一种检测待测制种农户制备的棉花杂交种中是否有自交种的方法技术

技术编号:9701724 阅读:164 留言:0更新日期:2014-02-21 22:35
本发明专利技术公开了一种检测待测制种农户制备的棉花杂交种中是否有自交种的方法。本发明专利技术提供的方法,包括如下步骤:(1)从制种农户的制种棉田里的随机抽取待测棉铃;(2)随机抽取步骤(1)得到的棉铃中的棉籽;(3)分别提取步骤(2)得到的棉籽的种皮的基因组DNA和种仁的基因组DNA;(4)分别以步骤(3)得到的种皮的基因组DNA和种仁的基因组DNA为模板,采用SSR引物对进行鉴定,得到种皮指纹图谱和种仁指纹图谱;如果某一待测棉铃中,抽样检测的所有棉籽的种仁指纹图谱均与种皮指纹图谱一致,该棉铃为自交铃。本发明专利技术具有很大的实用价值和推广价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。
技术介绍
农业上,杂交种通常具有丰产、优质、抗逆性强的优点,已得到广泛的应用。杂交棉品种产量高,受到广大棉农的认可。由于存在剥大花、自交铃等问题,杂交种的纯度较难保证。近年来,由于农村劳动力的转移,棉花制种用工越来越紧缺,用工价格也越来越高,在这个大背景下,杂交棉制种的质量越来越差。一般来说,制种公司只能在种子收获后抽样去海南加代检测纯度(田间检测),存在检测时间长、异地种植受环境条件影响大等问题,效果不是很理想。近年来,有制种公司采用SSR标记来检测种子纯度,与田间检测相比,缩短了检测时间,并且避免了异地种植环境对植株表型的影响。种子公司都是由大量制种农户供种,所以制种公司先要以农户为单位收集大量种子然后赶在播种期前完成检测和销售,存着工作量大、批次多、时间紧的现状。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供。本专利技术提供了,包括如下步骤:( I)从制种农户的制种棉`田里的随机抽取待测棉铃;(2)随机抽取步骤(1)得到的棉铃中的棉籽;(3)分别提取步骤(2)得到的棉籽的种皮的基因组DNA和种仁的基因组DNA ;(4)分别以步骤(3)得到的种皮的基因组DNA和种仁的基因组DNA为模板,采用SSR引物对进行鉴定,得到种皮指纹图谱和种仁指纹图谱;如果某一待测棉铃中,抽样检测的所有棉籽的种仁指纹图谱均与种皮指纹图谱一致,该棉铃为自交铃。所述SSR引物对为CS62引物对、NAU1085引物对、NAUl 102引物对、NAU1255引物对、NAU2274引物对、NAUl 103引物对、NAU2026引物对、NAU2277引物对、NAUl 186引物对和NAUl233引物对中的至少一个;所述CS62引物对由序列表的序列I所示的单链DNA分子和序列表的序列2所示的单链DNA分子组成;所述NAU1085引物对由序列表的序列3所示的单链DNA分子和序列表的序列4所示的单链DNA分子组成;所述NAU1102引物对由序列表的序列5所示的单链DNA分子和序列表的序列6所示的单链DNA分子组成;所述NAU1255引物对由序列表的序列7所示的单链DNA分子和序列表的序列8所示的单链DNA分子组成;所述NAU2274引物对由序列表的序列9所不的单链DNA分子和序列表的序列10所不的单链DNA分子组成;所述嫩仍103引物对由序列表的序列11所示的单链DNA分子和序列表的序列12所示的单链DNA分子组成;所述NAU2026引物对由序列表的序列13所示的单链DNA分子和序列表的序列14所示的单链DNA分子组成;所述NAU2277引物对由序列表的序列15所示的单链DNA分子和序列表的序列16所示的单链DNA分子组成;所述NAUl 186引物对由序列表的序列17所不的单链DNA分子和序列表的序列18所不的单链DNA分子组成;所述NAU1233引物对由序列表的序列19所不的单链DNA分子和序列表的序列20所不的单链DNA分子组成。所述棉花杂交种为鄂杂棉10号或瑞杂816。本专利技术还保护一种检测待测制种农户制备的棉花杂交种含有自交种的百分率的方法,包括如下步骤:(I)从制种农户的制种棉田里的随机抽取待测棉铃;(2)随机抽取步骤(1)得到的棉铃中的棉籽;(3)分别提取步骤(2)得到的棉籽的种皮的基因组DNA和种仁的基因组DNA ;(4)分别以步骤(3)得到的种皮的基因组DNA和种仁的基因组DNA为模板,采用SSR引物对进行鉴定,得到种皮指纹图谱和种仁指纹图谱;如果某一待测棉铃中,抽样检测的所有棉籽的种仁指纹图谱均与种皮指纹图谱一致,该棉铃为自交铃;待测制种农户制备的棉花杂交种含有自交种的百分率=自交铃数量/待测棉铃总数量X 100%。所述SSR引物对为CS62引物对、NAU1085引物对、NAUl 102引物对、NAU1255引物对、NAU2274引物对、NAUl 103引物对、NAU2026引物对、NAU2277引物对、NAUl 186引物对和NAUl233引物对中的至少一个;所述CS62引物对由序列表的序列I所示的单链DNA分子和序列表的序列2所示的单链DNA分子组成;所述NAU1085引物对由序列表的序列3所示的单链DNA分子和序列表的序列4所示的单链DNA分子组成;所述NAU1102引物对由序列表的序列5所示的单链DNA分子和序列表的序列6所示的单链DNA分子组成;所述NAU1255引物对由序列表的序列7所示的单链DNA分子和序列表的序列8所示的单链DNA分子组成;所述NAU2274弓丨物对由序列表的序列9所不的单链DNA分子和序列表的序列10所不的单链DNA分子组成;所述嫩仍103引物对由序列表的序列11所示的单链DNA分子和序列表的序列12所示的单链DNA分子组成;所述NAU2026引物对由序列表的序列13所示的单链DNA分子和序列表的序列14所示的单链DNA分子组成;所述NAU2277引物对由序列表的序列15所示的单链DNA分子和序列表的序列16所示的单链DNA分子组成;所述NAUl 186引物对由序列表的序列17所不的单链DNA分子和序列表的序列18所不的单链DNA分子组成;所述NAU1233引物对由序列表的序列19所不的单链DNA分子和序列表的序列20所不的单链DNA分子组成。所述棉花杂交种为鄂杂棉10号或瑞杂816。本专利技术还保护以上任一所述方法在鉴定杂交棉纯度中的应用。本专利技术还保护一种引物组,由所述CS62引物对、所述NAU1085引物对、所述NAUl 102引物对、所述NAU1255引物对、所述NAU2274引物对、所述NAUl 103引物对、所述NAU2026引物对、所述NAU2277弓丨物对、所述NAU1186引物对和所述NAU1233引物对中的至少一个引物对组成。本专利技术还保护所述引物组在如下(a)或(b)中的应用:(a)检测待测制种农户制备的棉花杂交种中是否有自交种的方法;(b)检测待测制种农户制备的棉花杂交种含有自交种的百分率。所述棉花杂交种为鄂杂棉10号或瑞杂816。杂交种的制备过程中,将母本去雄后授予父本的花粉,长出的棉铃中含有棉籽,棉籽的种皮(由胚珠的珠被发育来)应为母本的指纹图谱,而棉籽的种仁应为F1代的指纹图谱。如果某一棉铃中,所有棉籽的种仁(或所有抽样检测的棉籽的种仁)的指纹图谱与母本的指纹图谱一致,说明此棉铃为自交铃。如果某一棉铃中,棉籽的种仁有的为母本的指纹图谱,有的为F1代的指纹图谱,说明此棉铃为剥大花所制的棉铃,在剥花之前已部分授粉。如果某一棉铃中,棉籽的种仁均为F1代的指纹图谱,说明此棉铃为目的杂交种。由于本专利技术提供的方法与现有方法相比具有如下优点:(I)可以提前1-2个月时间,为种子的销售赢得时间;(2)对检测不合格的农户提前淘汰,省去加工和运输的费用;(3)棉铃壳厚,不易散失水分,比叶片好保存,异地取样也不会氧化变质,可以在棉花制种后期到制种农户田间随机取棉铃,带回实验室后统一检测。本专利技术具有很大的实用价值和推广价值。【附图说明】图1为采用CS 62引物对扩增的电泳图谱。图2为采用NAU1085引物对扩增的电泳图谱。图3为采用NAU1102引物对扩增的电泳图谱。图4为采用NAU1255引物对扩增的电泳图谱。图5为采用NAU2274引物对扩增的电泳图谱。图6为采用NA本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测待测制种农户制备的棉花杂交种中是否有自交种的方法,包括如下步骤:(1)从制种农户的制种棉田里随机抽取待测棉铃;(2)随机抽取步骤(1)得到的棉铃中的棉籽;(3)分别提取步骤(2)得到的棉籽的种皮的基因组DNA和种仁的基因组DNA;(4)分别以步骤(3)得到的种皮的基因组DNA和种仁的基因组DNA为模板,采用SSR引物对进行鉴定,得到种皮指纹图谱和种仁指纹图谱;如果某一待测棉铃中,抽样检测的所有棉籽的种仁指纹图谱均与种皮指纹图谱一致,该棉铃为自交铃。

【技术特征摘要】
1.一种检测待测制种农户制备的棉花杂交种中是否有自交种的方法,包括如下步骤: (1)从制种农户的制种棉田里随机抽取待测棉铃; (2)随机抽取步骤(1)得到的棉铃中的棉籽; (3)分别提取步骤(2)得到的棉籽的种皮的基因组DNA和种仁的基因组DNA; (4)分别以步骤(3)得到的种皮的基因组DNA和种仁的基因组DNA为模板,采用SSR引物对进行鉴定,得到种皮指纹图谱和种仁指纹图谱; 如果某一待测棉铃中,抽样检测的所有棉籽的种仁指纹图谱均与种皮指纹图谱一致,该棉铃为自交铃。2.如权利要求1所述的方法,其特征在于:所述SSR引物对为CS62引物对、NAU1085引物对、NAUl 102引物对、NAU1255引物对、NAU2274引物对、NAUl 103引物对、NAU2026引物对、NAU2277引物对、NAUl 186引物对和NAU1233引物对中的至少一个;所述CS62引物对由序列表的序列I所示的单链DNA分子和序列表的序列2所示的单链DNA分子组成;所述NAU1085引物对由序列表的序列3所示的单链DNA分子和序列表的序列4所示的单链DNA分子组成;所述NAU1102引物对由序列表的序列5所示的单链DNA分子和序列表的序列6所示的单链DNA分子组成;所述NAU1255引物对由序列表的序列7所示的单链DNA分子和序列表的序列8所示的单链DNA分子组成;所述NAU2274引物对由序列表的序列9所示的单链DNA分子和序列表的序列10所示的单链DNA分子组成;所述嫩仍103引物对由序列表的序列11所不的单链DNA分子和序列表的序列12所不的单链DNA分子组成;所述NAU2026引物对由序列表的序列13所示的单链DNA分子和序列表的序列14所示的单链DNA分子组成;所述NAU2277引物对由序列表的序列15所示的单链DNA分子和序列表的序列16所示的单链DNA分子组成;所述NAU1186引物对由序列表的序列17所示的单链DNA分子和序列表的序列18所示的单链DNA分子组成;所述NAU1233引物对由序列表的序列19所示的单链DNA分子和序列表的序列20所不的单链DNA分子组成。3.如权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述棉花杂交种为鄂杂棉10号或瑞杂816。4.一种检测待测制种农户制备的棉花杂交种含有自交种的百分率的方法,包括如下步骤: (1)从制种农户的制种棉田里的随机抽取待测棉铃; (2)随机抽取步骤(1)得到的棉铃中的棉籽; (3)分别提取步骤(2)得到的棉籽的种皮的基因组DNA和种仁的基因组DNA; (4)分别以步骤(3)得到的种皮的基因组DNA和种仁的基因组DNA为模板,采用SSR引物对进行鉴定,得到种皮指纹图谱和种仁指纹图谱; 如果某一待测棉铃中,抽样检测的所有棉籽的种仁指纹图谱均与种皮指纹图谱一致,该棉铃为自交铃;待测制种农户制备的棉花杂交种含有自交种的百分率=自交铃数量/待测棉铃总数量X 100%。5.如权利要求4所述的方法,其特征在于:所述SSR引物对为CS62引物对、NAU1085引物对、NAUl 102引物对、NAU1255引物对、NAU2274引物对、NAUl 103引物对、NAU2026引物对、NAU2277引物对、NAUl 186引物对和NAU1233引物对中的至少一个;所述CS6...

【专利技术属性】
技术研发人员:付小琼杨付新叶武威
申请(专利权)人:中国农业科学院棉花研究所
类型:发明
国别省市:

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