艰难梭菌抗原制造技术

本发明专利技术提供了用于在脊椎动物受试者中治疗或预防艰难梭菌(Clostridium?difficile)感染的组合物和方法。所述方法用于向所述脊椎动物受试者施用有效减少或消除或预防艰难梭菌细菌感染的复发和/或诱导针对该蛋白的免疫应答的量的组合物。还提供了在脊椎动物中治疗或预防艰难梭菌感染的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】艰难梭菌抗原
本专利技术涉及用于在脊椎动物受试者中治疗或预防革兰氏阳性细菌艰难梭菌(Clostridium difficile)的感染的组合物和方法。提供了以有效减少、消除或预防感染复发的量向所述脊椎动物受试者施用蛋白质的方法。提供了在生物体中治疗或预防艰难梭菌感染的方法。
技术介绍
艰难梭菌是一种人类肠道共生革兰氏阳性细菌，以2-5%的种群量存在。艰难梭菌具有二态生活周期，能够作为休眠但仍有传染性的芽孢和作为代谢活性的产毒素营养细胞存在。肠道中少量艰难梭菌的存在是无症状的；然而，细菌过度生长能够引起严重的和危及生命的疾病，特别是在老年人中。当正常肠道菌群被抗生素治疗消灭时，可能发生艰难梭菌的过度生长。因此，艰难梭菌是抗生素相关腹泻的主要原因，并且能够引起假膜性结肠炎(广泛的结肠炎症)。病原性艰难梭菌菌株产生几种已知毒素。两种这样的毒素，即肠毒素(毒素A)和细胞毒素(毒素B)，造成在感染的患者中观察到的腹泻和炎症。住院或留居在疗养院中增加了艰难梭菌感染的风险。据估计，在住院最多2周的患者中染得艰难梭菌的比率为13%，在住院超过4周的患者中为50%。因此，艰难梭菌是常见的医源性病原体，并且在全世界是住院患者发病和死亡的主因。由于艰难梭菌这种生物体形成耐热芽孢，艰难梭菌能够在医院或疗养院环境中长时间残留。一旦芽孢被摄入，由于它们的耐酸性，它们能够存活地通过胃。一旦进入结肠，芽孢可以在暴露于胆汁酸后萌发成营养细胞。艰难梭菌感染在最初治疗后的复发是常见问题，因为在25%的进行过首次感染发作治疗的患者中发生疾病的复发。这主要是由于该生物体能够作为芽孢保持在休眠且耐抗生素的状态中这一事实。当前用于治疗艰难梭菌感染的疗法针对生物体生活周期的营养阶段。这些治疗包括抗生素例如万古霉素或甲硝哒唑。氟喹诺酮类抗生素例如环丙沙星和左氧氟沙星的使用不幸地导致新的高毒力的且耐抗生素的艰难梭菌菌株的出现。其他的特别是用于预防复发的治疗包括预防性途径，例如使用益生菌以利用非致病生物体例如嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)或布拉氏酵母菌(Saccharomyces boulardii)恢复肠道菌群。通过鉴定影响代谢功能或必需毒力因子的突变，已开发出基于鼠伤寒菌(Typhimurium)的活疫苗。Clin.Microbiol.Rev.5 (1992) 328-342。到目前为止，在疫苗方面的尝试集中于A和B毒素以及营养细胞表面蛋白(SLPA)，它们都是由代谢活性细菌产生的蛋白质。因此，所有当前疗法解决由营养阶段细菌造成的原发感染，而不针对由休眠但仍有感染性的芽孢引起的复发。有鉴于可能出现由毒性越来越高且耐药的艰难梭菌菌株引起的传染病，对于在靶向艰难梭菌生活周期的顽固芽孢期的基础上的用于治疗或预防与所述生物体相关的疾病的发生及其复发的有效疫苗组合物或抗体治疗仍存在未满足的需求。专利技术概沭本文描述了用于在脊椎动物受试者中治疗或预防艰难梭菌感染的组合物和方法。在第一方面，本专利技术提供了含有结合艰难梭菌芽孢多肽或片段的抗体或片段的组合物，其中所述芽孢多肽或片段可以是BclAl、BclA2、BclA3、Alr、SlpA旁系同源物、SlpAHMW、CD1021、IunH、Fe-Mn-SOD 或 FliD。在第二方面，本专利技术提供了含有结合艰难梭菌芽孢多肽或片段的抗体或片段的组合物，其中所述芽孢多肽或片段可以具有与SEQID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9 或 SEQ IDNO:10中所示的氨基酸序列至少80-95%同一的氨基酸序列。在第三方面，本专利技术提供了结合艰难梭菌芽孢多肽或片段的分离的抗体或片段，其中所述多肽或片段可以是BclAl、BclA2、BclA3、Alr、SlpA旁系同源物、SlpA HMW、CD1021、IunH、Fe-Mn-SOD 或 FliD。在第四方面，本专利技术提供了结合艰难梭菌芽孢多肽或片段的抗体或片段，其中所述多肽或片段可以具有与 SEQ ID NO:USEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ IDNO:5, SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID NO:9 或 SEQ ID NO:10 中所示的氨基酸序列至少80-95%同一的氨基酸序列。在所述前四个方面 的各种实施方式中，所述抗体或片段可以是多克隆抗体、单克隆抗体、人抗体、完整免疫球蛋白分子、scFv、嵌合抗体、Fab片段、F(ab’ )2或二硫键连接的Fv0在所述前四个方面的其他实施方式中，所述抗体或片段可以具有重链免疫球蛋白恒定结构域，其可以是人IgM恒定结构域、人IgGl恒定结构域、人IgG2恒定结构域、人IgG3恒定结构域、人IgG4恒定结构域或人IgAl/2恒定结构域。在所述前四个方面的其他实施方式中，所述抗体或片段可以具有轻链免疫球蛋白恒定结构域，其可以是人IgK恒定结构域或人IgX恒定结构域。在所述前四个方面的再进一步的实施方式中，所述抗体或片段可以以至少I X IO9M或至少I X IO10M的亲和常数(Kaff)结合抗原。在所述前四个方面的其他实施方式中，所述抗体或其片段可以抑制或延迟芽孢萌发。在所述第一和第二方面的某些实施方式中，所述组合物也可以含有结合艰难梭菌毒素A、毒素B的抗体或结合毒素A和毒素B的抗体的组合。在所述第一和第二方面的其他实施方式中，所述组合物还可以含有抗生素例如甲硝哒唑或万古霉素。所述前四个方面的组合物可以通过向需要这样的治疗的患者施用有效减少或预防与艰难梭菌相关疾病的量的组合物而使用在治疗所述疾病的方法中，所述量可以是I至100毫克每千克受试者体重的范围内的量。所述组合物可以静脉内(IV)、皮下(SC)、肌肉内(IM)或口服施用。在前四个方面的其他实施方式中，所述组合物可通过向动物施用有效量的所述组合物而用于被动免疫的方法中。在第五方面，本专利技术提供了通过以在受试者中有效诱导免疫应答的量向所述受试者施用一定量的艰难梭菌芽孢多肽或片段或变体和药学上可接受的佐剂在所述受试者中诱导免疫应答的方法，所述芽孢多肽或片段或变体可以是BclAl、BclA2、BclA3、Air、SlpA旁系同源物、SlpA HMW、CD1021、IunH、Fe-Mn-SOD 或 FliD。在第六方面，本专利技术提供了通过以在受试者中有效诱导免疫应答的量向所述受试者施用艰难梭菌芽孢多肽或片段或变体和药学上可接受的佐剂在所述受试者中诱导免疫应答的方法，所述芽孢多肽或片段或变体可以具有与SEQ ID N0:U SEQ ID NO:2、SEQ IDN0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列至少80-95%同一的氨基酸序列。在第七方面，本专利技术提供了难过以在需要治疗的受试者中有效减少或预防感染的量向所述受试者施用一定量的艰难梭菌芽孢多肽或本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，其包含结合艰难梭菌(C.difficile)芽孢多肽或其片段的抗体或其片段，其中所述多肽或其片段选自BclA1、BclA2、BclA3、Alr、SlpA旁系同源物、SlpA?HMW、CD1021、IunH、Fe?Mn?SOD和FliD。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.12.29 US 61/427,9971.一种组合物，其包含结合艰难梭菌(C.difficile)芽孢多肽或其片段的抗体或其片段，其中所述多肽或其片段选自BclAl、BclA2、BclA3、Air、SlpA旁系同源物、SlpA HMW,CD1021、IunH、Fe-Mn-SOD 和 FliD02.一种组合物，其包含结合艰难梭菌芽孢多肽或其片段的抗体或其片段，其中所述多肽或其片段包含与 SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9 或 SEQ ID NO:10 中所示的氨基酸序列至少80-95%同一的氨基酸序列。3.一种分离的抗体或其片段，其结合艰难梭菌芽孢多肽或其片段，其中所述多肽或其片段选自 BclAl、BclA2、BclA3、Air、SlpA 旁系同源物、SlpA HMW、CD1021、IunH, Fe-Mn-SOD和 FliD04.一种抗体或其片段，其结合艰难梭菌芽孢多肽或其片段，其中所述多肽或其片段包含与 SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9 或 SEQ ID NO:10 中所示的氨基酸序列至少80-95%同一的氨基酸序列。5.权利要求1-4任一项的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段是多克隆抗体。6.权利要求1-4任一项的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段是单克隆抗体。7.权利要求1-4任一项的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段是人抗体。8.权利要求1-4任一项的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段选自:(a)完整免疫球蛋白分子;(b) scFv ； (c)嵌`合抗体；(d)Fab片段；(e)F(ab’ )2 ;和(f) 二硫键连接的Fv。9.权利要求1-4任一项的抗体或其片段，其包含选自下列的重链免疫球蛋白恒定结构域:(a)人IgM恒定结构域；(b)人IgGl恒定结构域；(c)人IgG2恒定结构域；(d)人IgG3恒定结构域；(e)人IgG4恒定结构域；和(f)人IgAl/2恒定结构域。10.权利要求1-4任一项的抗体或其片段，其包含选自下列的轻链免疫球蛋白恒定结构域:(a)人IgK恒定结构域；和(b)人Ig λ恒定结构域。11.权利要求1-4任一项的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段以至少IX IO9M的亲和常数(Kaff)与抗原结合。12.权利要求1-4任一项的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段以至少IX IOkiM的亲和常数(Kaff)与抗原结合。13.权利要求1-2任一项的组合物，其还包含选自结合艰难梭菌毒素Α、毒素B的抗体及结合毒素A和毒素B的抗体组合的成员。14.权利要求1-2任一项的组合物，其还包含抗生素。15.权利要求14的组合物，其中所述抗生素是甲硝哒唑或万古霉素。16.一种治疗艰难梭菌相关疾病的方法，所述方法包括向需要的受试者施用有效减轻或预防所述疾病的量的权利要求1-2任一项的组合物。17.一种治疗艰难梭菌相关疾病的方法，所述方法包括向需要的受试者施用有效减轻或预防所述疾病的量的权利要求3-4任一项的组合物。18.一种治疗艰难梭菌相关疾病的方法，所述方法包括向需要的受试者施用有效减轻或预防所述疾病的量的权利要求13的组合物。19.权利要求16的方法，其中所述组合物静脉内(IV)、皮下(SC)、肌肉内(IM)或口服施用。20.权利要求17的方法，其中所述组合物静脉内(IV)、皮下(SC)、肌肉内(IM)或口服施用。21.权利要求18的方法，其中所述组合物静脉内(IV)、皮下(SC)、肌肉内(IM)或口服施用。22.权利要求16的方法，其中所述组合物以I至100毫克每千克受试者体重的范围的量施用。23.权利要求17的方法，其中所述组合物以I至100毫克每千克受试者体重的范围的量施用。24.权利要求18的方法，其中所述组合物以I至100毫克每千克受试者体重的范围的量施用。25.一种被动免疫方法，所述方法包括向动物施用有效量的权利要求1-2任一项的组合物。26.一种被动免疫方法，所述方法包括向动物施用有效量的权利要求3-4任一项的抗体或其片段。27.一种在受试者 中诱导免疫应答的方法，所述方法包括以在所述受试者中有效诱导免疫应答的量向所述受试者给药艰难梭菌芽孢多肽或其片段或变体和药学上可接受的佐剂，所述多肽或片段或变体选自BclAl、BclA2、BclA3、Air、SlpA旁系同源物、SlpA HMW,CD1021、IunH, Fe-Mn-SOD 和 FliD028.一种在受试者中诱导免疫应答的方法，所述方法包括以在所述受试者中有效诱导免疫应答的量向所述受试者施用艰难梭菌芽孢多肽或其片段或变体和药学上可接受的佐剂，所述多肽或片段或变体包含与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9 或 SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列至少80-95%同一的氨基酸序列。29.一种在需要的受试者中减少或预防艰难梭菌感染的方法，所述方法包括以在所述受试者中有效减少或预防感染的量向所述受试者施用艰难梭菌芽孢多肽或其片段或变体和药学上可接受的佐剂，所述多肽或片段或变体选自BclAl、BclA2、BclA3、Alr、SlpA旁系同源物、SlpA HMW、CD1021、IunH、Fe-Mn-SOD 和 FliD。30.一种在需要的受试者中减少或预防艰难梭菌感染的方法，所述方法包括以在所述受试者中有效减少或预防感染的量向所述受试者施用艰难梭菌芽孢多肽或其片段或变体和药学上可接受的佐剂，所述多肽或片段或变体包含与SEQ ID NO=USEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3, SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列至少80-95%同一的氨基酸序列。31.权利要求27-30任一项的方法，其中所述药学上可接受的佐剂是白介素12或热休克蛋白。32.权利要求27-30任一项的方法，其中所述施用是口服、鼻内、静脉内或肌肉内施用。33.权利要求27-30任一项的方法，其中所述变体是突变体。34.权利要求27-30任一项的方法，其中所述变体是融合蛋白。35.权利要求34的方法，其中所述融合蛋白包含艰难梭菌毒素A或B的序列。36.权利要求35的方法，其中所述艰难梭菌毒素A或B的序列选自TcdB的N-末端催化结构域、TcdB的C-末端片段4和TcdA的C-末端受体结合片段。37.权利要求34的方法，其中所述融合蛋白是BClAl、BclA2、BclA3、Alr、SlpA旁系同源物、SlpA HMW、CD1021、IunH、Fe-Mn-SOD和FliD及其片段组成的组中的成员，或SEQ IDNO: 1、SEQ ID ...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·贝里，D·约翰斯通，B·泰伊，M·洛佩斯，J·乔治，韩笑冰，
申请(专利权)人：卡恩基因公司，
类型：
国别省市：