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一种对蛋白质进行分离富集亲的方法技术

技术编号:9736585 阅读:172 留言:0更新日期:2014-03-06 05:01
本发明专利技术公开了一种对蛋白质进行分离富集亲的方法,其特征在于,首先让样品经过首次凝集素亲和层析,然后进行酶解,再把样品进行第二次凝集素亲和层析,最后再利用HPLC分离,进入质谱进行测序。使用的凝集素有伴刀豆凝集素A、麦芽凝集素、菜豆凝集素等;处理后的样品用毛细管液相色谱-ESI-MASS或毛细管液相色谱-MADLI-TOF-MASS对糖肽进行分析和数据库检索。本发明专利技术的有益效果是,可以一次收集不同类别的糖类,标记后的多肽可以通过亲合的方法富集,而且通过采用同位素标记的试剂有望实现定量和比较分析。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种生化的实验方法,具体来说,。
技术介绍
当前,采用基因工程方式生产的蛋白质类药物由于其在治疗肿瘤和免疫疾病方面的广泛应用,越来越受到研究者们的关注。对于蛋白质类药物本身而言,其重要功能的实现不仅取决于其蛋白质的序列和空间结构,也在于蛋白翻译后修饰等因素,其中糖基化修饰就是翻译后修饰中最主要的修饰方式之一。对蛋白质糖基化的检测分析也是衡量蛋白质类药物的一项重要指标。蛋白质的糖基化分析主要包括以下几个方面:糖基化是否发生;在哪里发生了糖基化;糖基化的类型是什么;糖链中各种糖的种类和含量;糖链的一级结构等等。至今,仍无一种可以完全解决以上所有问题的好方法。在糖链结构解析方面应用最广泛的是质谱技术和核磁共振技术,各种技术各有利弊,因此在应用中经常可以互补。
技术实现思路
为克服上述技术问题,我们提出了以下技术方案:,首先让样品经过首次凝集素亲和层析,然后进行酶解,再把样品进行第二次凝集素亲和层析,最后再利用HPLC分离,进入质谱进行测序。本专利技术中,使用的凝集素有伴刀豆凝集素A、麦芽凝集素、菜豆凝集素等。本专利技术中,处理后的样品用毛细管液相色谱-ES1-MASS或毛细管液相色谱-MADL1-T0F-MASS对糖肽进行分析和数据库检索。本专利技术的有益效果是,可以一次收集不同类别的糖类,标记后的多肽可以通过亲合的方法富集,而且通过采用同位素标记的试剂有望实现定量和比 较分析。【具体实施方式】首先让样品经过首次凝集素亲和层析,然后进行酶解,再把样品进行第二次凝集素亲和层析,最后再利用HPLC分离,进入质谱进行测序。使用的凝集素有伴刀豆凝集素A、麦芽凝集素、菜豆凝集素等;处理后的样品用毛细管液相色谱-ES1-MASS或毛细管液相色谱-MADL1-T0F-MASS对糖肽进行分析和数据库检索。以上所述,仅为本专利技术较佳的【具体实施方式】,但本专利技术的保护范围并不局限于此,任何熟悉本
的技术人员在本专利技术披露的技术范围内,根据本专利技术的技术方案及其专利技术构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种对蛋白质进行分离富集亲的方法,其特征在于,首先让样品经过首次凝集素亲和层析,然后进行酶解,再把样品进行第二次凝集素亲和层析,最后再利用?HPLC分离,进入质谱进行测序。

【技术特征摘要】
1.一种对蛋白质进行分离富集亲的方法,其特征在于,首先让样品经过首次凝集素亲和层析,然后进行酶解,再把样品进行第二次凝集素亲和层析,最后再利用HPLC分离,进入质谱进行测序。2.如权利要求1所述的一种对蛋白质进行分离富集亲的方法,其特征在于,使...

【专利技术属性】
技术研发人员:刘军
申请(专利权)人:刘军
类型:发明
国别省市:

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