用于检测被湿度损害的尿测试条的装置和方法制造方法及图纸

用于检测被分析物(例如尿样中的白血球)存在的湿气敏感性试剂的反应计时被用来检测试剂何时已经被过度的湿度损害。在尿样已经施用到测试条之后，在两个预定的时间测量试剂与被分析物之间的反应产物和红外线参比染料在特性波长的光反射率的比率，并且用于确定试剂是否已经被过度的湿度所损害。由在470和625nm的反射光来确定异常的深色样品的存在，来确认测试条被湿度所损害。

【技术实现步骤摘要】
用于检测被湿度损害的尿测试条的装置和方法本申请是国际申请日为2010年1月14日，2011年7月22日进入中国国家阶段的专利申请201080005136.1的分案申请。
本专利技术通常涉及使用湿气敏感性试剂的测试条的性能和可靠性的提高，特别是这些测试条，其用于确定尿样中被分析物的存在，例如白蛋白，蛋白质，肌氨酸酐，硝酸盐，人尿胰蛋白酶抑制剂(uristatin)，白血球酯酶(白血球)，潜隐血(红血球)，酮类，葡萄糖，胆红素，尿胆素原和本领域技术人员熟悉的其他物质。蛋白酶和蛋白酶抑制剂例如白血球酯酶(人类弹性蛋白酶)或者尿胰岛素抑制剂(微球蛋白(Bikunin)，人尿胰蛋白酶抑制剂(Uristatin))的测量的特别重要之处在于它们能指示肾或者泌尿道的感染。这些蛋白酶和蛋白酶抑制剂条依靠通过蛋白酶的蛋白水解底物的水解来产生可检测出的信号。因为该生物化学反应需要水来进行酶促水解，因此它们倾向于对湿气是敏感的，并且会通过背景反应而干扰可检测出的信号。
技术介绍
US专利5663044在此引入作为参考。该专利描述了检测白血球、酯酶或者蛋白酶领域的
技术介绍
，并且用于教导通常使用这样的组合物，其包括重氮盐，在白血球，酯酶或者蛋白酶存在下进行水解的一组酯类之一，和碱土金属。该'044专利教导了测量在大约570nm的光反射率，来确定尿样中白血球的量。将在570nm的反射率与在690nm的常规测量的反射率进行比较。该专利表明，碱土金属的存在提高了重氮盐的稳定性。它还表明碱土金属吸收了会引起背景颜色变化的湿气。经验已经表明这种试剂体系对于湿气是敏感性，和表明测试条在使用前必须保持在干燥环境中。该测试条的湿气含量应当保持低于2wt%，来避免性能降级。但是，测量测试条中的湿气不是非常精确的。特别需要非常精确地测量湿气含量，来确保测试条在密闭容器中在几年内是稳定的。使用湿气敏感性试剂的另外的例子在US专利6770764；6955921；和7001737中进行了讨论，它们在此引入作为参考。在所述的反应中，尿样中的尿胰岛素抑制剂的存在是如下来检测的：将样品加入到测试条中，该测试条含有已知量的胰岛素，胰岛素底物(即，通过胰岛素水解而产生醇的精氨酸酯)，和重氮盐。当胰岛素抑制剂存在时，它们抑制了胰岛素和底物之间的反应。这降低了重氮盐从它与酚的反应所产生的颜色，所述的酚是当该胰岛素底物与已知量的胰岛素反应时产生的。通过测量所产生的颜色，可以确定胰岛素抑制剂的存在。在US专利6316264中，将红外线(IR)染料加入到试剂条上预定的位置，来确保该条正确的排列在仪器中，所述的仪器被用于检测和/或测量施用到该条上的样品中被分析物的存在。用于该染料的IR范围宽泛地处于700-2500nm之间，但是在825-855nm范围内具有强吸光率的染料据称是优选的，并且在可见光范围(400-700nm)内的吸光率小于20%。如上所述，如果被湿气损害的尿测试条能够以提高的精度鉴别从而防止不安全的使用和来校正湿气影响结果，则它将是有利的。因为试剂(其包括蛋白水解底物的水解)对于湿气是特别敏感的，因此如果该试剂它们本身能够用于指示不期望的湿气的存在，则能够获得明显的改进。本专利技术提供了这样的方法，其将在下面更详细地描述。
技术实现思路
本专利技术应用于湿气敏感性测试条，其用于测量蛋白水解底物的水解，该蛋白水解底物用于检测蛋白酶或者蛋白酶抑制剂。一个例子见于白血球，酯酶或者蛋白酶的检测，如US专利5663044所述。另外的例子可以见于US专利6770764；6955921；和7001737所述的尿胰岛素抑制剂的检测。通常，本专利技术是一种使用湿气敏感性试剂来检测测试条中过度的湿气的方法。通过在刚刚施用样品之后测量由湿气敏感性试剂所形成的颜色或者其他响应，并且将结果与已知的红外线参比染料相比，来识别被湿气损害的试剂，该结果然后可以标记或者放弃。当通过光反射率来测量所形成的颜色时，在施用样品后即刻，将反射率比率的值(即，试剂的反射率与参比染料的反射率的比率)与短时间之后所采集的反射率比率的值进行比较，并且用于确定过度的湿度的影响，和如果试剂是被湿度损害的，则丢弃它们。可以测量第二反射率比率来确定样品是否是异常着色的，并且可以影响所述的结果。在一种优选的用于检测被湿度损害的白血球试剂的实施方案中，所述试剂包括重氮盐，例如DNSA(1-重氮基-2-萘酚-4-磺酸)，其与能水解的酯(例如PPTA(2-羟基-5-苯基-吡咯-N-甲苯磺酰基-L-丙氨酸酯))进行反应。当白血球酯酶存在于尿样中时，颜色的产生是与白血球的存在量成比例。在这种实施方案中，将在520-570nm光波长的反射率与参比染料的大约825nm特性波长的反射率进行比较。附图说明唯一的图是用于测量样品的白血球含量或者因为湿度损害而丢弃所述结果的流程图。具体实施方式本专利技术包括一种改进的方法，用于测量施用到测试条上的尿样中蛋白水解底物的水解。通常，基于蛋白水解底物的试剂可以用来检测任何的蛋白酶。该试剂中的氨基酸序列是与所检测蛋白酶优选的类型相匹配的，并且该氨基酸序列连接到信号产生部分(其通过水解形成信号)。这种原理的一个例子是检测白血球酯酶，其用于检测样品中白血球的存在，如US专利5663044所述。白血球的存在是与在试剂的特性波长的光反射率连同参考的红外线参比染料的特性波长的光反射率相关联的。所测量的反射率对比是与尿样施用到试剂后大约20s-3分钟的孵化期之后，白血球的存在相关联的。这样的测试条会被过度的湿度所损害，这会降低试剂活性和错误的显示出指示尿样中存在白血球的颜色形成。通过测量尿样施用到试剂之后的第一分钟过程中，试剂与红外线参比染料的反射率的比率，本专利技术的方法确定了试剂是否已经被过度的湿度所损害。基于蛋白水解底物的试剂还可以用于检测蛋白酶抑制剂。同样，氨基酸序列是与蛋白酶抑制剂优选的类型相匹配的，并且该序列连接到信号产生部分(其通过水解形成信号)。将该蛋白酶加入到试剂中，并且因此当抑制剂不存在于样品中时产生了信号。信号的不存在被用来确定样品中蛋白酶抑制剂的存在。这种原理的一个例子是US专利6770764；6955921；和7001737中所述的尿胰岛素抑制剂的检测。在现场护理应用中所用的条所需的小于几分钟的短时间内，蛋白水解底物的水解未达到反应终点。该水解反应持续来随着时间流逝产生信号，并且典型的动态测量来允许操作者不依赖于计时来读数。例如，可以在20和60s时测量尿中白血球反应所形成的颜色，使用在两个时间的信号的比率作为动态结果，即，表现出颜色变化率。这避免了用户必须等待整整3分钟以获得结果。本专利技术可用于其中试剂是湿气敏感性的许多形式中。即，该试剂可以在湿气存在下反应，并且错误地指示出被分析物的存在，该被分析物实际上没有存在于所测量的样品中。这样的湿气敏感性试剂的例子在上面已经提到。对本专利技术人来说，特别重要的是使用湿气敏感性试剂通过白血球中的酯酶来检测尿样中的白血球，参考下面所讨论的一种优选的实施方案。但是，很显然本专利技术的方法可以应用于其它湿气敏感性试剂，包括但不限于能够用于测量白血球存在的其它试剂。应当理解测试条可以具有许多形式，包括但不限于浸渍片(dipsticks)和侧流筒(lateralflowcart本文档来自技高网...

【技术保护点】
用测试条来测量尿样中的白血球的方法，所述测试条含有试剂，该试剂包含重氮盐和在白血球存在下进行水解的酯，所述方法计算了尿样中白血球的量，该量是作为所述重氮盐与水解的酯的反应产物在特性波长的光反射率的函数来计算的，并且参考了在预选的参考波长的光反射率，所述的反射光是在将尿样施用到所述试剂之后大约1?3分钟来测量的，改进之处包括如下来检测被湿度损害的试剂：(a)将红外线参比染料加入到所述测试条，所述的参比染料具有与所述的反应产物的特性波长相隔至少120nm的特性反射波长；(b)在将所述的尿样施用到所述试剂之后大约20s和大约60s，测量在所述的反应产物的波长和在参比染料的特性波长的光反射率；(c)对于所述的20和60s时间中每一个时间来说，计算(b)中所测量的在所述的反应产物的所述波长的所测量的反射率与所述的参比染料在测量波长的反射率的比率，并且将所述的比率称为L20和L60，(d)当?L20?L60小于第一预定值并且L20低于第二预定值时，推断出包含所述组成的底物是被湿度损害的；(e)测量在大约470和大约625nm波长的光反射率，并且计算比率470/625nm；(f)如果比率470/625nm高于第三预定值，则推断出该尿样没有着色到足以影响步骤(d)中所达到的结论；和(g)丢弃用于白血球浓度的计算值。...

【技术特征摘要】
2009.01.26 US 61/1472721.用于检测被湿度损害的测试条的方法，该测试条用于测量尿样中的白血球，所述测试条含有试剂，该试剂包含重氮盐和在白血球存在下进行水解的酯，该方法包括：(a)在将所述的尿样施用到所述试剂之后大约20s和大约60s，测量在重氮盐与水解的酯的反应产物的波长和在施加到测试条上的红外线参比染料的特性反射波长的光反射率，所述特性反射波长与所述的反应产物的特性波长相隔至少120nm；(b)对于所述的20和60s时间中每一个时间来说，计算(a)中所测量的在所述的反应产物的所述波长的所测量的反射率与所述红外线参比染料在测量波长的反射率的比率，并且将所述的比率称为L20和L60，(c)当L20-L60小于第一预定值并且L20低于第二预定值时，推断出所述测试条是被湿度损害的；(d)测量在大约470和大约625nm波长的光反射率，并且计算比率470/625nm；(e)如果比率470/625nm高于第三预定值，则推断出该尿样没有着色到足以影响步骤(c)中所达到的结论；和(f)丢弃所述测试条。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述反应产物的光反射率是在520-570nm测定的。3.根据权利要求1所述的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：CT齐默勒，MJ普日亚，
申请(专利权)人：西门子医疗保健诊断公司，
类型：发明
国别省市：