人ROR2基因突变及其用途制造技术

本发明专利技术涉及人ROR2基因突变及其用途。本发明专利技术提供了检测人ROR2基因的突变的方法，并提供了相关的检测试剂盒。本发明专利技术方法是通过测序确定SEQIDNO:1所示序列中的第2472位核苷酸（ROR2基因的第9号外显子的第887位核苷酸），检测其是否存在C→A突变。本发明专利技术研究发现，人ROR2基因（SEQIDNO:1所示序列）第2472位核苷酸发生C→A突变时，导致ROR2蛋白氨基酸序列SEQIDNO:2中S758X的改变，形成了截短的ROR2蛋白，与短指症B型疾病的发病相关。本发明专利技术可以用于短指症中B型的辅助诊断，用于发现遗传性白内障的潜在携带者，为该病的预防提供依据。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及人ROR2基因突变及其用途。本专利技术提供了检测人ROR2基因的突变的方法，并提供了相关的检测试剂盒。本专利技术方法是通过测序确定SEQIDNO:1所示序列中的第2472位核苷酸（ROR2基因的第9号外显子的第887位核苷酸），检测其是否存在C→A突变。本专利技术研究发现，人ROR2基因（SEQIDNO:1所示序列）第2472位核苷酸发生C→A突变时，导致ROR2蛋白氨基酸序列SEQIDNO:2中S758X的改变，形成了截短的ROR2蛋白，与短指症B型疾病的发病相关。本专利技术可以用于短指症中B型的辅助诊断，用于发现遗传性白内障的潜在携带者，为该病的预防提供依据。【专利说明】人R0R2基因突变及其用途
本专利技术涉及人R0R2的基因突变和分析人R0R2基因的突变的方法，以及此突变在短指症B型辅助诊断的用途。
技术介绍
短指症(Brachydactyly),又名短趾症,是一种常染色体显性遗传疾病。是指(趾)骨、掌(跖)骨发育异常导致的指(趾)骨缩短、缺如或融合的手足先天畸形。1951年，Bell根据畸形发生部位和患者受累程度的不同，将遗传性短指畸形分为A、B、C、D、E五种类型，并将A型进一步细分为A1、A2、A3三种亚型。其中短指症B型(Brachydactyly type B, BDB)是众分型中表型最严重的一种，表型独特。BDB患者2-5指远节指骨及指甲发育不良甚至缺失，中间指骨发育不良，伴有指甲的部分或完全缺失；拇指可表现正常也可呈现扁宽或末节指骨分叉畸形；足部表型与手部相似，但受累程度较轻。受体酪氨酸激酶样孤独受体2 (Tyrosine-protein kinase transmembranereceptor2, R0R2)基因为 BDBl 的主要致病基因,由 Oldridge 等于 1999 年定位于 9q22。该基因全长约235kb，共9个外显子，编码长度为943个氨基酸。它参与了早起的软骨细胞形成发育，与软骨及骨骼生长相关 OR0R2基因与其配体Wnt5a结合抑制典型的Wnt信号途径，影响胚胎发育、细胞增殖和分化调控。导致BDB的基因突变非常稀有，到目前为止，国际上共发现约10种致病突变，国内仅发现2种，均位于R0R2基因的第8、9外显子内，以无义突变或移码突变的形式导致截短蛋白或异常C-末端的产生。本专利技术以BDB家系为研究对象，结合基因测序技术及单链构象多态性技术，鉴定了 R0R2的一个新的致病突变。目前国际上还没有关于R0R2基因S758X突变导致短指症B型疾病的报道。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的在于提供一种检测人R0R2基因突变的方法；本专利技术的第二个目的在于提供用于检测人R0R2基因突变的试剂盒。本专利技术研究发现R0R2基因9号外显子第887位核苷酸C — A无义突变与BDB相关联。该突变致所编码的第758位氨基酸就由丝氨酸(TCG)变成终止密码子(TAG)，这一突变致使R0R2蛋白被截短185个氨基酸，从而使其理化性质和功能发生改变。经研究发现，与人类BDB疾病密切相关。为此，本专利技术第一方面，提供一种检测人R0R2基因的突变的方法，其包括以下步骤:(a)确定在样品中人R0R2基因编码的第758位氨基酸，或SEQ ID NO:1的第2471至2473位核苷酸；(b)检测在所述位置是否存在氨基酸S — X突变。具体地，所述的突变是在SEQ ID NO:1第2273位核苷酸C —A的突变，使得其在此处形成终止密码。本专利技术的第二方面，提供一种分离的核酸，它具有SEQ ID N0:1所示的序列，且第2472位为A，或者包括第2472位核苷酸的SEQ ID N0.1所示序列的特异性片段。进而本专利技术提供一种分子标记，其为上述SEQ ID N0.1所述的核酸序列，或者所述的特异性片段，通过该分子标记，能够判断是否存在BDB患病风险。在本专利技术的第三方面，提供用于扩增包括上述突变位点的特异性引物。例如，该引物其长度为15-50bp，且特异性地杂交并扩增出含人R0R2基因的SEQ ID NO:1所示序列中第2472位核苷酸C — A突变或者基因组R0R2基因的9号外显子第887位处的C — A突变的扩增产物。在本专利技术的第四方面 ，提供一种可与上述SEQ ID N0.1特异性杂交并检测所述突变位点的寡核苷酸探针。例如，其长度为15-50bp，且特异性地杂交并检测含人R0R2基因的SEQ ID NO:1所示序列中第2472位核苷酸C — A突变或者基因组R0R2基因的9号外显子第887位处的C — A碱基突变。在本专利技术的第五方面，提供了 BDB疾病分子诊断的试剂盒。该试剂盒包括用于人R0R2基因的第2472位核苷酸检测的试剂，或用于该基因转录的mRNA序列相应位点检测的试剂，或用于该基因表达产物相应位点检测的试剂。其可以是:1)检测基因组的PCR试剂盒；或2)检测mRNA的荧光定量PCR检测试剂盒，或Northern检测试剂盒。例如，可以包括上述的引物和/或本专利技术上述的寡核苷酸探针；或3)检测该突变蛋白的免疫检测试剂盒。本专利技术研究发现人R0R2基因的SEQ ID NO:1所示序列中第2472位核苷酸C — A突变或者基因组R0R2基因的9号外显子第887位处的C — A突变，这一突变导致R0R2蛋白氨基酸序列SEQ ID N0:2中S758X的改变，形成了截短的R0R2蛋白，与人类BDB疾病发病相关。本专利技术可以用于BDB疾病的辅助诊断，用于发现BDB疾病的潜在携带者，为该病的预防提供了依据。【专利附图】【附图说明】图1显示的是家系中对照及人群中对照的测序图(正向)，图中箭头所指为SEQ IDN0.1的第2472位，为野生型(C/C)；图2显示的是家系中患者的测序图(正向)，图中箭头所指为SEQ ID N0.1的第2472位，为突变型(C/A)；【具体实施方式】本专利技术人通过广泛而深入的研究，已经发现了人R0R2基因的突变(C.2273G > A，S758X，NM_004560.3)在一个BDB家系中呈现杂合突变，有典型的临床表现，中指骨缩短或与远端指骨融合，伴有指甲发育异常和拇指远端指骨分叉，显示这个突变可能影响到基因的功能，使骨骼发育异常，导致了 BDB的发生。已经有R0R2基因特异性敲除的小鼠模型，导致了严重的软骨发育异常并伴有其他发育异常而夭折。人R0R2基因的基因组序列为SEQ ID NO:1，编码的氨基酸序列为SEQ ID NO: 2。人R0R2的基因组序列可以从GenBank中犾得。本
的人员均知道，有许多的分析技术可以用于检测人R0R2基因的突变。这些技术包括(但不局限于)=DNA测序、杂交测序、酶促错配切割、异源双链分析、点杂交、寡核苷酸阵列(DNA芯片)、Min1-sequencing、Taqman技术、高分辨率熔解曲线(HRM)、变性的高效液相色谱(DHPLC)和分子信标等。另一方面，本专利技术的检测方法被用于评估个体对BDB的易感性。本专利技术的检测样品可以是从体液、组织甚至头发等样品中抽提的基因组DNA或mRNA ο用于本专利技术方法或检测试剂盒的引物和探针，根据R0R2基因的基因组序列(SEQID NO:1的序列)或cDNA序列进行设计，并用常规的合本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测人ROR2基因突变的方法，其包括步骤：(ａ)确定在样品中人ROR2基因编码的氨基酸序列的第758位氨基酸，或该基因的第2471至2473位碱基；（ｂ）检测在所述位置是否存在S→X的突变。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郑芳，董素芳，韩明君，宋贵波，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：