本发明专利技术涉及一种环状的合成多肽A及其抗菌抗病毒应用。本发明专利技术所涉及的环状的合成多肽A具有序列列表中SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列及结构特征；该环状的合成多肽A衍生自序列列表中SEQ?ID?No.2所示中国明对虾抗脂多糖因子ALFFc的LPS结合结构域；经对本发明专利技术涉及的环状的合成多肽A进行生物功能体外验证，证实其对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌或病毒的生长或增殖均具有很强的抑制作用。
A cyclic synthetic polypeptide A and its antibacterial and antiviral applications
The present invention relates to a cyclic synthetic polypeptide A and its antibacterial and antiviral applications. The synthesis of cyclic peptide A of the invention has a list of sequences in SEQ? ID? Amino acid sequence and structure characteristics shown in the No.1; the cyclic A peptide sequence derived from the list of SEQ? ID? No.2 shows China shrimp anti lipopolysaccharidefactor ALFFc LPS binding domain; the synthetic peptide A the present invention relates to the ring of the biological function in vitro validation, confirmed the gram positive and gram negative bacteria or virus growth or proliferation have very strong inhibition.
【技术实现步骤摘要】
一种环状的合成多肽A及其抗菌抗病毒应用
本专利技术涉及一种环状的合成多肽A及其抗菌抗病毒应用，具体地说是一种合成的衍生自中国明对虾抗脂多糖因子ALFFc的脂多糖(LPS)结合结构域的环状多肽及其抗菌抗病毒应用。
技术介绍
对虾的养殖在我国的水产养殖业中占有重要地位，近些年来，对虾养殖过程中的病害问题已经严重阻碍了其养殖生产的健康发展，抗生素的滥用与环境的恶化使海水养殖动物的病害难以从根本上得到控制。抗菌肽(蛋白)被认为是鱼、虾、贝等防御细菌、病毒等外源病原感染的重要效应分子，在动物的先天免疫过程中发挥重要作用。目前从甲壳动物中发现的抗菌肽种类繁多，抗脂多糖因子(ant1-lipopolysaccharide factor, ALF)就是其中一种重要的抗菌肽。1982年，Tanaka 等首次从中国當(Tachypleus tridentatus)和北美當(Limulus polyphemus)的血细胞中分离得到ALF，并发现其能抑制LPS介导的凝血反应的激活。1985年，Morita等发现ALF还具有很强的抗革兰氏阴性菌活性。之后，人们相继在斑节对虾(Penaeusmonodon)、中国明对虫下(Fenneropenaeus chinensis)、臼本囊对虫下(Marsupenaeusjaponicus)、凡纳滨对虫下(Litopenaeus vannamei)> 桃红对虫下(Farfantepenaeusduorarum)等多种甲壳动物中发现ALF基因的存在,并证实ALF的重组蛋白具有广泛的抗革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌生长的活性。另外，研究还发现对虾白斑综合征病毒(WSSV)预先与重组表达的ALF蛋白一起孵育后再注射入虾体中，能抑制注入虾体中WSSV的复制。与传统抗生素的作用机理不同，ALF直接中和细菌细胞壁的脂多糖，溶解细菌，因此不易产生细菌的耐药性。ALF对病毒的作用机理目前仍不清楚。随着抗生素的应用，许多病原菌对现有抗生素逐步产生耐药性，而新型抗生素的发现又极其困难，因此，ALF的研究为开发新型抗菌药物开辟了广阔的前景。研究发现，ALF氨基酸序列中的两个保守半胱氨酸之间形成二硫键，并与之间的氨基酸序列共同形成一段阴离子多肽，具有与LPS结合的能力，这段保守的结构命名为LPS结合结构域，被认为是ALF降解革兰氏阴性菌细胞壁脂多糖的功能域。2011年，Sachin Sharma等研究了根据锯缘青蟹(Scylla serrata) ALF的LPS结合结构域合成的具24个氨基酸残基的多肽在抗菌免疫过程中作用，发现合成多肽SsALF24具有结合LPS的活性并且对大肠杆菌都具有明显的抑制作用，其最小抑制浓度为16.16~32.32uM (Sharma S, Yedery RD, Patgaonkar MS, Selvaakumar C，Reddy KV.Antibacterialactivity of a synthetic peptide that mimics the LPS binding domain of Indianmud crab, Scylla serrata ant1-lipopoIysaccharide factor (SsALF)also involved inthe modulation of vaginal immune functions through NF_kB signaling.Microbialpathogenesis2011;50:179-191.)。中国明对虾中的ALF已被发现，研究表明其在对虾体内响应细菌的感染(LiuFS, Liu YC, Li FH, Dong B,Xiang JH.Molecular cloning and expression profileof putative antilipopoIysaccharide factor in Chinese shrimp(Fenneropenaeuschinensis).Marine Biotechnology2005; 7:600-608.)。基于已有的研究结果，本专利技术依据中国明对虾ALFFc的推导氨基酸序列，利用化学合成的方法获得了 LPS结合结构域的环形多肽A，该环状多肽显示出明显的抗菌和抗病毒生物学活性，具有重要的应用前景。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种来源于对虾的环状的合成多肽A，具有明显的抗菌和抗病毒活性。本专利技术的技术方案如下:利用化学合成的方法获得了环状的合成多肽A，具有SEQ ID N0.1所示的氨基酸序列，其序列特征为:SEQ ID N0.1:Ac-Ec (CKFTVKPYIKRFQLYYKGRMWC)P-NH2所述的环状的合成多肽A序列具有二硫键结构。其结构特征在于:合成多肽A序列氨基端第二个半胱氨酸(C)和羧基端第二个半胱氨酸(C)之间具有二硫键结构；多肽的氨基端E的氨基被乙酰化(Ac-)，羧基端P的羧基被酰胺化(-NH2)。所述的环状的合成多肽A来自中国明对虾抗脂多糖因子ALFFc的LPS结合结构域。ALFFc的特征在于:具有序列列表中SEQ ID N0.2所示的氨基酸序列。所述的环状的合成多肽A具有明显的抗菌抗病毒活性。具体为:对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌及病毒的生长或增殖均具有很强的抑制作用。所述环状的合成多肽A可作为抗菌和/或抗病毒的活性成份，可用于制备抗菌和/或抗病毒的药物或制剂中。本专利技术有如下优点:1、本专利技术确定了一种衍生自中国明对虾抗脂多糖因子ALFFc的抗菌抗病毒多肽A及其结构特征。2、通过本专利技术可开发有效的对虾细菌类和病毒类疾病的防治药物。【附图说明】图1合成多肽A的骨架结构图；图2合成多肽A的空间结构图；图3合成多肽A的HPLC纯度检测图；图4合成多肽A的MS质谱鉴定图。【具体实施方式】下面结合实施例对本专利技术作进一步详细说明。一种化学合成的具有明显抗菌和抗病毒活性的对虾环状多肽A，其序列及来源序列信息如下:(I) SEQ ID N0.1 的信息(a)序列特征*长度:24氨基酸*类型:氨基酸*链型:单链*拓扑结构:环形，两个半胱氨酸之间形成二硫键*空间结构:具有I)图1所示骨架结构:两个半胱氨酸之间通过二硫键相连接，形成环状结构，其中二硫键用加深黑色表示，C骨架及其它原子用灰色表示；和2)图2所示空间结构:多肽序列形成两个相连的β折叠结构。(b)分子类型:蛋白序列描述:SEQID N0.1Ac-Ec(CKFTVKPYIKRFQLYYKGRMWC)P-NH2其中括号内的氨基酸为成环的氨基酸，括号外左侧的小写c表示括号内的氨基酸为形成环状结构氨基酸；Ac-表示氨基酸E的氨基被乙酰化；-NH2表示氨基酸P的羧基被乙酰化。(2) SEQ ID N0.2 的信息(a)序列特征*长度:123氨基酸*类型:氨基酸*链型:单链*拓扑结构:线性(b)分子类型:蛋白序列描述:SEQID N0.2MRVSVLASLVLVVSLVALFAPQCQAQGWEAVAAAVASKIVGLWRNEKTELLGHECKFTVKPYIKRFQLYYKGRMWCPGffT AIRGEASTRSRSGVAGRTAKDFVRKAFQQGLISQQQANQffLNS所述抗菌抗病毒本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种环状的合成多肽A，其特征在于：具有序列列表中SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列。
【技术特征摘要】
1.一种环状的合成多肽A，其特征在于:具有序列列表中SEQ ID N0.1所示的氨基酸序列。2.按照权利要求1所述的环状的合成多肽A，其结构特征为: 所述的环状的合成多肽A序列具有二硫键结构，多肽A的氨基端第二个半胱氨酸(C)和羧基端第二个半胱氨酸(C)之间具有二硫键结构。3.按照权利要求1或2所述的环状的合成多肽A，其序列特征在于:SEQID N0.1:Ac-Ec(CKFTVKPYIKRFQLYYKGRMWC)P-NH2。4.按照权利要求1或2所述的环状的合成多肽A，其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员：李富花，李诗豪，郭书悦，相建海，
申请(专利权)人：中国科学院海洋研究所，
类型：发明
国别省市：
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