一种胚胎干细胞无血清培养基及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种胚胎干细胞无血清培养基及其应用，所述的培养基包含以下组分：小分子抑制剂CHIR99021、XAV939，添加物B27/N2和基础培养基DMEM/F12。本发明专利技术使用两个小分子抑制剂CHIR99021、XAV939和成分明确的B27/N2添加物取代了传统胚胎肝细胞培养基中的血清和饲养层细胞，提供了一种没有动物源物质、成份确定的胚胎干细胞培养基，实验证实该培养基不仅可以维持人胚胎干细胞的自我更新，并且能在较长时间内维持胚胎干细胞的未分化状态和全能性，且由于其成分清晰明确，所含蛋白和其他成分皆来自人源重组蛋白或化学合成，不会造成胚胎干细胞污染，故而不会激起相应免疫反应，引发免疫排斥。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种胚胎干细胞无血清培养基及其应用，所述的培养基包含以下组分：小分子抑制剂CHIR99021、XAV939，添加物B27/N2和基础培养基DMEM/F12。本专利技术使用两个小分子抑制剂CHIR99021、XAV939和成分明确的B27/N2添加物取代了传统胚胎肝细胞培养基中的血清和饲养层细胞，提供了一种没有动物源物质、成份确定的胚胎干细胞培养基，实验证实该培养基不仅可以维持人胚胎干细胞的自我更新，并且能在较长时间内维持胚胎干细胞的未分化状态和全能性，且由于其成分清晰明确，所含蛋白和其他成分皆来自人源重组蛋白或化学合成，不会造成胚胎干细胞污染，故而不会激起相应免疫反应，引发免疫排斥。【专利说明】ー种胚胎干细胞无血清培养基及其应用
本专利技术涉及胚胎干细胞的培养，具体地说，是ー种胚胎干细胞无血清培养基及其应用。
技术介绍
胚胎干细胞(Embryonic Stem Cells, ES Cells)是由早期胚胎内细胞团(Innercell mass, I CM)或原始生埴细胞(Primordial germ cells,PGCs)经体外分化抑制培养筛选出的ー种全能干细胞。胚胎干细胞的形态特征与早期胚胎细胞非常相似，具有稳定的自我更新能力，长时间体外继代培养后仍能保持正常的二倍体染色体结构；同时胚胎干细胞也有非常强的分化能力，在特定的条件培养下，它可以増殖分化为全身200多种细胞类型。因此胚胎干细胞可以提供ー种理想的生物学平台，用于科学研究与临床应用，如药物筛选、细胞发育与分化的分子调节机制研究、组织工程种子细胞及基因治疗载体的建立、细胞治疗及再生医学等。要想充分运用干细胞，首先要建立和維持好干细胞系。ES细胞的培养关键是既要維持细胞的未分化状态和潜能性，又要使其无限増殖。传统建立和維持人胚胎干细胞系的标准方法是:ESC生长在有丝分裂失活的饲养层细胞(FEEDER)上，基本培养基多为DMEM并添加胎牛血清(FCS)及白血病抑制因子(LIF)等。但是，这种培养系统中含有大量的动物源成份，如血清及饲养层细胞等。大量动物源成份的长期使用不仅增加了胚胎干细胞感染外源性病毒、病原体的危险性，还可能造成胚胎干细胞的污染。移植此种来源的胚胎干细胞，潜在的外源性病原体将感染患者，那些被污染的胚胎干细胞也有可能在患者体内诱发激发強烈的免疫反应，发生免疫排斥，这些潜在风险必将极大限制胚胎干细胞的临床应用。已有文献报道，饲养层细胞或血清产品培养的人类胚胎干细胞表达Neu5Gc，ー种非人类的唾液酸，这种被污染的人类胚胎干细胞将有很大的可能在患者体内诱发免疫反应。同吋，饲养层细胞及血清的使用还对ESC生长、増殖及分化等分子机理研究造成限制，也将给药物筛选带来干扰。另外，传统培养系统中各种复杂未知的营养成份，在长期培养过程中，也有可能会选择或改变胚胎干细胞的某些表型。因此，为了更好的利用胚胎干细胞的这ー理想的生物学平台，必须优化培养系统，建立ー个没有动物源物质、成份确定的人胚胎干细胞无血清培养基。并且该培养基既能維持胚胎干细胞的未分化状态和潜能性，又能使其无限増殖。CHIR99021和XAV939均为小分子抑制剂，它们的结构分别如下:【权利要求】1.ー种胚胎干细胞无血清培养基，其特征在于，它包含以下组分:小分子抑制剂CHIR99021、XAV939，添加物B27/N2和基础培养基DMEM/F12，所述的添加物B27/N2的组分及各组分重量比为:添加物N2 组分重室比 2.根据权利要求1所述的胚胎干细胞无血清培养基，其特征在于，所述的小分子抑制剂 CHIR99021 和 XAV939 的摩尔比为 0.8-0.95:0.95-1.08。3.根据权利要求1所述的胚胎干细胞无血清培养基，其特征在于，所述的基础培养基DMEM/F12的组分及各组分重量比为: 4.权利要求1-3任一所述的胚胎干细胞无血清培养基在培养胚胎干细胞中的应用。【文档编号】C12N5/0735GK103555660SQ201310404474【公开日】2014年2月5日 申请日期:2013年9月9日 优先权日:2013年9月9日 【专利技术者】吕万革, 郭亚楠, 陈旭, 陈刚 申请人:依科赛生物科技（太仓）有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胚胎干细胞无血清培养基，其特征在于，它包含以下组分：小分子抑制剂CHIR99021、XAV939，添加物B27/N2和基础培养基DMEM/F12，所述的添加物B27/N2的组分及各组分重量比为：。335478dest_path_image001.jpg,596695dest_path_image002.jpg

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：吕万革，郭亚楠，陈旭，陈刚，
申请(专利权)人：依科赛生物科技太仓有限公司，
类型：发明
国别省市：