大分子磷脂酰甘油纳米脂质体、制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种大分子磷脂酰甘油纳米脂质体、制备方法及应用，属于脂质体的制备及应用技术。所述的磷脂酰甘油纳米脂质体是用磷脂酰甘油壳聚糖作为主膜材来代替磷脂制备具有脂质双层膜结构的囊泡。磷脂酰甘油壳聚糖的特征为重均分子量大于2000，可溶于氯仿、乙醇等有机溶剂，并含有羧基或氨基。制备方法为脂质体的常用制备方法薄膜分散法和反向蒸发法。该类脂质体表面可连接多种靶向制剂，可同时和分别包载水溶性、油溶性或双亲性物质，包括药物、蛋白、基因、营养物质、维生素、磁性颗粒和量子点等。该种方法具有包封率高、操作简便、适用性强、成本低的优点，包衣后的大分子脂质体粒径分布均匀，可在10-5000nm的范围内进行调节，体系稳定，缓释功能强。

【技术实现步骤摘要】
大分子磷脂酰甘油纳米脂质体、制备方法及应用
本专利技术涉及一种大分子磷脂酰甘油纳米脂质体的制备和应用。属于脂质体的制备及应用技术。
技术介绍
脂质体作为药物载体是临床应用较早，发展最为成熟的一类新型靶向制剂；它是由脂双分子层组成的颗粒，可介导基因穿过细胞膜，又是一种优良的基因和药物载体。脂质体应用非常广泛，制备工艺简单、方法多样，其粒子大小处于纳米级的介观范围，有许多独特的物理、化学性质，粒径还可根据需要进行控制；可用于纳米粒子的制备、临床检验和诊断、催化反应的控制、模拟膜研究及在体内外将基因或其它物质向细胞内传递等。但是目前的小分子脂质体技术依然存在如物理化学稳定性差，囊泡易发生融合聚集，药物易泄漏；不易进行表面修饰等缺点。利用高分子物质替代磷脂所制备的高分子脂质体可提高脂质体的物理化学稳定性，其不仅具备小分子脂质体的脂质双层膜结构，且制备方法简单，稳定性高，易进行表面修饰。但是阳离子高分子脂质体仍然存在不少缺点，如细胞毒性偏大、正电性偏高所导致的盐溶液中的不稳定特性等，因此有必要开发一种更加稳定、低毒性的高分子脂质体系统。大分子磷脂酰甘油纳米脂质体则属于中性脂质体的范畴，具有低毒性、高稳定性的优点。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种大分子磷脂酰甘油纳米脂质体，它具有脂质体的优点，同时具有高分子物质特有的多功能和稳定性，可满足上述应用对脂质体的要求。本专利技术为一种大分子磷脂酰甘油纳米脂质体，其特征在于所述的大分子磷脂酰甘油纳米脂质体是用双亲性磷脂酰甘油壳聚糖作为主膜材来代替合成磷脂，小分子磷脂为稳定剂所制备的具有脂质双层膜结构的囊泡。本专利技术中用于制备大分子磷脂酰甘油纳米脂质体的磷脂酰甘油壳聚糖的具体特征为:重均分子量大于2000，可溶于极性有机溶剂氯仿或二氯甲烷，并含有羧基或氨基。本专利技术中的小分子磷脂包括胆固醇、二油酰脂酰乙醇胺(DOPE)、3i3- [N_(N’，N’ - 二甲基胺乙基)胺基甲酰基]胆固醇、卵磷脂、磷脂(PC、PE、PS、P1、PG)、二硬脂酰磷脂酰胆碱、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺或棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺中的一种或2-3种，优选为胆固醇、二油酰脂酰乙醇胺或3β- [Ν-(Ν’，Ν’ - 二甲基胺乙基)胺基甲酰基]胆固醇。本专利技术提供的大分子磷脂酰甘油纳米脂质体的制备方法为用于制备脂质体的所有方法，包括薄膜分散法、反向蒸发法、复乳法、离心法、pH梯度法、注入法和混溶法。其中薄膜分散法和反向蒸发法的基本步骤为:先将磷脂酰甘油壳聚糖和小分子磷脂及油溶性物质共溶于氯仿或其它有机溶剂中，混匀得溶液I ;然后配置含有水溶性物质的水溶液II。薄膜分散法为:将溶液I通入氮气并除去有机溶剂使成薄膜；用水溶液II超声使脂质薄膜水化；反向蒸发法为:将溶液I与水溶液II共混超声乳化，再除去有机溶剂。最后全部采用柱过滤法、离心法或透析法进行纯化。具体大分子磷脂酰甘油纳米脂质体的制备流程如下:(a)先制备磷脂酰甘油壳聚糖:取IOOmg磷脂酰甘油(PG)溶于50mL DMSO中，共混于pH=6的硼酸缓冲液50mL后，加入4.0mg四氟硼酸锌作为催化剂，再加入组织交联剂Denacol EX521 (质量浓度1%_50%)溶液10ml，搅拌反应24小时后，萃取收集反应产物环氧化物修饰的PG ;将环氧化物修饰的PG与氧羧甲基壳聚糖在pH=6硼酸缓冲液中再进行反应24小时，透析48小时后冻干得磷脂酰甘油壳聚糖。(b)将磷脂酰甘油壳聚糖和小分子磷脂及油溶性物质共溶于氯仿或其他有机溶剂中，混匀；(C)将步骤b)中得到的混合溶液通入氮气并除去有机溶剂使成薄膜，然后加入含有水溶性物质的水溶液使脂质水化；或将含有水溶性物质的水溶液与步骤b)得到的混合溶液共混超声乳化，再除去有机溶剂。本专利技术所述的水溶性、油溶性或双亲性物质包括药物、蛋白、抗体、基因、维生素、磁性颗粒、量子点、SiO2、磷酸钙无机颗粒，其中优选为抗肿瘤药物紫杉醇、顺钼、阿霉素，RB基因和p53基因，维生素C，Fe304磁性纳米颗粒，CdSe量子点，SiO2纳米球。本专利技术中制备的大分子磷脂酰甘油纳米脂质体的粒径分布均匀，可在10_5000nm的范围内进行调节，分为单层大分子磷脂酰甘油纳米脂质体，粒径在IO-1OOOnm之间；多层大分子磷脂酰甘油纳米脂质体，粒径小于5000nm ;和多囊大分子磷脂酰甘油纳米脂质体，粒径小于5000nm。大分子磷脂酰甘油纳米脂质体具有脂质双层膜结构，磷脂酰甘油壳聚糖为膜的主体，小分子磷脂胆固醇镶嵌其中起稳定作用，其中水溶性物质被包于水相中，油溶性物质分布于双分子膜内，两亲性物质插入双分子膜。且大分子磷脂酰甘油纳米脂质体在水溶液中具有很好的物理和 化学稳定性，表现在大分子磷脂酰甘油纳米脂质体的水溶液经冷冻和80°C的高温后结构不会发生变化。大分子磷脂酰甘油纳米脂质体的Zeta电位可达50.0mV0本专利技术中制备的载有长春新碱的大分子磷脂酰甘油纳米脂质体对长春新碱的载药率可达14.8%，包封率在90.0%以上，在Tri s-HCl (pH=7.4)缓冲溶液中具有良好的缓控释功能，缓释时间在两周以上，突释现象不明显。本专利技术中制备的磁性大分子磷脂酰甘油纳米脂质体在水溶液中具有很好的分散性，几乎不发生团聚现象，粒径可达到IOOnm以下，且分布均匀，高聚物脂质体中的磁性粒子保持原Fe3O4的晶型结构，比饱和磁化强度可达40.0emu/g,具有超顺磁性，可满足磁靶向性的需要；磁性长春新碱大分子磷脂酰甘油纳米脂质体的包封率可达94.0%，在Tris-HCl(pH=7.4)缓冲溶液中具有良好的缓控释功能。本专利技术中制备的量子点标记的大分子磷脂酰甘油纳米脂质体在水溶液中分散性好，粒径可达到IOOnm以下，分布均匀，被包裹的量子点依然保持很高的荧光特性，不会发生荧光淬灭现象，且体系稳定，4°C下可保存6个月以上。本专利技术中的大分子磷脂酰甘油纳米脂质体，其特征是所述的制备方法是对大分子磷脂酰甘油纳米脂质体进行表面修饰或先制备含活性成分的前体物质再进行组装；所用的修饰剂为聚乙二醇、EGFR抗体、叶酸、三苯氧胺、转铁蛋白、甲胎蛋白、表皮生长因子EGF，血管内皮生长因子VEGF，“精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸”三肽序列RGD，成纤维细胞生长因子tbFGF,以及单克隆抗体曲妥珠单抗Trastuzumab,西妥昔单抗Cetuximab中的一种或2种以上。所制备的EGFR单克隆抗体介导的大分子磷脂酰甘油纳米脂质体在PBS缓冲溶液中可稳定存在，并可保持EGFR单克隆抗体的活性。本专利技术中所述的大分子磷脂酰甘油纳米脂质体在基因和药物载体、临床诊断治疗方面的应用。与现有产品和技术相比，本专利技术的特点在于:1.整个制备过程简单易行，条件要求不高，适合于工业化大生产要求。2.使用磷脂酰甘油壳聚糖为一种多功能的壳聚糖衍生物。其分子量在2000以上，可根据需要选择不同的分子量。3.大分子磷脂酰甘油纳米脂质体表面含有羧基和氨基等官能团，不用进行表面改性就可以连接多种靶向物质，省去了传统脂质体必须用含羧基或氨基等制剂进行修饰才能连接靶向物质的过程。4.大分子磷脂酰甘油纳米脂质体的粒径可达IOOnm以下，并可根据需要通过不同的制本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大分子磷脂酰甘油纳米脂质体，其特征在于，所述大分子脂质体是以磷脂酰甘油壳聚糖作为主膜材来代替合成磷脂，并以小分子脂质为稳定剂所制备的具有脂质双层膜结构的囊泡。

【技术特征摘要】
1.一种大分子磷脂酰甘油纳米脂质体，其特征在于，所述大分子脂质体是以磷脂酰甘油壳聚糖作为主膜材来代替合成磷脂，并以小分子脂质为稳定剂所制备的具有脂质双层膜结构的囊泡。2.如权利要求1所述大分子磷脂酰甘油纳米脂质体，其特征在于，磷脂酰甘油壳聚糖的具体特征为:重均分子量大于2000，可溶于极性有机溶剂氯仿或二氯甲烷，并含有羧基或氨基。3.如权利要求1所述大分子磷脂酰甘油纳米脂质体，其特征在于，小分子磷脂包括胆固醇、二油酰脂酰乙醇胺(DOPE)、3i3- [N-(N’，N’ - 二甲基胺乙基)胺基甲酰基]胆固醇、卵磷脂、磷脂(PC、PE、PS、P1、PG)、二硬脂酰磷脂酰胆碱、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺或棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺中的一种或2-3种，优选为胆固醇、二油酰脂酰乙醇胺或3β- [Ν-(Ν’，N’ - 二甲基胺乙基)胺基甲酰基]胆固醇。4.如权利要求1所述大分子磷脂酰甘油纳米脂质体，其特征在于，所述的水溶性、油溶性或双亲性物质包括药物、蛋白、抗体、基因、维生素、磁性颗粒、量子点、SiO2、磷酸钙无机颗粒，其中优选为抗肿瘤药物紫杉醇、顺钼、阿霉素，RB基因和ρ53基因，维生素C，Fe304磁性纳米颗粒，CdSe量子点，SiO2纳米球。5.一种制备如权利要求书I所述大分子磷脂酰甘油纳米脂质体的方法，包括以下步骤步骤为: (a)先制备磷脂酰甘油壳聚糖:取IOOmg磷脂酰甘油(PG)溶于50...

【专利技术属性】
技术研发人员：王桂荣，李国党，
申请(专利权)人：上海晟纳实业有限公司，
类型：发明
国别省市：