【技术实现步骤摘要】
—种rhTRAIL菌体的分离纯化方法
本专利技术涉及生物制品的分离纯化领域,具体涉及。
技术介绍
肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-1nducing ligand,TRAIL)或称凋亡素2配体(Apo2 ligand, Apo2L),是1995年发现的TNF家族新成员。无论在体内还是体外,可溶形式TRAIL均可诱导多种肿瘤细胞发生凋亡。人全长的TRAIL分子由281个氨基酸组成,属II型跨膜蛋白,包括胞浆区、跨膜区和胞膜外区,分子量为32.5kD,等电点为7.63。TRAIL分子在第114位~281位氨基酸为可溶性肽段,可通过一个锌离子形成活性最强的同源三聚体结构。TRAIL是通过与其细胞膜受体结合发挥其诱导凋亡作用的。目前已经发现的 TRAIL 受体有 5 种:TRAIL-R1 (DR4)、TRAIL_R2 (DR5)、TRAIL_R3 (DcRl)、TRAIL-R4 (DcR2)和护骨素(osteoprotegerin,0PG)。TRAIL与死亡受体结合可以激活线粒体依赖和非线粒体依赖两条细胞凋亡信号途径,介导死亡信号转导入细胞内,启动效应酶胱天蛋白酶3 (caspase-3),最终引起肿瘤细胞凋亡。与TNF家族其它成员相比,TRAIL具有可选择性诱导多种肿瘤细胞凋亡,但对正常细胞毒副作用小的优点,被认为是一种具有广阔发展前景的抗肿瘤药物,从2000年以来,一直受到国内许多研究者的广泛关注。利用DNA重组技术和大肠杆菌表达体系经下游纯化得到的重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rhTRAIL)成功的用于 ...
【技术保护点】
一种rhTRAIL菌体的分离纯化方法,其特征在于,包含粗纯工艺和精纯工艺:所述粗纯工艺为:将由重组DNA技术所得的rhTRAIL工程菌经扩大培养发酵所收集的菌体进行高压匀浆破碎、高速离心分离、微滤处理;所述精纯工艺为:将上一步所述粗纯工艺所得的粗纯样进行离子层析、疏水层析、凝胶过滤层析、浓缩得样品。
【技术特征摘要】
1.一种rhTRAIL菌体的分离纯化方法,其特征在于,包含粗纯工艺和精纯工艺: 所述粗纯工艺为:将由重组DNA技术所得的rhTRAIL工程菌经扩大培养发酵所收集的菌体进行高压匀浆破碎、高速离心分离、微滤处理; 所述精纯工艺为:将上一步所述粗纯工艺所得的粗纯样进行离子层析、疏水层析、凝胶过滤层析、浓缩得样品。2.如权利要求1所述的一种rhTRAIL菌体的分离纯化方法,其特征在于, 在所述粗纯工艺中,所述高压匀浆破碎为:称取一定量冷冻保藏的rhTRAIL菌体加入适量的BI液后用组织捣碎机捣碎均匀至没有块状菌体,再一次加入适量的BI液使最终菌体浓度为10%,将捣碎均匀的菌体混悬液进行1500bar的压力破碎一次,收集匀浆破碎液并置于4_8°C冷藏备用;所述高速离心分离为:将上述高压匀浆破碎所得的匀浆破碎液进行13000r离心30min,收集上清液并置于4-8°C冷藏备用; 所述微滤为:将上述高速离心分离所得的上清液进行微滤处理,收集透膜微滤液并置于4-8°C冷藏备用,所收集的微滤液即为粗纯样; 在所述精纯工艺中, 所述离子层析为=UNOQ阴离子层析,先用0.5M/L NaOH以15ml/min处理UNOQ阴离子层析柱120min,再用B液以40ml/min处理柱子2个柱体积,然后用D液以40ml/min再生柱子I个柱体积,接着再用B液以40ml/min平衡柱子2个柱体积;柱子平衡完后,将上述微滤所得的粗纯样以40ml/min 上样UNOQ阴离子层析柱,再用B液以40ml/min淋洗柱子2.5个柱体积,最后用C液以40ml/min进行洗脱,收集电导为8mS/cm的洗脱峰样; 所述疏水层析为=Phenyl疏水层析,即先用0.5M/L NaOH以15ml/min处理Phenyl疏水层析柱120min,再用F液以40ml/min平衡疏水柱2个柱体积;柱子平衡完后,将上述离子层析收集的洗脱峰样加入比例体积的G液后以40ml/min上样疏水柱;用E液以40ml/min淋洗柱子2个柱体积,最后用E液以40ml/min —步洗脱,收集电导为150ms/cm的洗脱峰样;所述凝胶过滤层析为:S^acryl S200层析,即先用0.5M/L NaOH以15ml/min处理S200层析柱120min,再用H液以40ml/min平衡柱子3个柱体积;柱子平衡完后,将上述疏水层析收集的洗脱峰样以40ml/min上样,最后用H液一步洗脱收集洗脱峰样; 所述浓缩为:将上述凝胶过滤层析中收集的洗脱峰样进行超滤浓缩,浓缩10倍,收集浓缩样置于4-8°C冷藏备用。3.如权利要求2所述的一种rhTRAIL菌体的分离纯化方法,其特征在于,...
【专利技术属性】
技术研发人员:王军,张静,李靖文,
申请(专利权)人:深圳新鹏生物工程有限公司,
类型:发明
国别省市:
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。