技术总体上涉及癌症治疗领域，更具体地，涉及用于抗癌及抗血管生成疗法的组合物和方法。
技术介绍
存在对于预防和治疗涉及不良血管生成的疾病的组合物和方法的持续需要。血管生成部分与内皮因子(Endoglin)在内皮细胞上的表达有关。内皮因子内皮因子是同源二聚体肿瘤相关的细胞膜抗原，分子大小为160千道尔顿(KD)或170KD,主要表达在白血病细胞和内皮细胞上(Haruta和Seon, 1986, Proc.Natl.Acad.Sc1.USA83:7898-7902 ；Gougos 和 Letarte，1988，J.1mmunol.141:1925-1933 ；Seon 等，1997，Clin.Cancer Res.3:1031-1044)。内皮细胞上的内皮因子表达在肿瘤相关的血管内皮和淋巴管内皮的内皮细胞的增殖中上调(Seon等,Supra ；Burrows等，1995, Clin.CancerRes.1:1623-1634 ;Matsuno 等，1999, Clin Cancer Res.5:371-382 ;Clasper 等，2008,68:7293-7303)。内皮因子对于血管生成/血管生长是必不可少的(Li等，1999，Science284:1534-1537 ；Arthur 等，2000，Dev.Biol.217:42-53)，且是 TGF- ^ 的共受体(Cheifetz 等，1992，J.Biol.Chem.267:19027-19030)。鼠内皮因子的特征在于，是分子大小约为180千道尔顿(KD)的二聚体。人内皮因子以两种形式存在；即，较小的160KD的形式，较大的170KD的形式，二者的区别被发现存在于蛋白质的细胞质部分。内皮因子具有胞外区，疏水跨膜区以及胞质尾区。人内皮因子的核苷酸序列与鼠内皮因子的核苷酸系列的比较显不出约71% -72%的同一丨丨生(St.Jacques等，1994，Endocrinol.134:2645-2657 ；Ge 和 Butcher, 1994，Genel58:2645-2657)。然而，在编码内皮因子的跨膜区和胞质区的人和鼠序列中，同一性为93%-95%。因此，在编码抗体在细胞表面被定向的胞外区的人和鼠序列中，同一性明显少于70%。尽管在人和鼠内皮因子间的氨基酸序列看起来基本类似，但是观察到的胞外区的氨基酸序列差异应该足以生成人内皮因子或鼠内皮因子独有的截然不同的抗原表位。这是因为，在肽表位中，包括表位的氨基酸序列或侧翼氨基酸序列的甚至一个微小的变化都可以显著影响表位的免疫原性(参见例如，Vi jayakrishnan 等，1997, J.1mmunol.159:1809-1819)。例如，肽中的单个氨基酸取代可以引起肽的免疫原性的显著变化(Vijayakrishnan等，1997，同上)。因为单克隆抗体限定良好的特异性，所以肽表位的这些变化强烈影响了单克隆抗体的特异性。内皮因子的单克隆抗体(mAb)SN6是产生自具有人白血病细胞的细胞膜的糖蛋白混合物的肿瘤相关组分的小鼠的免疫的抗体(Haruta 和 Seon, 1986，Proc.Natl.Acad.Sc1.83:7898-7902)。鼠 mAb 识别人内皮因子。单克隆抗体44G4是产生自具有人前B型白血病细胞的整个细胞悬液的小鼠的免疫的抗体(Gougos 和 Letarte, 1988，J.Tmmuno1.141:1925-1933 ; 1990, J.Biol.Chern.265:8361-8364)。鼠单克隆抗体识别人内皮因子。单克隆抗体MJ7/18是产生自皮肤发炎的大鼠的免疫的抗体(Ge和Butcher，1994，同上)。单克隆抗体识别鼠内皮因子。单克隆抗体Tec-1l是产生自具有人脐静脉内皮细胞的小鼠的免疫的抗体(Buirows等，1995，Clin.Cancer Res.1:1623-1634)。鼠单克隆抗体对人内皮因子具有受限反应。通过使用抗内皮因子抗体和各种染色步骤已经确定，内皮因子在如来自人白血病(包括非T细胞型(非T)急性淋巴细胞性白血病(ALL)、骨髓单核细胞性白血病)的人肿瘤细胞上在中等水平上被表达。此外，还确定了内皮因子在来自人实体瘤的肿瘤相关的脉管系统以及来自胎盘的人脉管系统中含有的内皮细胞中在中等到高等水平上被表达，人实体瘤包括血管肉瘤、乳腺癌、盲肠癌、结肠癌、霍奇金淋巴瘤、淋巴瘤、肺癌、黑色素瘤、骨肉瘤、卵巢癌、腮腺肿瘤、咽癌、直肠乙状结肠癌。在取自脾、胸腺、肾、肺和肝的不同的正常的成人组织切片中观察到对于内皮因子的较低程度(弱)的内皮细胞染色。在涉及血管生成的病理学条件下也报导了在血管内皮细胞上的提高了的内皮因子表达。这类血管生成相关疾病包括大部分类型的人实体瘤、类风湿性关节炎、胃溃疡以及慢性炎性皮肤损伤(例如 牛皮癣、皮炎；ffestphal等，1993, J.1nvest.Dermatol.100:27-34)血管牛成血管生成包括引起新生血管形成的新毛细血管的形成。血管生成是个复杂的过程，涉及一系列连续的步骤，包括血管基膜和间质基质的内皮细胞介导的降解、内皮细胞的迁移、内皮细胞的增殖，以及由内皮细胞形成毛细血管袢。实体瘤依赖于血管生成，即，当小实体瘤到达临界直径时，为进一步增长，需要在周围的正常组织中引起血管生成响应。肿瘤因而发生的新生血管形成与更快速的增长以及局部入侵相关联。此外，血管生成的增加也与增加的转移风险相关联。因此，抑制肿瘤血管生成的抗血管生成疗法将会抑制或遏制肿瘤的生长和扩散。在正常的生理性过程(例如伤口愈合)中，一旦此过程结束，血管生成即完成。相反，肿瘤血管生成并不是自限性的。进一步地，在某些病理性(和非恶性)过程中，血管生成被异常地延长。这些血管生成相关疾病包括糖尿病性视网膜病，慢性炎性疾病(包括类风湿性关节炎、皮炎和牛皮癣)。_7] 人实体瘤的抗血管生成疗法和血管靶向疗法实体瘤超过临床隐匿大小(例如，几立方毫米)的渐进性增长需要新血管的不断形成，这一过程被称为肿瘤血管生成。肿瘤的生长和转移依赖于血管生成。肿瘤必须不断刺激新毛细血管的生长以将营养和氧输送到肿瘤自身以生长。因此，防止肿瘤血管生成(抗血管生成疗法)或选择性破坏现有肿瘤血管(血管靶向疗法)都提供了预防或治疗实体瘤的策略。由于新毛细血管的局部网络为原发肿瘤转移到人体其他部位提供了路径，抗血管生成疗法应该对于预防小实体瘤的形成或转移具有重要的意义(参见例如，Folkman,1995,Nature Medicine, 1:27-31)。另一方面,攻击已存在的脉管系统的血管祀向疗法可能对于脉管系统已受损的较大的肿瘤最有效(参见例如，Bicknell和Harris, 1992本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离的抗体或所述抗体的片段，其中所述抗体或所述抗体的片段与人内皮因子氨基酸天冬酰胺121和氨基酸丙氨酸378之间的人内皮因子的区域特异性结合，其中所述抗体和鼠内皮因子不可交叉反应。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.02.23 US 61/445,970;2011.02.23 US 61/445,9711.一种分离的抗体或所述抗体的片段，其中所述抗体或所述抗体的片段与人内皮因子氨基酸天冬酰胺121和氨基酸丙氨酸378之间的人内皮因子的区域特异性结合，其中所述抗体和鼠内皮因子不可交叉反应。2.根据权利要求1所述的抗体的片段，其中所述片段选自由Fab、Fab’、(Fab’)2、Fv、单链(ScFv)和其组合构成的组。3.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体为嵌合抗体或人源化抗体。4.根据权利要求3所述的抗体，其中所述抗体为人源化抗体，所述人源化抗体包括鼠超变区，该鼠超变区对于人内皮因子氨基酸天冬酰胺121和氨基酸丙氨酸378之间的人内皮因子的所述区域具有内皮因子结合特异性，以及人免疫球蛋白的恒定区序列和可变区序列。5.根据权利要求3所述的抗体，其中所述抗体为嵌合抗体，所述嵌合抗体包括鼠可变区，所述鼠可变区对于人内皮因子氨基酸天冬酰胺121和氨基酸丙氨酸378之间的人内皮因子的所述区...
【专利技术属性】
技术研发人员：本·K·善，土肥博文，
申请(专利权)人：健康研究公司，
类型：
国别省市：
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