一种同时检测四种肿瘤标志物的化学发光试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及免疫检测技术领域，提供了一种同时检测四种肿瘤标志物的化学发光试剂盒及其制备方法，包括制备抗体包被；对第一步中ELISA板分别进行浇注、封闭、洗涤、晾干后，再保存起来待用；上样，并将ELISA板放入孵育振荡器中孵育抗体；加入试剂盒SA-HRP中；用CCD成像仪拍摄成像，并结合图像分析软件计算出图像的IDV值，根据IDV值绘制标准曲线，并且计算出样本浓度结果；运用softMax回归模型和Excel表格对样本浓度结果进行计算和统计学分析，经综合分析。本发明专利技术有效解决了工艺繁复，不利于操作，灵敏度低的问题。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及免疫检测
，提供了，包括制备抗体包被；对第一步中ELISA板分别进行浇注、封闭、洗涤、晾干后，再保存起来待用；上样，并将ELISA板放入孵育振荡器中孵育抗体；加入试剂盒SA-HRP中；用CCD成像仪拍摄成像，并结合图像分析软件计算出图像的IDV值，根据IDV值绘制标准曲线，并且计算出样本浓度结果；运用softMax回归模型和Excel表格对样本浓度结果进行计算和统计学分析，经综合分析。本专利技术有效解决了工艺繁复，不利于操作，灵敏度低的问题。【专利说明】
本专利技术涉及免疫检测
，特别涉及。
技术介绍
近年来，越来越多的证据证明了炎症反应在抑郁症疾病发生、发展过程中的作用，很多的炎性因子和相应的可溶性受体、趋化分子、粘附分子、急性期蛋白等会在抑郁症患者的外周血、脑脊液中显著上升，抑郁症的个别症状如疲劳、认知障碍及睡眠障碍等与炎性因子之间的关系也被不断报道。这些抑郁症相关的生物标志物可以用于辅助临床诊断及预后评价，将为抑郁症的客观诊断提供生物学证据。进一步经过我们应用600多份血清样本对文献报道的抑郁症相关因子进行了大样本量筛选验证，初步确定了脑源性神经营养因子、皮质醇、表皮生长因子、髓过氧化物酶、催乳素、抵抗素、可溶性肿瘤坏死因子α受体II型作为抑郁症辅助诊断的生物标志物。目前市场上有很多检测相关因子的传统的单项ELISA技术，其成熟度高，特异性好，操作简便。但通常的酶联免疫吸附ELISA检测样本时，每个检测孔一般需要100-200 μ 1，样本用量较大，另外抑郁症的生物标志物不止一个，需要多个因子的联合监测来进行诊断，在这样的情况下若仍依赖于单项ELISA检测，则样本用量过大；对每个因子单独检测来辅助抑郁症的诊断显然费时费力，且诊断成本高昂，患者一般难以承受。放射免疫分析方法RIA技术，它既具有免疫反应的高特异性，又具有放射性测量的高灵敏度，但存在放射线辐射和污染等问题，而且对检测人员的健康也构成威胁，并且，操作相对于ELISA复杂，一次检验只能测一个指标，还需要提供专门的放射性实验场所，投资高，危害大。蛋白芯片虽然能实现多个因子同时检测的功能，但由于它是把抗体包被在用于制备蛋白质芯片的基底玻片、微球或膜上，并且基底玻片和膜在使用前要经过醛基化或多聚赖氨酸等预处理，导致生产成本增加，并且后续实验操作繁琐，，重复性差，难于推广。因此，免疫检测
急需一种工艺简单，便于操作的，灵敏度高，能同时检测四种肿瘤标志物的化学发光试剂盒及其制备方法。
技术实现思路
本专利技术提供了，技术方案如下:一种同时检测四种肿瘤标志物的化学发光试剂盒，其特征在于，包括:经过镀膜处理的SA-HRP试剂盒，并且该SA-HRP试剂盒内含有用脑源性神经营养因子BDNF、表皮生长因子EGF、髓过氧化物酶ΜΡ0、和催乳素Prolactin四种抗原标被的以圆形阵列排布的酶标板、聚氧乙烯山梨醇单月桂酸单脂Tween20和牛血清白蛋白BSA抗体、稀释液、一份阳性血清对照样本、一份阴性血清对照样本、洗涤剂、处理酶、发光液。一种同时检测四种肿瘤标志物的化学发光试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤:第一步，制备抗体包被；将0.l-20ng的脑源性神经营养因子BDNF、表皮生长因子EGF、髓过氧化物酶ΜΡ0、和催乳素Prolactin分别加入0.01-0.lmol/1的磷酸盐缓冲溶液中；进一步地，用全自动点样仪提取IO-1OOnl的上述含有四种特异性因子的磷酸盐缓冲溶液，点样于用等离子处理过的ELISA板的孔中；进一步地，将点样好的ELISA板置于2_8°C的温度下包被16_24小时；第二步，对第一步中ELISA板分别进行浇注、封闭、洗涤、晾干后，再保存起来待用；首先，向PH值为7.4±0.2的磷酸盐缓冲液中，依次加入0-0.05%的聚氧乙烯山梨醇单月桂酸单脂Tween20和3%的牛血清白蛋白BSA，搅拌均匀后，向第一步中的ELISA板中浇注；向PH值为7.4±0.2的磷酸盐缓冲液中，依次加入0-0.05%的聚氧乙烯山梨醇单月桂酸单脂TWeen20和5-10%的脱脂奶粉，搅拌均匀后，向第一步中的ELISA板中浇注；进一步地，将该浇注好的ELISA板放在2-8 °C的温度下封闭放置16_24小时或者放在37°C下封闭放置2±0.5小时，或者室温封闭3±0.5小时；进一步地，用含有非离子型表面活性剂Tween20的PBS溶液对封闭好的ELISA板进行洗涤、晾干后，置于2-8°C的温度下保存待用；第三步，上样，并将ELISA板放入孵育振荡器中孵育抗体；首先，取多份病人的血清样本、I份经筛查过的正常人的阴性对照样本和I份阳性对照样本；进一步地对PH值为7.4±0.2的含有1%BSA、0.05%Tween的PBS样本稀释液进行稀释；再向稀释好的待测样本的各个反应孔中加入处理酶；进一步地，将加好溶液的ELISA板放入孵育振荡器中，在18_25°C的室温条件下反应；第四步，将稀释液加入试剂盒SA-HRP中；用含有Tween的PBS作为洗液，对第三步中反应后的ELISA板洗涤后对其进行稀释，再分别向试剂盒SA-HRP中的每个孔中加入稀释后的溶液；第五步，用CCD成像仪拍摄成像，并结合图像分析软件计算出图像的IDV值，根据IDV值绘制标准曲线，并且计算出样本浓度结果；首先,将稳定的过氧化溶液与鲁米诺Luminol或增强子Enhance以1:1混合配制成发光液；进一步地，向试剂盒SA-HRP的每个孔中加入配制好的发光液，在1_10分钟内用CCD成像仪拍摄成像；进一步地，由与CXD成像仪配套的图象分析软件将拍摄的图像处理成IDV值；进一步地，根据IDV值绘制标准曲线，并且计算出样本浓度结果；第六步，运用softMax回归模型和Excel表格对样本浓度结果进行计算和统计学分析，经综合分析，对该多份病人血清样本的检测结果为100%阳性，即敏感性为100%。如上所述的一种同时检测四种肿瘤标志物的化学发光试剂盒，其中，第一步中，用全自动点样仪点样，是将抗体探针点置在ELISA孔板内的圆形圈边上，形成圆形阵列化的捕获表面。如上所述的一种同时检测四种肿瘤标志物的化学发光试剂盒，其中，第四步中的试剂盒SA-HRP的四壁是经过镀膜处理的。本专利技术的有益效果是:1.本专利技术实现了多因子的同时检测，提高了检测效率，节约了检测成本，使患者易于接受，并且节省了样本用量，避免了因样本量不足无法完成多次单项检测的弊端。2.本专利技术对于四种特异性因子的定量检测，检测限能够达到0.lpg/ml，从而具有更高的检测灵敏度，能够定量的检测低丰度和下调表达的生物标志物。3.本专利技术将线性范围从现有的2_311og提高到了 4_511og，从而具有更宽的线性范围，宽的线性范围能够定量的检测上调和下调两种情况下的因子，能够更好的评价药效。4.本专利技术率先将圆形阵列运用到抑郁症的生物标志物检测中，将抗体探针点置在ELISA孔板内的圆形圈边上，形成圆形阵列化的捕获表面，从而获得一致性好的抗体阵列，促使了反应更加均匀、稳定，数据重复性好。5.本专利技术通过通过圆形阵列设计与板处理技术，使不同的探针位点之间具有非常高的一致性，这两种技术的结合使产品的检测数据具有非常高的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时检测四种肿瘤标志物的化学发光试剂盒，其特征在于，包括：经过镀膜处理的试剂盒，并且该试剂盒内含有用脑源性神经营养因子、表皮生长因子、髓过氧化物酶、和催乳素四种抗原标被的以圆形阵列排布的酶标板、聚氧乙烯山梨醇单月桂酸单脂和牛血清白蛋白抗体、稀释液、一份阳性血清对照样本、一份阴性血清对照样本、洗涤剂、处理酶、发光液。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：章登吉，程禹，段新伟，张波，
申请(专利权)人：点亮生物科技无锡有限公司，
类型：发明
国别省市：