【技术实现步骤摘要】
利用双荧光素酶报告基因确定关岭牛办/基因核心启动子的方法
本专利技术涉及分子遗传学领域,尤其是一种利用双荧光素酶报告基因确定关岭牛MyoD /基因核心启动子的方法。
技术介绍
/的全称为myogenic differentiation I,其中文名称为生肌决定因子,是骨骼肌生长发育过程中重要的正调控基因,在肌形成肌肉特异基因转录调控中,MyoD /起着总开关的作用,可以结合到肌细胞生成素(myogenin)、肌酸激酶CK、肌球蛋白、结蛋白等基因启动子区发挥重要调控作用,促进它们的转录激活。MyoD /介导的肌分化机制作为研究细胞分化的最佳模型,已成为当前众多学者研究的焦点,尤为重要。目前,国内外对该基因的表达调控在小鼠、鸡和猪的肌细胞生成机理等方面的相关研究较多,在牛上已有一些研究,包括遗传变异及功能研究等,但主要集中在转录后和翻译水平,/基因转录调控的分子机制尚不清楚。因此,基因启动子的研究具有广阔的研究前景,以期为转基因牛的培育和牛肉品质的提高提供理论依据。生肌决定因子I的主要功能包括:(I)促使静止期的肌卫星细胞向成肌细胞转化。(2)能把许多种类型细胞转化为成肌细胞,并可促进成肌细胞进一步融和、分化为成熟的肌纤维。pGL3-Basic是一类常用的报告基因,因其无启动子和增强子,可通过荧光素酶报告基因的表达来检测插入片段的启动活性,并且比较启动子的强弱和骨骼肌特异性,进而初步确定核心启动子区域。
技术实现思路
技术要求 本专利技术所要解决的技术问题是提供一种利用双荧光素酶报告基因确定关岭牛I基因核心启动子的方法,它具有灵敏度高、检测速度快、费 ...
【技术保护点】
一种利用双荧光素酶报告基因确定关岭牛MyoDⅠ基因核心启动子的方法,其特征在于:包括以下步骤:步骤1)、构建含关岭牛MyoDⅠ基因启动子全长片段和亚克隆片段的重组载体;步骤2)、对骨骼肌生长相关的细胞进行培养和铺板;步骤3)、配制启动子重组子/脂质体的混合物,对步骤2)获得的细胞进行转染;步骤4)、通过双荧光素酶报告基因对步骤3)获得的转染细胞进行双荧光素酶活性检测。
【技术特征摘要】
1.一种利用双荧光素酶报告基因确定关岭牛/基因核心启动子的方法,其特征在于:包括以下步骤: 步骤I)、构建含关岭牛MyoD I基因启动子全长片段和亚克隆片段的重组载体; 步骤2)、对骨骼肌生长相关的细胞进行培养和铺板; 步骤3)、配制启动子重组子/脂质体的混合物,对步骤2)获得的细胞进行转染; 步骤4)、通过双荧光素酶报告基因对步骤3)获得的转染细胞进行双荧光素酶活性检测。2.根据权利要求1所述的利用双荧光素酶报告基因确定关岭牛/基因核心启动子的方法,其特征在于:步骤4)中所述的双荧光素酶报告基因为萤火虫荧光素酶基因。3.根据权利要求1所述的利用双荧光素酶报告基因确定关岭牛/基因核心启动子的方法,其特征在于:所述的双荧光素酶活性检测所采用的工作液是通过promega试剂盒配制获得。4.根据权利要求1所述的利用双荧光素酶报告基因确定关岭牛/基因核心启动子的方法,其特征在于:步骤I)中所采用的引物为8对,引物PO的上游引物的序列为:5 ^ -ACCTCCCGACATCATACATT-3 ',引物PO的下游引物的序列为:5 ' -GAAACCCAGCCGCATCTA-3 ,;引物Pl的上游引物的序列为:5 ' - ACCTCCCGACATCATACATT-3 ',引物Pl的下游引物的序...
【专利技术属性】
技术研发人员:许厚强,李飞,陈伟,陈祥,赵佳福,
申请(专利权)人:贵州大学,
类型:发明
国别省市:
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