【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种分离提纯的方法，具体来说，是指。
技术介绍
颗粒细胞是卵泡内最大的细胞群，与卵泡膜细胞协同调控女性甾体激素的合成，也直接参与了卵母细胞的生长、发育和成熟等生殖事件。因此，颗粒细胞可作为研究女性生殖细胞生物学行为及其功能调控的良好细胞模型。当今人工辅助生殖技术得到广泛应用，操作过程废弃的卵泡液中含有大量的颗粒细胞，收集这类颗粒细胞行体外培养实验，可为了解颗粒 细胞的某些细胞活动提供参考资料。文献报道的颗粒细胞体外分离培养方法已较成熟，但 分离提纯后颗粒细胞的存活率仅在57.69T75.0%。本实验从细胞分离、纯化的多个环节用两种不同的方法进行比较，旨在建立一个更高效省时的颗粒细胞分离提纯方案。
技术实现思路
为克服上述技术问题，我们提出了以下技术方案: ，将细胞沉淀物上层的白色黏液团收集至另一离心管，P B S洗涤I次后加入等体积的3 0 0 IU/ml透明质酸酶，吹打混匀，室温消化f 2min,再用2倍体积含FBS的DMEM/F12培养液终止消化；余下细胞沉淀物加入3倍体积的红细胞裂解液，颠倒混匀，冰上静置15 min后，400 Xg离心5 min,弃上清液，沉淀物中加入5倍体积的PBS，洗涤2次后用等体积的DMEM/F12培养液重悬细胞；将2部分细胞悬液合并混匀，小心移至等体积50% Percoll分离液的表面，500 Xg离心20 min。离心后颗粒细胞位于上层培养液与下层Per coll分离液的界面处；用移液管小心吸取界面层颗粒细胞，加入5倍体积的PBS, 150 X g离心3 min后弃上清；加入等体积胰酶，轻轻吹打...
【技术保护点】
一种卵巢颗粒细胞分离提纯的方法，其特征在于，将细胞沉淀物上层的白色黏液团收集至另一离心管,?P?B?S洗涤1次后加入等体积的3?0?0?IU/ml透明质酸酶,吹打混匀,室温消化1~2?min,再用2倍体积含FBS的DMEM/F12培养液终止消化；余下细胞沉淀物加入?3倍体积的红细胞裂解液,颠倒混匀,冰上静置15?min后,?400?×g离心5?min,弃上清液,沉淀物中加入5倍体积的PBS,洗涤2次后用等体积的DMEM/F12培养液重悬细胞；将2部分细胞悬液合并混匀,小心移至等体积50%?Percoll分离液的表面,?500?×g离心20?min；离心后颗粒细胞位于上层培养液与下层Per?coll分离液的界面处；用移液管小心吸取界面层颗粒细胞,加入5倍体积的PBS,?150?×g离心3?min后弃上清；加入等体积胰酶,轻轻吹打混匀,室温消化1?min以获取单细胞悬液,用2倍体积含FBS的DMEM/F12培养液终止消化；再次用PBS洗涤细胞,去除细胞表面附着的Percoll分离液和EDTA；用含体积分数10%FBS的DMEM/F12培养液重悬细胞。
【技术特征摘要】
1.一种卵巢颗粒细胞分离提纯的方法，其特征在于，将细胞沉淀物上层的白色黏液团收集至另一离心管，P B S洗涤I次后加入等体积的3 O O IU/ml透明质酸酶，吹打混匀，室温消化广2 min,再用2倍体积含FBS的DMEM/F12培养液终止消化；余下细胞沉淀物加入3倍体积的红细胞裂解液，颠倒混匀，冰上静置15 min后，400 Xg离心5 min,弃上清液，沉淀物中加入5倍体积的PBS，洗涤2次后用等体积的DMEM/F12培养液重悬细胞；将2部分细胞悬液合并混匀，小心移至等体积50% Percoll分离液的表面，500 Xg离心20 min ;离心后颗粒细胞位于上层培养液与下层Per coll分离液的界面处；用移液管小心吸取界面层颗粒细胞，加入5...
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