MSMB基因突变检测特异性引物和液相芯片制造技术

本发明专利技术公开了一种MSMB基因突变检测液相芯片和特异性引物，该液相芯片主要包括有：每种由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成的ASPE引物，所述特异性引物序列为：针对C4944T位点的SEQ?ID?NO.9及SEQ?ID?NO.10，针对A52G位点的SEQ?ID?NO.11及SEQ?ID?NO.12，针对G1692A位点的SEQ?ID?NO.13及SEQ?ID?NO.14，和/或针对C14917T位点的SEQ?ID?NO.15及SEQ?ID?NO.16；有anti-tag序列包被的微球；扩增引物。本发明专利技术所提供的检测液相芯片的检测结果与测序法的吻合率高达100％，能实现多个突变位点的野生型和突变型单独和并行检测。

【技术实现步骤摘要】
MSMB基因突变检测特异性引物和液相芯片
本专利技术属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种MSMB基因突变检测特异性引物和液相芯片。
技术介绍
β -微精蛋白(MSMB)基因(microseminoprotein, beta-.MSMB),定位于 10 号染色体IOqll.2上，51549552到51562516碱基对之间。MSMB基因编码的蛋白质是免疫球蛋白结合因子家族的成员，由前列腺上皮细胞合成，被分泌到精浆中。有研究表明，MSMB基因编码的PSP94能抑制肿瘤的生长和转移。PSP94的丧失导致了雄激素抵抗的前列腺癌的发生，而蛋白EZH2的过表达导致MSMB的低表达，从而使得PSP94低表达而引起前列腺癌的发生。SP94的低表达与前列腺癌根治术后复发有很大的关系，MSMB基因的多态性与前列腺癌发生有强相关性。目前，MSMB基因突变检测方法主要有=Illumina光纤微珠芯片技术、基质辅助激光解析电离时间飞行质谱技术(MALD1-T0F-MS)和荧光定量PCR技术，虽然Illumina光纤微珠芯片技术是高灵敏度和精确性的高通量检测系统，但是自动化程度低，手工操作比较多，难以满足实际应用的需要，荧光定量PCR技术具有灵敏度高、特异性强、自动化程度高的特点，但也存在样品易污染、假阳性率高的缺点，且每次只能检测一种突变类型，不能与其他位点并行检测，同样不能满足实际应用的需要，基质辅助激光解析电离时间飞行质谱技术是一种软电离技术，在蛋白质等生物大分子的检测中有着强大而成熟的功能，但是在核酸检测领域，由于核酸分子本身的特殊性，检测受到一定的限制，也难以满足实际应用的需要。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供MSMB基因突变检测液相芯片，该液相芯片可用于单独或并行检测MSMB基因四种常见基因型C4944T、A52G、G1692A和C14917T的野生型和突变型。实现上述目的的技术方案如下:一种MSMB基因突变检测液相芯片，包括有:(A).针对MSMB基因不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物对--每条ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为:针对C4944T位点的SEQ ID N0.9及SEQ ID N0.10，针对A52G位点的SEQ ID N0.11 及 SEQ ID N0.12，针对 G1692A 位点的 SEQ ID N0.13 及 SEQ ID N0.14，和 /或针对C14917T位点 的SEQ ID N0.15及SEQ ID N0.16 ;所述tag序列选自SEQ ID N0.1~SEQ ID N0.8 ；(B).有ant1-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球,所述ant1-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述ant1-tag序列选自SEQ ID N0.17~SEQ ID N0.24，且所述ant1-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对；( C).用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物。在其中一个实施例中，所述扩增引物为:针对C4944T位点的SEQ ID N0.25及SEQID N0.26，针对 A52G 位点的 SEQ ID N0.27 及 SEQ ID N0.28，针对 G1692A 位点的 SEQ IDN0.29 及 SEQ ID N0.30，和 / 或针对 C14917T 位点的 SEQ ID N0.31 及 SEQ ID N0.32。在其中一个实施例中，所述ASPE弓丨物为:针对C4944T位点的由SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.9组成的序列及由SEQ ID N0.2和SEQ ID N0.10组成的序列，针对A52G位点的由SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.11组成的序列及由SEQ ID N0.4和SEQ ID N0.12组成的序列，针对G1692A位点的由SEQ ID N0.5和SEQ ID N0.13组成的序列及由SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.14组成的序列，和/或针对C14917T位点的由SEQ ID N0.7和SEQ ID N0.15组成的序列及由SEQ ID N0.8和SEQ ID N0.16组成的序列。本专利技术的另一目的是提供用于:MSMB基因突变检测的特异性引物。具体技术方案如下: 用于:MSMB基因突变检测的特异性引物，所述特异性引物序列为:针对C4944T位点的 SEQ ID N0.9 及 SEQ ID N0.10，针对A52G位点的 SEQ ID N0.11 及 SEQ ID N0.12，针对G1692A 位点的 SEQ ID N0.13 及 SEQ ID N0.14，和 / 或针对 C14917T 位点的 SEQ ID N0.15及 SEQ ID N0.16。本专利技术的主要优点在于:1.本专利技术所提供的MSMB基因突变检测液相芯片的检测结果与测序法的吻合率高达100%。且检测所需要的时间远远低于常用的测序技术，特别符合实际应用需要。所制备的MSMB基因突变检测液相芯片具有非常好的信号-噪声比，并且所设计的探针以及ant1-tag序列之间基本上不存在交叉反应，tag标签序列、ant1-tag标签序列的选取以及tag标签序列与具体ASPE引物的结合，能够避免交叉反应，实现多个突变位点的并行检测。2.本专利技术通过专利技术人长期积累的设计经验和大量的实验操作，从众多的特异性引物中选取了最优的组合。本专利技术设计的ASPE引物特异性引物能够灵敏特异地识别目标检测的突变位点，准确区分各种型别的基因型；在同一个反应体系中，不同的特异性引物之间、特异性引物与非目标检测的PCR扩增产物之间基本上不存在交叉反应，检测特异性好，交叉反应率低于3% ;除了能够检测单个位点突变情况，也能够同时并行检测多个突变位点的突变情况，检测效果一致。3.本专利技术的检测方法步骤简单，4种突变位点检测可通过一步PCR即可完成4条含有突变位点的目标序列的扩增，避免了反复多次PCR等复杂操作过程中存在的诸多不确定因素，因而可大大提高检测准确率，体现了精确的同时定性、定量分析特征。4.本专利技术不仅克服了传统固相芯片敏感性不高，检测结果的可重复性差的缺陷，同时对现有的液相芯片技术进行改进，使得所制备微球能适用于不同的检测项目，具有很强的拓展性。检测的荧光信号值大大提高，从而使得检测的灵敏度进一步得到提高，信噪比增强，检测结果更加准确可靠。【具体实施方式】实施例1MSMB基因突变检测液相芯片，主要包括有:一、ASPE 引物针对MSMB基因四种常见基因型C4944T、A52G、G1692A和C14917T的野生型和突变型，分别设计特异性引物序列。ASPE引物由“tag序列+特异性引物序列”组成。ASPE引物序列如下表所示:表1MSMB基因的ASPE弓丨物序列(tag序列+特异性引物序列)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种MSMB基因突变检测液相芯片，其特征是，包括有：（A）.针对MSMB基因不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物对：每条ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为：针对C4944T位点的SEQ?ID?NO.9及SEQ?ID?NO.10，针对A52G位点的SEQ?ID?NO.11及SEQ?ID?NO.12，针对G1692A位点的SEQ?ID?NO.13及SEQ?ID?NO.14，和/或针对C14917T位点的SEQ?ID?NO.15及SEQ?ID?NO.16；所述tag序列选自SEQ?ID?NO.1～SEQ?ID?NO.8；（B）.有anti?tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球，所述anti?tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述anti?tag序列选自SEQ?ID?NO.17～SEQ?ID?NO.24，且所述anti?tag序列能相应地与（A）中所选的tag序列互补配对；（C）.用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物。

【技术特征摘要】
1.一种MSMB基因突变检测液相芯片，其特征是，包括有: (A).针对MSMB基因不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物对:每条ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为:针对C4944T位点的SEQ ID N0.9及SEQ ID N0.10，针对A52G位点的SEQ ID N0.11 及 SEQ ID N0.12，针对 G1692A 位点的 SEQ ID N0.13 及 SEQ ID N0.14，和 /或针对C14917T位点的SEQ ID N0.15及SEQ ID N0.16 ;所述tag序列选自SEQ ID N0.1~SEQ ID N0.8 ； (B).有ant1-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球,所述ant1-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述ant1-tag序列选自SEQ ID N0.17~SEQ ID N0.24，且所述ant1-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对； (C).用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物。2.根据权利要求1所述的MSMB基因突变检测液相芯片，其特征是，所述扩增引物为:针对 C4944T 位点的 SEQ ID N0.25 及 SEQ ID N0.26，针对 A52G 位点的 SEQ ID N0.27 及 SEQID N0.28，针对G1692A 位点的 SEQ ID N0.29 及 SEQ I...

【专利技术属性】
技术研发人员：许嘉森，吴诗扬，
申请(专利权)人：益善生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：