BIM基因突变检测特异性引物和液相芯片制造技术

本发明专利技术公开了一种BIM基因突变检测液相芯片和特异性引物，该液相芯片主要包括有：每种由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成的ASPE引物，所述特异性引物序列为：针对缺失突变的SEQ?ID?NO.13及SEQ?ID?NO.14，针对A145G位点的SEQID?NO.15及SEQ?ID?NO.16，针对C59T位点的SEQ?ID?NO.17及SEQ?ID?NO.18，针对T86C位点的SEQ?ID?NO.19及SEQ?ID?NO.20，针对G149C位点的SEQ?ID?NO.21及SEQ?ID?NO.22，和/或针对C104G位点的SEQ?ID?NO.23及SEQ?ID?NO.24；anti-tag序列包被的微球；扩增引物。本发明专利技术所提供的检测液相芯片的检测结果与测序法的吻合率高达100％，能实现多个突变位点的野生型和突变型单独和并行检测。

【技术实现步骤摘要】
BIM基因突变检测特异性引物和液相芯片
本专利技术属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种BIM基因突变检测特异性引物和液相芯片。
技术介绍
BM基因存在于人2号染色体上，是一种B细胞白血病/淋巴瘤2 (BCL2基因)蛋白家族促凋亡成员。BM基因表达一个包含BH3 (BCL2-homology domain3)结构域的蛋白，通过和Bcl2家族Bcl2-ll，BCL-XL, BCL2A1, MCLl等一些促生长的蛋白相结合抑制肿瘤细胞生长，或者和促进凋亡的蛋白BAX、BAK1相结合促进肿瘤细胞凋亡。BH3结构域是BIM基因发挥作用的关键功能域，研究发现该功能域与TKIs发挥作用密切相关。例如在TKIs药物吉非替尼治疗的非小细胞肺癌(NSCLC)中需要BM基因的正常表达，并且BH3-类似药物能够明显增强其治疗效果。人类很多激酶表达异常导致的人类肿瘤细胞都会通过抑制BIM基因的表达或者通过MAPKl磷酸化修饰BM蛋白来保持自身的生长优势。在几乎所有人类肿瘤中BM基因的激活表达对于TKIs类药物发挥作用是必须的，而抑制BM基因的表达则会导致TKIs耐药。表明BM基因在TKIs药物发挥作用过程中发挥重要作用。目前，BM基因突变检测方法主要有=Illumina光纤微珠芯片技术、Affymetrix6.0芯片技术。虽然Illumina光纤微珠芯片技术是高灵敏度和精确性的高通量检测系统，但是自动化程度低，手工操作比较多，难以满足实际应用的需要，高通量的AfTymetrix突变6.0芯片技术比较成熟，然而该芯片技术对于中低密度的临床诊断型芯片并不合适，很难在同一个反应体系中扩展检测众多生物学性状相关的突变或标签突变。另外，Affymetrix突变6.0芯片主要在表达谱芯片上比较强，物种较多，在突变芯片上相对较弱，而且检测价格昂贵，并不能满足实际需要。本专利技术目标检测的BM基因突变，如表所示:本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种BIM基因突变检测液相芯片，其特征在于，包括有（A）.针对BIM基因不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物对：每条ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为：针对缺失突变的SEQ?ID?NO.13及SEQ?ID?NO.14，针对A145G位点的SEQ?ID?NO.15及SEQ?ID?NO.16，针对C59T位点的SEQ?ID?NO.17及SEQ?ID?NO.18，针对T86C位点的SEQ?ID?NO.19及SEQ?ID?NO.20，针对G149C位点的SEQ?ID?NO.21及SEQ?ID?NO.22，和/或针对C104G位点的SEQ?ID?NO.23及SEQ?ID?NO.24；所述tag序列选自SEQ?ID?NO.1～SEQ?ID?NO.12；（B）.有anti?tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球，所述anti?tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述anti?tag序列选自SEQ?ID?NO.25～SEQ?ID?NO.36，且所述anti?tag序列能相应地与（A）中所选的tag序列互补配对；（C）.用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物。...

【技术特征摘要】
1.一种BIM基因突变检测液相芯片，其特征在于，包括有 (A).针对BIM基因不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE弓丨物对:每条ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为:针对缺失突变的SEQ ID N0.13及SEQ ID N0.14，针对A145G位点的SEQID N0.15 及 SEQ ID N0.16，针对 C59T 位点的 SEQ ID N0.17 及 SEQ ID N0.18，针对 T86C 位点的 SEQ ID N0.19 及 SEQ ID N0.20，针对G149C位点的 SEQ ID N0.21 及 SEQ ID N0.22，和/或针对C104G位点的SEQ ID N0.23及SEQ ID N0.24 ;所述tag序列选自SEQ ID N0.1~SEQ ID N0.12 ； (B).有ant1-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球,所述ant1-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述ant1-tag序列选自SEQ ID N0.25~SEQ ID N0.36，且所述ant1-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对； (C).用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物。2.根据权利要求1所述的BIM基因突变检测液相芯片，其特征在于，所述扩增引物为:针对缺失突变的 SEQ ID N0.37,SEQ ID N0.38 和 SEQ ID N0.39，针对 A145G 位点的 SEQ IDN0.40 及 SEQ ID N0.41，针对 C59T 位点的 SEQ ID N0.42 及 SEQ ID N0.43，针对 T86C 位点的 SEQ ID N0.44 及 SEQ ID N0.45，针对 G149C 位点的 SEQ ID N0.46 及 SEQ ID N0.47，和/ 或针对 C104G 位点的 S...

【专利技术属性】
技术研发人员：许嘉森，刘志明，
申请(专利权)人：益善生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：