本发明专利技术公开了一种油脂中游离及结合3-氯-1，2-丙二醇检测中的样品预处理方法，称取适量油脂并添加一定体积的极性溶剂，分层后将溶剂相转出，真空条件下旋转蒸发挥干溶剂，残渣用四氢呋喃溶解，分别进行下述处理：（1）游离型的3-氯-1，2-丙二醇测定的进一步处理；（2）结合型的3-氯-1，2-丙二醇测定的进一步处理。本发明专利技术能够通过简单的方法对用于检测油脂中游离型及结合型3-氯-1，2-丙二醇的样品进行预处理。
【技术实现步骤摘要】
—种油脂中游离型及结合型3-氯-1, 2-丙ニ醇检测中的样品预处理方法
本专利技术涉及油脂样品的预处理方法，尤其涉及用于油脂中游离型及结合型3-氯-1，2_丙ニ醇(3-MCPD)检测中的样品预处理方法。
技术介绍
3-氯-1，2-丙ニ醇酯(3-MCPDE)是油脂及含油脂食品在热加工过程中形成的副产物，以结合3-MCPD的形式存在于油脂中。由于3-氯-1，2-丙醇酯在特定的条件下可水解形成游离的3-MCPD从而表现其毒性，因此研究学者认为其是ー种潜在的食品安全危害因子。油脂中3-MCPDE形成机理及影响因素是目前国内外的研究热点，为了探明这些问题，需要有方便可行的样品预处理方法做支持。文献报道的检测油脂中游离及结合3-MCPD的方法中，根据所针对的目标化合物的种类，可以大体分为两类:间接法和直接法。间接法是通过将结合3-MCPD通过碱催化、酶催化或酸催化的方法进行醇解后生成游离3-MCPD，再对游离3-MCPD进行衍生化反应后通过GC-MS检测；直接法是将结合3-MCPD通过LC-MS进行分析，而不需进行醇解操作。由于油脂组成中脂肪酸的种类较多，按照植物油中主要的7种脂肪酸来计算，3-MCPDE在甘油骨架sn-1、sn-2位的排列组合的种类就有63种之多，若将其余种类的脂肪酸也统计进来，3-MCPDE的种类将更加繁多。直接測定方法的主要缺陷就在于可商品化供应的3-氯丙醇酯及相应的氘代3-氯丙醇酯的种类有限，无法从市场上购买到不同碳数脂肪酸组成的3-氯丙醇酯及相应的氘代3-氯丙醇酯化合物标准品，要想对油脂样品中的3-氯丙醇酯用3-氯丙醇酯及相应的氘代3-氯丙醇酯化合物标准品进行一一的对应非常困难。因此，目前研究学者多数采用间接法对游离及结合3-MCPD进行检測。众所周知，油脂是ー种混合物，主要成分为甘油三酷，此外还含有游离脂肪酸、磷月旨、色素、VE、甘油一酷、甘油ニ酯等组分，为了准确测定油脂中游离及结合3-MCPD的含量，需要采取相应的措施去除这些组分对测定的干扰。目前文献报道的用于检测油脂中游离及结合3-MCPD的样品预处理方法主要采用硅胶柱层析和固相萃取柱萃取两类。Zelinkovd采用娃胶柱层析的方法对乳脂样品进行前处理(Haines, T.D.，etal.，Direct Determination of MCPD Fatty Acid Esters and Glycidyl Fatty AcidEsters in Vegetable Oils by LC-TOFMS.Journal of the American Oil ChemistsSociety, 2011.88 (I): 1-14.)，具体步骤为:在200mg乳脂中加入7.26 u g氘代3-氯丙醇ニ棕榈酸酯(3-MCPD-d5-l，2-dipalmitate)内标物，用ImL正己烷溶解后上样到330X20mm娃胶柱(silica gel60, 70-230mesh; Merck, Darmstadt, Germany),用石油醚(沸点 45 ?65°C):こ醚=95:5 (v/v)混合溶剂500mL以4mL/min的速率洗脱，收集含有3-氯丙醇酯的组分，旋蒸后，用200 V- L四氢呋喃溶解,准备进行GC-MS分析。Moravcova也采用了娃胶柱层析的方法从油脂样品中分离3-氯丙醇ニ酯(Moravcova, E.，et al.，Novel approachesto analysis ofj_chloroprop&ne_丄，2_dioi esters in vegetable oils.Anal Bi&na丄Chem, 2012.402(9):2871-83.)，操作步骤为:称量8±0.1mg油样于2mL小瓶中，用30 y L氘 代内标溶液(3-MCPD-d5-l，2-dipalmitate的乙酸乙酯溶液，浓度300ng/mL)溶解，然后上 样到装填了 1.8g娃胶(用正己烧:乙醚=96:4, v/v混合溶剂溶胀)的180X4mm玻璃柱,用 30mL正己烧:乙醚=96:4, v/v混合溶剂洗脱，流速0.8mL/min,收集5?25mL的部分(含 有3-氯丙醇二酯)，旋转蒸发溶剂，用200 u L甲醇重新溶解准备进行U-HPLC-MS和DART-MS 分析。硅胶柱层析方法的不足之处是整个预处理的周期较长，耗用溶剂量较大(有的甚至大 于500mL)，且柱子的装填效果直接影响样品预处理的效果，样品预处理结果的再现性受到 很大影响。Moravcova采用了固相萃取柱萃取的方法从油脂样品中分离3_氯丙醇单酯 (Moravcova,E.,et al., Novel approaches to analysis of3-chloropropane_l，2-diol esters in vegetable oils.Anal Bianal Chem, 2012.402 (9): 2871-83.),详细过程如 下:称量100±lmg油样于2mL小瓶中，用50 y L正己烧和60 y L同位素标记的标准溶液 (3-MCPD-d5-monopalmitate的乙酸乙酯溶液，浓度60ng/mL)溶解，上样到已用2X2mL正 己烧活化好的固相萃取柱(aminopropyl SPE cartridge, 500mg)上,真空条件下,先用8mL 正己烧:二氯甲烧:乙醚=89:10:1 (v/v/v)混合溶剂洗脱并弃去,接着用2mL正己烧:乙 酸乙酯=85:15 (v/v)混合溶剂洗脱并弃去,最后用IOmL正己烧:乙酸乙酯=85:15 (v/v) 混合溶剂洗脱并收集，旋转蒸发，用250 y L甲醇重新溶解准备进行分析。此外，Hori也利 用固相萃取柱对油脂样品进行了前处理(Hori, K., et al., Simultaneous determination of3~MCPD fatty acid esters and glycidol fatty acid esters in edible oils using liquid chromatography time-of-flight mass spectrometry.LffT-Food Science and Technology, 2012.48(2):204-208.)，过程如下:准确称量IOmg油样于螺旋盖玻璃管中，力口 A 2mL乙腈的正己烷饱和溶液、2mL正己烷的乙腈饱和溶液及20mL内标溶液，混合溶液振 摇lmin，于3500Xg条件下离心lOmin，正己烷相上样到用4mL正己烷平衡好的固相萃取柱 (Sep-Pak Plus SI cartridges, 500mg),用4mL氯仿洗脱并收集；乙腈相上样到用ImL甲 醇、2mL乙腈平衡好的固相萃取柱(Sep-Pak Plus C18cartridges, 500mg),先后用2mL乙腈 和2mL乙酸乙酯洗脱并收集，收集的正己烷相和乙腈相混合，并用氮气吹干，用ImL乙腈溶 解，准备进行LC/T0F-MS分析。固相萃取柱萃取方法的不足之处是固相萃取柱的价格较高， 使得样品预处理的成本增加，同时其对活化和洗脱过程中的本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种油脂中游离型及结合型3?氯?1,2?丙二醇检测中的样品预处理方法，其特征在于，称取适量油脂并添加一定体积的极性溶剂，分层后将溶剂相转出，真空条件下旋转蒸发挥干溶剂，残渣用四氢呋喃溶解，分别进行下述处理：（1）游离型的3?氯?1，2?丙二醇测定的进一步处理：移取一定体积的上述四氢呋喃溶液，添加适量氘3?氯?1，2?丙二醇内标，真空条件下旋转蒸发挥干溶剂，残渣用适量超纯水溶解，添加适量正己烷，充分混匀，待分层后将正己烷相弃去，水相用于后续GC?MS分析的衍生化处理；（2）结合型的3?氯?1，2?丙二醇测定的进一步处理：移取一定体积的上述四氢呋喃溶液，添加适量硫酸甲醇混合液，加热一定时间后室温冷却，加适量饱和碳酸氢钠溶液中和，充分混匀，添加适量氘3?氯?1，2?丙二醇内标，真空条件下旋转蒸发挥干溶剂，残渣用适量超纯水溶解，添加适量正己烷，旋涡振荡充分混匀，待分层后将正己烷相弃去，水相用于后续GC?MS分析的衍生化处理。
【技术特征摘要】
1.一种油脂中游离型及结合型3-氯-1，2-丙二醇检测中的样品预处理方法，其特征在于，称取适量油脂并添加一定体积的极性溶剂，分层后将溶剂相转出，真空条件下旋转蒸 发挥干溶剂，残渣用四氢呋喃溶解，分别进行下述处理:(1)游离型的3-氯-1，2-丙二醇测定的进一步处理:移取一定体积的上述四氢呋喃溶液，添加适量氘3-氯-1，2-丙二醇内标，真空条件下 旋转蒸发挥干溶剂，残渣用适量超纯水溶解，添加适量正己烷，充分混匀，待分层后将正己 烷相弃去，水相用于后续GC-MS分析的衍生化处理；(2)结合型的3-氯-1，2-丙二醇测定的进一步处理:移取一定体积的上述四氢呋喃溶液，添加适量硫酸甲醇混合液，加热一定时间后室温 冷却，加适量饱和碳酸氢钠溶液中和，充分混匀，添加适量氘3-氯-1，2-丙二醇内标，真空 条件下旋转蒸发挥干溶剂，残渣用适量超纯水溶解，添加适量正己烷，旋涡振荡充分混匀， 待分层后将正己烷相弃去，水相用于后续GC-MS分析的衍生化处理。2.根据权利要求1所述的预处理方法，其特征在于，所述的极性溶剂为乙腈。3.根据权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员：金青哲，周红茹，曾君瑞，王兴国，刘睿杰，邹孝强，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：
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