ELL基因及其表达产物的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种ELL基因及其表达产物的应用，用于制备肝癌诊断及治疗的产品。本发明专利技术的ELL基因及其表达产物，可作为诊断肝癌的基因之一，使肝癌诊断更加准确、快速；本发明专利技术的ELL基因及其表达产物可作为制备治疗肝癌药物的靶基因，提供新的肝癌治疗途径。

Application of ELL gene and its expression product

The invention discloses an application of ELL gene and its expression product, and is used for preparing the product for diagnosing and treating liver cancer. The invention of ELL gene and its expression product can be used as one of the gene diagnosis of hepatocellular carcinoma, the diagnosis of liver cancer more accurately and quickly; the ELL gene of the invention and the expression of target gene products can be used as preparation for treatment of liver cancer drugs, provide new ways of treatment of liver cancer.

【技术实现步骤摘要】
ELL基因及其表达产物的应用
本专利技术涉及一种基因的应用，特别是涉及一种ELL基因及其表达产物的应用。
技术介绍
肝癌的治疗在过去20年来已取得很大的进展，外科手术切除及肝脏移植属于“根治性”治疗，仍是肝癌治疗的首要选择。随着肝癌早期诊断水平的提高及肿瘤治疗生物学概念的改变，肿瘤局部非手术治疗在肝癌治疗中的地位日益提高。经导管动脉内化疗栓塞(TACE)已成为不能切除肝癌治疗的首选方法，是中晚期肝癌治疗的重要手段。该方法可使90%以上的肝癌患者受益，但总体疗效有待提高。此外，经皮肝穿刺瘤内无水乙醇治疗(PEI)也是较常用的局部化疗方法，对癌直径<3cm的肝癌及门静脉癌栓的治疗有一定价值。但目前肝癌的化疗药物基本沿用其他肿瘤的治疗药物，针对性差，疗效不佳，因此，迫切需要寻找新的作用靶点，研究和开发肝癌特异的新药物，提高化疗的特异性和有效性。近几年来随着对肝癌基础研究的深入，生物治疗在肝癌的综合治疗中取得了较大进展，成了继手术、放疗、化疗后肿瘤治疗的第四大疗法，如免疫治疗、基因治疗，包括抗血管生成、自杀基因治疗、肿瘤疫苗治疗、siRNA技术等。但许多生物治疗的临床疗效仍不十分满意，且绝大多数还处在实验研究阶段，相关的关键理论和实验技术仍需进一步研究和发展。ELL(11_19赖氨酸富集白血病基因)是RNA聚合酶II转录延伸因子，通过阻止聚合酶转录时的暂停来增强转 录效率。首次发现是作为MLL的一个融合基因在急性髓样白血病的染色体倒位中发现的。有关ELL基因的研究文献报道较少，特别是ELL基因与肝癌的关系研究还未见文献报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题之一是提供一种ELL基因及其表达产物在制备诊断肝癌的产品中的应用。本专利技术要解决的技术问题之二是提供一种ELL基因及其表达产物在制备治疗肝癌的药物中的应用。本专利技术要解决的技术问题之三是提供一对特异扩增ELL基因的引物，该引物可用于制备用实时定量PCR诊断肝癌的产品。本专利技术要解决的技术问题之四是提供ELL基因特定编码DNA片段的测序引物，该测序引物可用于制备用DNA测序诊断肝癌的产品。本专利技术要解决的技术问题之五是提供ELL基因的siRNAs，该siRNAs可用于制备治疗肝癌的药物。外显子组测序是针对基因组中的蛋白质编码区，靶向富集外显子区域测序，以发现疾病相关遗传变异的技术。该技术近年越来越多地应用于发现人类基因组低频变异、鉴定单基因遗传病致病基因和肿瘤等复杂疾病易感基因研究，成为人类疾病相关变异研究的重要工具。为了鉴定肝癌发病过程中所发生体细胞突变的基因，本专利技术采用了外显子组测序技术分析了 10例伴有肝内门静脉癌栓的肝癌病人原位癌组织、门静脉癌栓组织及对应的癌旁组织。通过对高通量数据进行严谨的分析，过滤筛选出475个可靠的点突变。为了鉴定重要的肝癌相关基因，通过针对91个被Sanger测序方法验证具有突变的基因设计特异性siRNAs，在8株肝癌细胞株中筛选显著影响细胞生存的候选基因。ELL基因，延长因子RNA聚合酶II，为筛选出的肝癌细胞生存所必须的候选基因之一。为了解决上述技术问题，本专利技术通过如下技术方案实现:在本专利技术的一方面，提供了一种ELL基因及其表达产物在制备诊断肝癌的产品中的应用。所述诊断肝癌的产品包括:用实时定量PCR诊断肝癌的产品、用DNA测序诊断肝癌的产品。所述用实时定量PCR诊断肝癌的产品至少包括一对特异扩增ELL基因的引物。所述用DNA测序诊断肝癌的产品包括:用于ELL基因特定编码序列的测序引物。在本专利技术的另一方面，提供了一种用于制备用实时定量PCR诊断肝癌的产品中的一对特异扩增ELL基因的引物，所述引物的上游引物序列具有如SEQ ID N0:9所示的序列或其互补序列，所述 引物对的下游引物序列具有如SEQ ID NO: 10所示的序列或其互补序列。在本专利技术的另一方面，提供了一种用于制备用基因测序诊断肝癌的产品中的ELL基因特定编码序列的测序引物，所述引物的上游引物序列具有如SEQ ID N0:1所示的序列或其互补序列，所述引物对的下游引物序列具有如SEQ ID NO: 2所示的序列或其互补序列。在本专利技术的另一方面，提供了一种ELL基因及其表达产物在制备治疗肝癌的药物中的应用。所述治疗肝癌的药物包括:通过RNA干扰抑制ELL基因表达的双链核糖核酸、DNA载体、腺病毒或腺相关病毒载体，能够抑制ELL蛋白激酶活性的化合物、多肽、单克隆抗体。其中，所述治疗肝癌的药物包括:通过RNA干扰特异性抑制ELL基因表达的双链核糖核酸及其不同修饰状态、不同递送方式。所述治疗肝癌的药物包括:携带特异性针对ELL基因干扰其表达的DNA载体、病毒载体。在本专利技术的另一方面，提供用于制备治疗肝癌药物的ELL基因的两对siRNAs，分别为ELL-sil和ELL-si2。其中，ELL-sil的正义链具有如SEQ ID NO:3所示序列，ELL-sil的反义链具有如SEQ ID NO:4所示序列。ELL-si2的正义链具有如SEQ ID NO:5所示序列，ELL-si2的反义链具有如SEQ ID NO:6所示序列。本专利技术治疗肝癌的药物施用方式可以是口服、全身施用(例如，透过皮肤、鼻吸入或者用栓剂)或肠胃外施用(例如，肌肉内、静脉内或皮下)。本专利技术的药物也可被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊之类的药物，可通过常规方法进行制备。针剂、溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。在本专利技术中，可以使用一系列本领域已知的方法来制备针对ELL蛋白特异的抗体。例如，将提纯的人ELL基因产物或它的抗原片段注射入动物体内以产生多克隆抗体。同样，表达人ELL蛋白或它的抗原的细胞也可以用来对动物致免疫而产生抗体。根据本专利技术制备的抗体可以是单克隆抗体，这些单克隆抗体可用杂交瘤及时制备。本专利技术的抗体包括可以阻抑ELL功能的抗体，也可以是不影响人ELL功能的抗体。每一类抗体都可以通过对人ELL基因产物的片段或功能域致免疫而产生，而人ELL基因产物及其片段可以用重组方法产生或用多肽合成仪进行合成。与非修饰形式的ELL基因产物结合的抗体，可以利用在原核细胞例如E.coli中产生的基因产物来免疫动物而得到。与翻译后修饰形式如糖基化或磷酸化ELL蛋白或多肽结合的抗体，可以利用在真核细胞如酵母或昆虫细胞中产生的基因产物来免疫动物而得到。本专利技术中，为了实现ELL基因及其表达产物在制备诊断肝癌的产品中的应用，SPELL基因及其表达产物作为肝癌诊断标志物应用的目的，本专利技术可通过如下技术方案实现: (I)检测肝癌组织中ELL基因开放读码框(0RF)的核酸序列，其中，本专利技术中发现一例肝癌病人组织中ELL基因开放读码框(ORF)的核酸序列存在突变。(2)实时定量PCR检测ELL基因mRNA在肝癌病人癌组织及对应癌旁组织中的表达差异。而对于ELL基因及其表达产物在制备治疗肝癌的药物中的应用，即ELL基因及其表达产物作为制备肝癌治疗药物的靶点，本专利技术可通过如下技术方案实现:(I)化学合成双链核糖核酸分子，其序列特异性针对ELL基因序列，利用脂质体包裹递送至肝癌细胞内，干扰ELL基因的表达，CCK-8法测量肝癌细胞Huh-7、Focus、MHCC本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ELL基因及其表达产物的应用，其特征在于：所述ELL基因及其表达产物在制备诊断肝癌的产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.一种ELL基因及其表达产物的应用，其特征在于:所述ELL基因及其表达产物在制备诊断肝癌的产品中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于:所述诊断肝癌的产品包括:用实时定量PCR诊断肝癌的产品、用DNA测序诊断肝癌的产品。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于:所述用实时定量PCR诊断肝癌的产品至少包括一对特异扩增ELL基因的引物。4.如权利要求2所述的应用，其特征在于:所述用DNA测序诊断肝癌的产品包括:用于ELL基因的测序引物。5.—种ELL基因及其表达产物的应用，其特征在于:所述ELL基因及其表达产物在制备治疗肝癌的药物中的应用。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于:所述治疗肝癌的药物包括:通过RNA干扰抑制ELL基因表达的双链核糖核酸、DNA载体、腺病毒或腺相关病毒载体，能够抑制ELL蛋白激酶活性的化合物、多肽、单克隆抗体。7.如权利要求5所述的应用，其特征在于:所述治疗肝癌的药物包括:通过RNA干扰特异性抑制ELL基因表达的双链核糖核酸及其不同修饰状态、不同递送方式。8.如权利要求5所述的应用，其特征在于:...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓庆，韩泽广，王群，
申请(专利权)人：上海人类基因组研究中心，
类型：发明
国别省市：