通过删除由NKT细胞识别的表位来调整抗原免疫原性制造技术

本发明专利技术描述了一种方法和化合物，其用于阻止针对外源因子、针对用于基因疗法和基因接种的病毒载体、针对受治疗者天然暴露的蛋白质、针对基因修饰的有机体和针对与用于变应性或传染性疾病的疫苗施用有关的不希望的效应的免疫应答。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过删除由NKT细胞识别的表位来调整抗原免疫原性
本专利技术涉及降低天然免疫原性或诱发耐受性的肽或多肽，和其在阻止针对外源因子(allofactors)、用于基因疗法或基因接种的病毒载体、用于食品或饲料的环境抗原而诱发的免疫应答或受治疗者通过吸入或接触暴露的免疫应答，或诱发以降低与由变应原或传染剂接种相关的副作用的免疫应答中用途。
技术介绍
在许多情况下，用于治疗目的的蛋白质施用导致针对治疗性药的免疫应答，其阻碍所述治疗性药的任何进一步施用。这样的实例由受血友病A影响的受治疗者中凝血途径的VIII因子的施用提供:约三分之一的接受治疗者产生抑制VIII因子作用的抗VIII因子抗体。在罹患糖原代谢缺陷的受治疗者中对酶类如α半乳糖苷酶的施用同样地带来阻止任何进一步施用的针对治疗性药的免疫应答。第三实例由用作治疗性药和针对淋巴细胞表面分子、细胞因子或细胞因子受体使用的抗体提供。总的说来，高度需要发现阻止抗治疗性药的免疫的新治疗方法。病毒载体用于基因疗法或基因接种的用途受以下事实的严格限制:这种病毒载体诱出的免疫应答，其导致由载体转导的细胞迅速消除和转基因表达的迅速损耗。取决于病毒载体的性质，病毒载体诱出具有可变程度的强度的先天性和适应性免疫应答的激活。因此，腺病毒载体强烈地刺激先天性免疫应答，其后是适应性免疫应答。腺相关病毒载体触发较弱先天性应答，但诱出抗体产生。基因疗法和基因接种的可能性是巨大的。先天性和/或适应性应答通过其来针对病毒载体的治疗方法将在本领域表现高度显著的进展。许多受治疗者受到诱出以抵抗他们天然暴露的蛋白质的应答困扰。变应原(空气传播的或来自食品)诱出诸如变应性鼻炎和哮喘、荨麻疹、湿疹和过敏性反应之类的反应。至于为什么所述受治疗者呈 现这种反应的原因仅被部分地解释。降低以下的天然免疫原性将是十分有益的:蛋白质，诸如各种各样的食物变应原；导致乳糜泻的小麦；或受治疗者出于职业原因而暴露的诸如酶类的产物。在用于变应性疾病或抗传染剂的接种策略中，治疗功效经常受副作用限制，所述副作用由变应原或传染剂的促炎性质诱出。这种炎性效应妨碍更高剂量的疫苗的使用，并因此妨碍疫苗功效，并且使免疫应答适应无用的细胞应答，诸如迟发型反应，以及适应对所考虑状况不是最理想的同种型的抗体的产生。对接种中炎症的更佳控制将提供对免疫应答的更加有效调整，同时降低与发炎有关的副作用。自然杀伤T(NKT)细胞构成识别由非经典MHC络合分子⑶Id呈现的抗原的非常规T淋巴细胞的不同谱系。现在描述NKT细胞的两个亚型。I型NKT细胞，也称为不变NKT细胞(iNKT)，是最丰富的。它们的特征在于，存在由不变α链(小鼠中的Va 14和人中的V a 24)构成的α-β T细胞受体(TCR)。该α链与变量相关，但限制β链的数量。2型NKT细胞具有a-PTCR，但携带多态α链。然而，显而易见的是存在NKT细胞其它亚型，其表型仍未完全定义，但其特征为由在CDld分子的背景下呈现的糖脂激活。NKT细胞一般表达自然杀伤(NK)细胞受体(包括NKG2D和NKl.1)的组合。NKT细胞是先天免疫系统的一部分，其可以区别于适应性免疫系统，实际上它们在得到完全效应子能力之前不需要扩张。NKT细胞的激活导致各种效应。这种细胞释放预形成介体，包括帮助B细胞产生抗体的一大列细胞因子(包括中间白细胞素(IL)-4，干扰素(IFN)-Y，IL-21和IFN-α )，并且有人提出细胞因子的释放也可影响⑶4+T细胞(Burrows等人，NatureImmunology2009,10:669-671)。在本专利技术中，认为对B细胞激活和主要组织相容性(MHC)II类限制性CD4+T细胞激活的预防在降低或消除蛋白免疫原性中起作用。用于NKT细胞的识别单元(⑶Id分子)具有与MHC I类分子极其类似的结构，包括β-2微球蛋白的存在。其特征为毗连两个α链的很深裂隙并且含有接收脂质链的高度疏水的残基。该裂隙在两个末端开放，允许容纳较长链。用于CDld的规范配位体是合成的α半乳糖酰基鞘氨醇(a GalCer)。然而，已经描述了许多自然替代性配位体，包括糖脂和磷脂，该自然脂质硫脂发现于髓鞘质、微生物磷酸肌醇甘露糖苷和α半乳糖醛酸神经酰胺中。目前的共识(参见综述，诸如Matsuda等人，Current Opinion in Immunology 2008，20:358-368 和 Godfrey 等人，Nature reviews Immunology 2010,11:197-206)在于，CDld仅结合含脂质链的配位体，或通常由被嵌入CDld中的脂质尾部和从CDld中伸出的糖类残基首基构成的常见结构。不认为肽能够通过⑶Id的呈现激活NKT细胞。然而，有人提出，含庞大氨基酸残基的长疏水肽可以结合至CDlcKCastano等人，Science 1995,269:223-226)。使用表达具有未定义的生理相关性的随机序列肽的噬菌体呈现文库进行的观察，允许确立理论共有基序(Castano 等人，Science 1995，269:223-226 并且参见下文)。实际上，Castano等人表明，激活的细胞是⑶8+T细胞，也就是MHC I类限制性细胞，而不是NKT细胞。这些发 现教导本领域技术人员不存在疏水肽由⑶Id分子呈现的证据。因在常规免疫方案下不能诱出NKT细胞，Castano等人宣称的生理相关性被进一步怀疑(Matsuda 等人，Current Opinion in Immunology2008,20:358-368 and BrutkiewiczJournal of Immunology2006，177:769-775)。诸如用被转染以过表达CDld并在体外加载卵清蛋白衍生肽的细胞进行免疫的人工系统能够诱出NKT细胞。同样地，用质粒DNA以及鼠CDld和共刺激分子进行的真皮内免疫诱发溶细胞CDld限制性T细胞(Lee等人，Journalof Experimental Medicine 1998,187:433-438)。Castano 等人宣称，含由 Pl 位和 P7 位的芳族残基和P4位的脂族链构成的结构基序的疏水妝含有用于CDld结合表位的核心基序。如上所述，Castano等人达成的该结论不受数据支持。我们出乎意料地发现，包围疏水氨基酸序列的肽实际上能够诱出NKT细胞的激活。如果来自用于治疗性目的而施用，或受治疗者通常暴露的，或在进行基因疗法或基因接种时而施用，或在用于变应性或传染性疾病的接种的背景下而施用的蛋白的表位结合至CDld并因此激活NKT细胞，则突变所致所述蛋白的变化和/或消除所述表位的删除将是阻止免疫原性非常需要的。鉴别这种表位，随后突变、添加或删除氨基酸以阻止NKT细胞激活形成本专利技术的基础。专利技术概述本专利技术涉及肽或多肽用于通过阻止针对外源因子的免疫应答治疗受治疗者中针对所述外源因子诱出的这种免疫应答的用途。本专利技术还涉及肽或多肽用于通过阻止针对用于基因疗法或基因接种的病毒载体的免疫应答治疗受治疗者中针对所述病毒载体诱出的免疫应答的用途。本专利技术还涉及由基因修饰的有机体制备的肽或多肽用于在受治疗者中阻止通过暴露于天然蛋白质而诱出的免疫应答的用途。本专利技术还涉及肽或多肽在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种获得激活NKT细胞的能力降低的分离肽或多肽的方法，其包含以下步骤：a.?鉴别至少一个NKT细胞表位，其中所述表位在P1位和/或P7位包含疏水的氨基酸残基；b.?通过用非疏水的残基取代P1位和/或P7位的疏水的氨基酸残基，消除所述表位。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.11.25 EP 10192568.31.一种获得激活NKT细胞的能力降低的分离肽或多肽的方法，其包含以下步骤: a.鉴别至少一个NKT细胞表位，其中所述表位在Pl位和/或P7位包含疏水的氨基酸残基; b.通过用非疏水的残基取代Pl位和/或P7位的疏水的氨基酸残基，消除所述表位。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述疏水的残基是F、W、T、H、Y。3.根据权利要求2所述的方法，其中Pl位和/或P7位的至少一个F、W、T、H、Y由至少一个任意天然氨基酸、非天然氨基酸或非芳族氨基酸化合物替换，其中所述氨基酸不同于F、W、T、H、Y。4.根据任一上述的权利要求所述的方法，其特征在于，所述至少一个NKT细胞表位在P4包含脂族残基。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，P4中的所述脂族残基是1、L、M。6.根据任一上述的权利要求所述的方法，其中所述NKT细胞表位包含[FffTHY] -X2X3-[ILMV] -X5X6-[FffTHY]基序，其中 I 位和 / 或 7 位中的至少一个 F、W、T、H、Y 被删除。7.一种可以根据权利要求1至5获得的分离肽或多肽，其中所述肽或多肽由化学合成或由重组表达产生。8.可根据权利要求1至6的方法获...

【专利技术属性】
技术研发人员：圣雷米·吉恩玛丽，
申请(专利权)人：伊姆耐特有限责任公司，
类型：
国别省市：