本发明专利技术提供一种抗生素PC190723抗性基因，其特征在于：其核苷酸序列为：（1）、序列表中SEQIDNo.2中核苷酸序列；（2）、与（1）中所示的核苷酸序列互补的核苷酸序列；（3）、对上述1）或2）所示核苷酸序列进行一个或多个碱基的取代、缺失、添加修饰的核苷酸序列；（4）、与（1）中所示的核苷酸序列编码相同蛋白的核苷酸序列。本发明专利技术还提供上述抗性基因的应用。当超表达本发明专利技术的抗性基因时可以帮助放线菌（例如ArthrobacterstrainA3）生存在含有PC190723的培养基中。因此利用该抗生素抗性基因可以构建出许多方便分子生物学研究与医药开发使用的商业化载体，具有很好的推广使用价值。
【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术提供一种抗生素PC190723抗性基因，其特征在于：其核苷酸序列为：（1）、序列表中SEQIDNo.2中核苷酸序列；（2）、与（1）中所示的核苷酸序列互补的核苷酸序列；（3）、对上述1）或2）所示核苷酸序列进行一个或多个碱基的取代、缺失、添加修饰的核苷酸序列；（4）、与（1）中所示的核苷酸序列编码相同蛋白的核苷酸序列。本专利技术还提供上述抗性基因的应用。当超表达本专利技术的抗性基因时可以帮助放线菌（例如ArthrobacterstrainA3）生存在含有PC190723的培养基中。因此利用该抗生素抗性基因可以构建出许多方便分子生物学研究与医药开发使用的商业化载体，具有很好的推广使用价值。【专利说明】—种抗生素PC190723抗性基因及其应用
本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种抗生素PC190723抗性基因及其应用。
技术介绍
大多数细菌都以二分裂方式进行分裂繁殖。在细菌细胞正常分裂时，细胞膜和细胞壁在细菌中部内陷并在两个新复制的染色体间形成环状复合物，膜结构的肽聚糖随后水解将细胞一份为二。在这一过程中，FtsZ蛋白在GTP的参与下最早在细胞中部聚合成环状骨架Z环，再与其他相关蛋白结合，从而引发并控制原核生物的细胞分裂过程。Z环位于细胞分裂处胞膜的内表面，受到多种调控水平的调控，同时标志着将来分裂的位置。FtsZ是最保守的细菌分裂蛋白，几乎存在于所有的细菌中。它由Rossmann折叠形成的N-端GTP酶区域和分支酸变位酶折叠的C-端GTP酶激活区域通过中心的螺旋H7和环T7相连接。FtsZ是人类微管蛋白的结构相似物，有证据表明这两种蛋白在进化上具有相关性，不过只有10%-18%蛋白质序列相似。人类微管蛋白已经是用于抗肿瘤药物设计的一个成熟祀点。然而，经典的微管蛋白抑制剂如nocodazole和paclitaxel等不能显著抑制 FtsZ聚合或GTP酶的活性。这表明，FtsZ和微管蛋白在化学结构和生物学功能等方面存在很大差异，有可能设计出选择性抑制FtsZ而不抑制人类微管蛋白的化合物。同时FtsZ和人类微管蛋白的同源性也为设计选择性抑制剂提供了有一个很好的切入点。基于FtsZ蛋白在细菌细胞分裂的重要作用，人们希望以它为靶点发现新型抗菌药物。随着基因组学、蛋白质组学及近期发展的细胞生物技术在细菌研究上的应用，对于全新抗菌药作用靶位点的研究取得了重要进展。细胞分裂是细菌繁殖的基本过程，其中关键蛋白FtsZ作为一个具有潜力的药物作用全新靶点，已有用于研发新型抗菌药物的报道。PC190723是一个于2008年报道的FtsZ抑制剂类抗生素。该抗生素是通过与FtsZ 结合抑制FtsZ聚合后的解聚过程，最终达到抑制细菌分裂的目的。该抗生素可以明显抑制耐药的金黄色葡萄球菌在小鼠体内、体外的生长，是一种新型有效的抗生素分子。
技术实现思路
本专利技术通过构建节杆菌超表达文库，利用抗生素PC190723对文库进行筛选，获得了一个该抗生素的抗性基因。当超表达该抗性基因时可以帮助放线菌(例如 ArthrobacterstYain A3)生存在含有PC190723的培养基中。PC190723是细菌分裂过程中必须蛋白FtsZ的抑制剂，自2008发现至此尚未报道过该抗生素的抗性基因，本专利技术首次发现并报道该抗性基因。由于该抗性基因较短(900bp)，而对应的抗生素较新，因此利用该抗生素抗性基因可以构建出许多方便分子生物学研究与医药开发使用的商业化载体。因而， 具有很好的推广使用价值。本专利技术提供一种抗生素PC190723抗性基因，其特征在于:其核苷酸序列为1)、序列表中SEQID N0.2中核苷酸序列；2)、与(I)中所示的核苷酸序列互补的核苷酸序列；3)、对上述I)或2)所示核苷酸序列进行一个或多个碱基的取代、缺失、添加修饰的核苷酸序列；4)、与(I)中所示的核苷酸序列编码相同蛋白的核苷酸序列。本专利技术的第二个目的是提供一种重组蛋白，其由权利要求1所述的核苷酸序列编码。本专利技术的第三个目的是提供一种重组菌，其含有权利要求2所述的重组蛋白。本专利技术的第四个目的是提供上述的抗性基因、重组蛋白或重组菌在含抗生素 PC190723的培养基中的应用。优选地，所述应用为权利要求1所述的抗性基因在放线菌中表达后，重组放线菌能在含抗生素PC190723的培养基中存活。优选地，所述应用为权利要求2所述的重组蛋白在放线菌中表达后，重组放线菌能在含抗生素PC190723的培养基中存活。优选地，所述应用为权利要求3所述的重组菌能在含抗生素PC190723的培养基中存活。优选地，所述放线菌为节杆菌A3。本专利技术通过构建`节杆菌超表达文库，利用抗生素PC190723对文库进行筛选，获得了一个该抗生素的抗性基因。当超表达该抗性基因时可以帮助放线菌(例如 ArthrobacterstYain A3)生存在含有PC190723的培养基中。PC190723是细菌分裂过程中必须蛋白FtsZ的抑制剂，自2008发现至此尚未报道过该抗生素的抗性基因，本专利技术首次发现并报道该抗性基因。由于该抗性基因较短(900bp)，而对应的抗生素较新，因此利用该抗生素抗性基因可以构建出许多方便分子生物学研究与医药开发使用的商业化载体。因而， 具有很好的推广使用价值。【具体实施方式】下面的实施例有助于本领域技术人员更全面地理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。下述实施例中所用的方法如无特别说明均为常规方法。限制性内切酶1、及丽TI，碱性磷酸酶，T4 DNA连接酶均购自NEB公司； 节杆菌超表达载体pART2由Freiburg University的Cristinel Sandu教授惠赠； 节杆菌 Arthrobacter strain A3 为市售；DNA凝胶回收试剂盒、大肠杆菌DH5 a感受态细胞购自天根生化科技(北京)有限公司。实施例1节杆菌超表达文库的构建 1、节杆菌基因组随机酶切利用限制性内切酶I IOU对75 i! g节杆菌总DNA在进行随机酶切15分钟(50 U I 的体系为:NEBufferl.1 IOX h UNEB SauJAl I u I, DNA 44y L，反应温度为 37°C )，通过琼脂糖凝胶电泳分离获得大小在0.75-2kb随机切碎的DNA片段，并通过DNA凝胶回收试剂盒对DNA进行浓缩回收。2、节杆菌超表达文库质粒的构建利用限制性内切酶及丽TI IOU对25 ii g节杆菌超表达载体pART2进行酶切2h (50 U I的体系为:NEBuffer3.1 IOX 5 u L，BamHl lul, DNA 44 u L,反应温度为 37°C )，并通过碱性磷酸酶对DNA进行去磷酸化处理lOmin，防止载体在下面的连接过程中发生自连。通过DNA 凝胶回收试剂盒对切开的载体进行回收。利用T4 DNA连接酶IOOU对步骤I中获得的节杆菌基因组随机酶切片段与步骤2 中制备获得的线性载体进行连接，16°C过夜。将连接产物通过电击转化到大肠杆菌DH5 a感受态细胞中。电击条件为:2500V、 25UF.200Q以及2mm电击杯。涂布在含有卡那霉素(20 y g/ml)的LB平板上，37°C下培养。3、抗生素PC190723抗性基因的筛选将步骤2中获得的本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种抗生素PC190723抗性基因，其特征在于：其核苷酸序列为（1）、序列表中SEQ?ID?No.2中核苷酸序列；（2）、与（1）中所示的核苷酸序列互补的核苷酸序列；（3）、对上述1）或2）所示核苷酸序列进行一个或多个碱基的取代、缺失、添加修饰的核苷酸序列；（4）、与（1）中所示的核苷酸序列编码相同蛋白的核苷酸序列。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈熙明，张昺林，张威，张满效，陈拓，刘光琇，
申请(专利权)人：中国科学院寒区旱区环境与工程研究所，
类型：发明
国别省市：
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