一种水溶性药物脂质体制备方法技术

本发明专利技术公开了一种简单有效的水溶性药物的脂质体制备方法，该方法是将磷脂、胆固醇和亲水聚合物修饰的脂类溶解于有机溶剂中，形成脂相，然后通过小孔三通装置高速注入水相，形成粒度均一的空白脂质体，进行孵育，最后采用主动载药法得到脂质体。使用该方法制备得到的脂质体具有较高的包封效率。

Preparation method of water-soluble medicine lipid

The invention discloses a preparation method of a kind of simple and effective water soluble drug liposome, the phospholipid, cholesterol and hydrophilic polymer modified lipid dissolved in organic solvent, the formation of lipid phase, and then through the hole three through the device of high speed injection water, forming a body size of blank liposomes were incubated. Finally, by active loading method by liposome. The liposomes prepared by this method have higher encapsulation efficiency.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种简单有效的水溶性药物的脂质体制备方法，以及由该方法制得的脂质体，及其在制备用于治疗肿瘤疾病的药物中的用途。
技术介绍
恶性肿瘤是世界上死亡率排名第一的疾病，药物化疗是最常用的一种肿瘤治疗方式。目前临床上应用的抗肿瘤药物众多，大致可分为细胞毒类、激素类、生物反应调节剂、单克隆抗体以及其他抗肿瘤药物这五类。其中细胞毒类药物占市场份额最大，其按照作用机制可以分为以下五类:(1)直接破坏DNA并阻止其复制的药物，如:烷化剂、钼类、喜树碱类；[2]影响核酸生物合成的药物，如:甲氨蝶呤、氟尿嘧啶等；(3)作用于核酸转录的药物，如:多柔比星、表阿霉素、米托蒽醌等；(4)影响蛋白质合成的药物，如:紫杉烷类、长春碱类；(5 )其他细胞毒药物。以上细胞毒类药物虽然疗效显著，但由于选择性较差，并且给药后在机体内非特异性分布，通常具有较为严重的临床毒性，如骨髓抑制、消化道反应、脱发等，对患者的身心健康产生极为不利的影响。脂质体是避免抗肿瘤药物毒副作用的最好的方式之一，其作为抗肿瘤药物的载体可以使药物特异性的靶向肿瘤区并滞留于其中缓慢释放，减少在正常组织中的分布，从而起到减毒、增效的作用。脂质体的适宜粒度是脂质体得以向肿瘤区靶向的主要原因，也是控制药物从脂质体中释放的关键因素。得到粒度合适并且分布均匀的脂质体，是脂质体制剂研究者的共同理想。自1965年Bangham发现脂质体以来，已经发展了近几十种脂质体制备技术，目前比较常用的有薄膜分散法、反相蒸发法、注入法、复乳法、冷冻干燥法等。以上这些制备技术大多只适用于实验室的研究工作，能够产业化的并不多，并且以上制备方法的共同特点是最初形成的脂质体为多室脂质体，需要经过整粒步骤才能获得理想粒径的单室脂质体，即脂质体的形成和粒度的降低分两步进行。目前应用较为广泛的的整粒方法包括超声法、挤出法和均质法，该三种方法均需配备专用的设备，价格高昂，且各有优缺点和适用范围。其中超声法和均质法适合制备小粒径脂质体，但该两种方法产生热量较高，容易导致生物大分子和一些敏感药物分解，且超声探头在高频震动下极易掉屑，造成体系的污染。挤出法适合制备较大粒径(通常大于80nm)的脂质体，因为当使用小孔径滤膜时挤出压力非常大，有时高达15(T500psi，并且挤压速率非常低，操作过程很容易堵膜，导致挤出无法继续。美国专利US6843942提供了一种简单易行的脂质体制备方法，以下简称为“小孔三通法”，使脂质体的形成和粒度降低合并为一步。该方法设计了一种特殊的装置，该装置包括一条传输极性水相的管路，一条传输含脂有机相的管路和一个将水相管路和含脂有机相管路按垂直方向以小孔连接起来的元件(下面简称为小孔三通)。该制备方法的原理为脂相乙醇溶液通过小孔被高速注射到与它流动方向垂直的水相溶液中，形成非常小的脂相液滴，随后乙醇迅速扩散，导致磷脂聚集形成闭合的双分子层，即脂质体。专利技术人将重组人超氧化物歧化酶(rh-SOD)的磷酸盐缓冲溶液(PBS溶液)作为水相，将二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、胆固醇、硬脂酰胺的乙醇溶液作为有机相，两相溶液加压通过小孔三通后，即可形成粒径分布均匀的载药脂质体，包封率为87.5-90.5%。上述专利采用被动载药法一步完成了脂质体的形成、整粒和载药，虽简单快捷，但包封率不高，其原因在于rh-SOD为水溶性药物，脂质体形成初期未包裹于脂质体内的药物可以良好的分散于脂质体外的溶液中，脂质体形成后药物也无法进行跨膜转运而进入脂质体内部。由于我们所关心的药物为水溶性抗肿瘤药物，如盐酸多柔比星、盐酸米托蒽醌、酒石酸长春瑞滨和盐酸拓扑替康等，为更好的降低毒性考虑，该类药物脂质体的包封率通常要求大于90% (如楷莱标准)，因此该专利所述的被动载药的脂质体制备方法并不理想。
技术实现思路
本专利技术提供一种新的脂质体制备方法，该脂质体含有作为活性成分的水溶性药物和脂质体的双分子层，双分子层含有一种或多种磷脂、胆固醇和一种或多种亲水聚合物修饰的脂类，该方法的特征在于先采用小孔三通装置制备空白脂质体，然后采用主动载药法完成药物装载。该方法包括如下步骤:(1)将磷脂、胆固醇和亲水聚合物修饰的脂类溶解于有机溶剂中，形成脂相，然后通过小孔三通装置高速注入水相，形成粒度均一的空白脂质体；(2)将形成的空白脂质体进行孵育；(3)采用硫酸铵梯度法、pH梯度法、络合梯度法等主动载药法完成药物装载。其中所述水溶性药物为抗肿瘤药。其中所述抗肿瘤药为盐酸多柔比星、盐酸米托蒽醌、酒石酸长春瑞滨或盐酸拓扑替康的一种或多种。其中步骤(2)的孵育在40-70°C进行。其中步骤(2)的孵育需进行20-60分钟。其中小孔三通的孔径为0.05-1.5mm，优选0.2-0.5mm。其中所述磷脂选自卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、双肉豆蘧酸卵磷脂、双软脂酸卵磷脂或双硬脂酸卵磷脂或者其任意组合。其中所述亲水聚合物修饰的脂类选自聚乙二醇修饰的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇修饰的二硬脂酰磷脂酰甘油、聚乙二醇修饰的胆固醇、聚维酮修饰的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚维酮修饰的二硬脂酰磷脂酰甘油、聚维酮修饰的胆固醇或者其任意组合。其中所述水相溶液选自乳糖、麦芽糖、蔗糖、葡萄糖或海藻糖水溶液。本专利技术还提供一种脂质体药物制剂，其特征在于含有按照上述方法得到的脂质体，和药学上可接受的载体和/或赋型剂。该脂质体药物制剂还含有改变渗透压的盐、缓冲物质和/或抗氧剂。本专利技术还提供上述脂质体药物制剂在制备用于治疗肿瘤患者的药物中的用途。虽然上述美国专利US6843942提供了一种简单易行的脂质体制备方法(小孔三通法)，其中采用被动载药法装载药物；并且现有技术已教导使用主动载药法可以使水溶性药物获得更高的包封率。这似乎启示我们可以将小孔三通法和主动载药法结合以制备水溶性药物的脂质体，但本专利技术的专利技术人发现，这种结合——首先采用简单易行的小孔三通法制备空白脂质体，然后采用主动载药法进行药物的装载一一却并未如所愿的那样获得较高的包封效率。本专利技术的专利技术人通过调整三通孔径，脂相浓度，亲水性聚合物修饰的磷脂的含量，脂相和水相溶液的流速，制备得到粒径范围为5 O -12 O nm，粒径的多分散指数(P DI)小于0.16的空白脂质体。将得到的空白脂质体采用硫酸铵梯度法装载多柔比星、米托蒽醌、长春瑞滨和拓扑替康，最优处方的包封率均大于95%。采用同样处方对比挤出法、均质法制备的多柔比星和米托蒽醌脂质体时观察到一个现象，当药脂比提高时，小孔三通法制备的脂质体包封率下降；而采用挤出法制备得到的脂质体的包封率随药脂比变化不大。采用进口盐酸多柔比星脂质体(楷莱)的标准测定多柔比星脂质体的体外释放率，结果显示小孔三通法制备的脂质体3小时释放率不符合标准；而挤出法、均质法制备得到的多柔比星脂质体的体外释放率则符合标准。由此看出，小孔三通法虽然简单易行，但对于装载水溶性药物却存在着明显的缺陷。本专利技术的专利技术人分析小孔三通法脂质体的形成过程，认为由于脂质体瞬间形成，因此脂膜很可能水化不完全，从而导致用该方法制备得到的脂质体的包封率和释放均与挤出法不同。专利技术人出乎意料的发现，在三通制备脂质体后载药前增加一个孵育的步骤，结果显示高药脂比时脂质体的包封率与挤出法一致，仍然能达到95%以上，并且其释放结果本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脂质体制备方法，该脂质体含有作为活性成分的水溶性药物和脂质体的双分子层，双分子层含有磷脂、胆固醇和亲水聚合物修饰的脂类，该方法的特征在于包括如下步骤：（1）将磷脂、胆固醇和亲水聚合物修饰的脂类溶解于有机溶剂中，形成脂相，然后通过小孔三通装置注入水相溶液，形成粒度均一的空白脂质体；（2）将形成的空白脂质体进行孵育；（3）采用主动载药法完成药物装载。

【技术特征摘要】
1.一种脂质体制备方法，该脂质体含有作为活性成分的水溶性药物和脂质体的双分子层，双分子层含有磷脂、胆固醇和亲水聚合物修饰的脂类，该方法的特征在于包括如下步骤:(I)将磷脂、胆固醇和亲水聚合物修饰的脂类溶解于有机溶剂中，形成脂相，然后通过小孔三通装置注入水相溶液，形成粒度均一的空白脂质体；(2)将形成的空白脂质体进行孵育；(3)采用主动载药法完成药物装载。2.根据权利要求1所述的脂质体制备方法，其特征在于所述水溶性药物为抗肿瘤药。3.根据权利要求2所述的脂质体制备方法，其特征在于所述抗肿瘤药为盐酸多柔比星、盐酸米托蒽醌、酒石酸长春瑞滨或盐酸拓扑替康的一种或多种。4.根据权利要求1所述的脂质体制备方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：张兰，高玉清，王艳玲，李彦辉，李春雷，
申请(专利权)人：石药集团中奇制药技术石家庄有限公司，
类型：发明
国别省市：